一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法技术

本发明专利技术公开了一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法，包括以下步骤：步骤1：分别配置质量浓度为8%的PEG水溶液和质量浓度8%的Dex水溶液；充分混合后分相，上相为PEG溶液，下相为Dex溶液；步骤2：Dex溶液中加入海藻酸钠和目标酶溶液，形成含目标酶的Dex‑海藻酸钠溶液，其中海藻酸钠的质量浓度为0.5%；步骤3：以步骤1制备得到的PEG溶液为外水相，以步骤2得到的含目标酶的Dex‑海藻酸钠溶液为内水相，通过同轴毛细管在其锥尖处形成双水相海藻酸钠液滴；步骤4：将双水相海藻酸钠液滴导入PEG‑氯化钙水溶液中即生成载酶海藻酸钙微球，通过自发“排液”分区，使得酶促反应在海藻酸钙微球界面进行，缩短了中间产物的传质距离，强化了级联酶促反应。本发明专利技术构建了一种制备方法简单、生物相容性高且高效的级联酶促反应强化体系。

A method of enzyme-loaded calcium alginate microsphere enhanced cascade enzymatic reaction based on aqueous two-phase system

【技术实现步骤摘要】
一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法
本专利技术涉及强化酶促反应
，具体涉及一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法。
技术介绍
近年来，随着酶工业的日益发展，强化酶促反应的研究受到越来越多的关注。目前，已经有固定化酶技术能通过增强酶的稳定性和重复利用率来实现强化酶促反应。海藻酸钙微球由于具有良好的生物兼容性以及无毒性等特点，是常用的固定化酶载体。但是，普通载酶海藻酸钙微球内部传质速率慢，酶的滞留率低，并且大部分海藻酸钙微球的制备过程中引入了油相和表面活性剂，会降低微球的生物相容性(Marcoux,ColloidsandSurfacesA:PhysicochemicalandEngineeringAspects,2011,377,54)，使得该固定化酶技术成本损耗大，固定化过程中酶活有一定损失。双水相催化技术是另一种新型的强化酶促反应技术。其利用两种不同高聚物的水溶液或一种高聚物和一种无机盐的水溶液，因其浓度不同而形成互不相溶的两液相体系。调整浓度将反应物和生物催化剂分配于下相，产物分配本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1：分别配置质量浓度为8％的PEG水溶液和质量浓度8％的Dex水溶液；充分混合后分相，上相为PEG溶液，下相为Dex溶液；/n步骤2：Dex溶液中加入海藻酸钠和目标酶溶液，形成含目标酶的Dex-海藻酸钠溶液，其中海藻酸钠的质量浓度为0.5％；/n步骤3：以步骤1制备得到的PEG溶液为外水相，以步骤2得到的含目标酶的Dex-海藻酸钠溶液为内水相，通过同轴毛细管在其锥尖处形成双水相海藻酸钠液滴；/n步骤4：将步骤3得到的双水相海藻酸钠液滴导入PEG-氯化钙水溶液中即生成载酶海藻酸钙微球。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：分别配置质量浓度为8％的PEG水溶液和质量浓度8％的Dex水溶液；充分混合后分相，上相为PEG溶液，下相为Dex溶液；
步骤2：Dex溶液中加入海藻酸钠和目标酶溶液，形成含目标酶的Dex-海藻酸钠溶液，其中海藻酸钠的质量浓度为0.5％；
步骤3：以步骤1制备得到的PEG溶液为外水相，以步骤2得到的含目标酶的Dex-海藻酸钠溶液为内水相，通过同轴毛细管在其锥尖处形成双水相海藻酸钠液滴；
步骤4：将步骤3得到的双水相海藻酸钠液滴导入PEG-氯化钙水溶液中即生成载酶海藻酸钙微球。


2.采用如权利要求1的基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法，其特征在于，将步骤4得到的载酶海藻酸钙微球加入PEG-葡萄糖溶液中即可发生联酶促反应。


3.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤1中PEG水溶液和Dex水溶液通过旋转培养器充分混合，静置12小时后分相。


4.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球制备方法，其特征在于，所述步骤2中的目标酶为葡萄糖氧化酶和辣根过氧化...

【专利技术属性】
技术研发人员：王垚磊，刘刚，金林琦，刘甜甜，孙鹤家，孟涛，
申请(专利权)人：西南交通大学，
类型：发明
国别省市：四川;51