本发明专利技术涉及一种高危型人乳头瘤病毒的检测和分型试剂盒及其应用。揭示了一类特别适合于诊断高危型人乳头瘤病毒(HPV)以及分型的检测试剂，所述检测试剂经过合理的设计、优选而获得，能够达到2管PCR分型16种HPV，用于PCR扩增，具备成本低、通量高，检测程序简单易操作的特点。本发明专利技术人还优化了PCR扩增反应程序，进一步提高了扩增效率。
【技术实现步骤摘要】
一种高危型人乳头瘤病毒的检测和分型试剂盒
本专利技术涉及一种高危型人乳头瘤病毒的检测和分型试剂盒，属于基因检测
技术介绍
人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)根据致癌性分为高危型和低危型。子宫颈癌主要由高危型HPV持续感染所致，在99.7％的子宫颈癌中都可检测到高危型HPV。此外，高危型HPV还可导致肛门、阴道、外阴、阴茎、头颈等部位的癌症。低危型HPV可引起肛门-生殖器疣和复发性呼吸道乳头瘤等疾病。2017年，世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)立场文件显示，HPV感染与全球约4.5％的癌症新发病例相关。国际癌症研究署(InternationalAgencyforResearchonCancer，IARC)公布的结果显示，2018年全球估计有近57万女性新患子宫颈癌，31万余女性死于子宫颈癌；其中，我国子宫颈癌新发病例近11万人，死亡病例近5万人。子宫颈癌已成为严重威胁女性健康的公共卫生问题。关于高危型与低危型的划分，国际上许多机构都给出了参考建议，依据WHO国际癌症研究机构(IARC)及其他国际组织的研究成果，将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种基因型列为高危型别，26、53、66、73、82等5种基因型列为中等风险型别，其中26型和73型在我国发病率很低。对HPV进行分型检测可以预测受检者的发病风险度，决定其筛查间隔；可以区分持续感染和一过性感染，以便及早进行治疗，以降低发生率和死亡率；用于手术后的追踪，确定是否将病灶清除干净，便于治疗后的随访；指导HPV疫苗的研究及使用。HPV的检测技术主要有如下几种：(1)基于细胞学技术：典型代表技术为液基薄层细胞学技术(TCT)，此类技术操作简单、价格低廉、适宜作初步筛查，但应用细胞病理学检测HPV存在灵敏度低、特异性差、且无法进行HPV分型检测；(2)基于免疫学技术：感染组织中HPV蛋白的检测，针对HPV抗原(主要是衣壳蛋白制备抗体)通过免疫学方法进行检测，如ELISA、免疫沉淀法等，此类方法原理明确、操作简单，但由于HPV至今尚不能在体外培养，且其免疫原型较弱，导致血清学方法检测灵敏度低；(3)基于基因检测技术：原位杂交法、杂交捕获法、流式荧光杂交法以及荧光定量PCR检测方法等。原位杂交法应用组织或细胞在病理切片上和分子探针进行HPVDNA杂交，可同时观察组织学形态变化及HPV表达的状况，是理想的病理学检测及研究方法。但操作较复杂，不适于大规模普查。杂交捕获法原理是利用对抗体捕获信号放大和化学发光的检测。第二代杂交捕获法可检测13种高危型HPV。此种方法具有良好的灵敏度和特异性，但其存在交叉污染、费用昂贵、且不便于HPV分型等缺点。荧光定量PCR检测方法不仅可以对HPV阳性感染进行确诊，还可以进行HPV分型。然而目前市面的主流产品一类为单管反应，仅能区分16型和18型，不能区分更多分型。另一类能够区分所有高危型别，但是需要至少4管反应，导致通量受限，且成本较高。综上，本领域还需要进一步开发通量更高、成本更低的分型试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种2管(A/B管)反应完成16种高中危型人乳头瘤病毒的分型试剂盒及其应用。一种高危型人乳头瘤病毒的检测和分型试剂盒，包括有检测引物对以及探针；所述的检测引物对和探针是用于对以下16种高中危型人乳头瘤病毒的分型：HPV16、HPV18、HPV39、HPV53、HPV31、HPV45、HPV68、HPV56、HPV33、HPV51、HPV35、HPV66、HPV58、HPV82、HPV59和HPV52；所述的检测引物选自第一引物组合或者第二引物组合；所述的第一引物组合中，包括以下引物：特异性扩增人乳头瘤病毒16型的上游引物SEQIDNO:17，下游引物SEQIDNO:18；特异性扩增人乳头瘤病毒18型的上游引物SEQIDNO:19，下游引物SEQIDNO:20；特异性扩增人乳头瘤病毒31型的上游引物SEQIDNO:21，下游引物SEQIDNO:22；特异性扩增人乳头瘤病毒33型的上游引物SEQIDNO:23，下游引物SEQIDNO:24；特异性扩增人乳头瘤病毒35型的上游引物SEQIDNO:25，下游引物SEQIDNO:26；特异性扩增人乳头瘤病毒39型的上游引物SEQIDNO:27，下游引物SEQIDNO:28；特异性扩增人乳头瘤病毒45型的上游引物SEQIDNO:29，下游引物SEQIDNO:30；特异性扩增人乳头瘤病毒51型的上游引物SEQIDNO:31，下游引物SEQIDNO:32；特异性扩增人乳头瘤病毒52型的上游引物SEQIDNO:33，下游引物SEQIDNO:34；特异性扩增人乳头瘤病毒53型的上游引物SEQIDNO:35，下游引物SEQIDNO:36；特异性扩增人乳头瘤病毒56型的上游引物SEQIDNO:37，下游引物SEQIDNO:38；特异性扩增人乳头瘤病毒58型的上游引物SEQIDNO:39，下游引物SEQIDNO:40；特异性扩增人乳头瘤病毒59型的上游引物SEQIDNO:41，下游引物SEQIDNO:42；特异性扩增人乳头瘤病毒66型的上游引物SEQIDNO:43，下游引物SEQIDNO:44；特异性扩增人乳头瘤病毒68型的上游引物SEQIDNO:45，下游引物SEQIDNO:46；特异性扩增人乳头瘤病毒82型的上游引物SEQIDNO:47，下游引物SEQIDNO:48；所述的第二引物组合中，包括以下引物：特异性扩增人乳头瘤病毒16型的上游引物SEQIDNO:49，下游引物SEQIDNO:50；特异性扩增人乳头瘤病毒18型的上游引物SEQIDNO:51，下游引物SEQIDNO:52；特异性扩增人乳头瘤病毒31型的上游引物SEQIDNO:53，下游引物SEQIDNO:54；特异性扩增人乳头瘤病毒33型的上游引物SEQIDNO:55，下游引物SEQIDNO:56；特异性扩增人乳头瘤病毒35型的上游引物SEQIDNO:57，下游引物SEQIDNO:58；特异性扩增人乳头瘤病毒39型的上游引物SEQIDNO:59，下游引物SEQIDNO:60；特异性扩增人乳头瘤病毒45型的上游引物SEQIDNO:61，下游引物SEQIDNO:62；特异性扩增人乳头瘤病毒51型的上游引物SEQIDNO:63，下游引物SEQIDNO:64；特异性扩增人乳头瘤病毒52型的上游引物SEQIDNO:65，下游引物SEQIDNO:66；特异性扩增人乳头瘤病毒53型的上游引物SEQIDNO:67，下游引物SEQIDNO:68；特异性扩增人乳头瘤病毒56型的上游引物SEQIDNO:69，下游引物SEQI本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高危型人乳头瘤病毒的检测和分型试剂盒，包括有检测引物对以及探针；其特征在于，所述的检测引物对和探针是用于对以下16种高中危型人乳头瘤病毒的分型：HPV16、HPV 18、HPV 39、HPV 53、HPV 31、HPV 45、HPV 68、HPV 56、HPV 33、HPV 51、HPV 35、HPV 66、HPV 58、HPV 82、HPV 59和HPV 52；/n所述的检测引物选自第一引物组合或者第二引物组合；/n所述的第一引物组合中，包括以下引物：/n特异性扩增人乳头瘤病毒16型的上游引物SEQ ID NO:17，下游引物SEQ ID NO:18；/n特异性扩增人乳头瘤病毒18型的上游引物SEQ ID NO:19，下游引物SEQ ID NO:20；/n特异性扩增人乳头瘤病毒31型的上游引物SEQ ID NO:21，下游引物SEQ ID NO:22；/n特异性扩增人乳头瘤病毒33型的上游引物SEQ ID NO:23，下游引物SEQ ID NO:24；/n特异性扩增人乳头瘤病毒35型的上游引物SEQ ID NO:25，下游引物SEQ ID NO:26；/n特异性扩增人乳头瘤病毒39型的上游引物SEQ ID NO:27，下游引物SEQ ID NO:28；/n特异性扩增人乳头瘤病毒45型的上游引物SEQ ID NO:29，下游引物SEQ ID NO:30；/n特异性扩增人乳头瘤病毒51型的上游引物SEQ ID NO:31，下游引物SEQ ID NO:32；/n特异性扩增人乳头瘤病毒52型的上游引物SEQ ID NO:33，下游引物SEQ ID NO:34；/n特异性扩增人乳头瘤病毒53型的上游引物SEQ ID NO:35，下游引物SEQ ID NO:36；/n特异性扩增人乳头瘤病毒56型的上游引物SEQ ID NO:37，下游引物SEQ ID NO:38；/n特异性扩增人乳头瘤病毒58型的上游引物SEQ ID NO:39，下游引物SEQ ID NO:40；/n特异性扩增人乳头瘤病毒59型的上游引物SEQ ID NO:41，下游引物SEQ ID NO:42；/n特异性扩增人乳头瘤病毒66型的上游引物SEQ ID NO:43，下游引物SEQ ID NO:44；/n特异性扩增人乳头瘤病毒68型的上游引物SEQ ID NO:45，下游引物SEQ ID NO:46；/n特异性扩增人乳头瘤病毒82型的上游引物SEQ ID NO:47，下游引物SEQ ID NO:48；/n所述的第二引物组合中，包括以下引物：/n特异性扩增人乳头瘤病毒16型的上游引物SEQ ID NO:49，下游引物SEQ ID NO:50；/n特异性扩增人乳头瘤病毒18型的上游引物SEQ ID NO:51，下游引物SEQ ID NO:52；/n特异性扩增人乳头瘤病毒31型的上游引物SEQ ID NO:53，下游引物SEQ ID NO:54；/n特异性扩增人乳头瘤病毒33型的上游引物SEQ ID NO:55，下游引物SEQ ID NO:56；/n特异性扩增人乳头瘤病毒35型的上游引物SEQ ID NO:57，下游引物SEQ ID NO:58；/n特异性扩增人乳头瘤病毒39型的上游引物SEQ ID NO:59，下游引物SEQ ID NO:60；/n特异性扩增人乳头瘤病毒45型的上游引物SEQ ID NO:61，下游引物SEQ ID NO:62；/n特异性扩增人乳头瘤病毒51型的上游引物SEQ ID NO:63，下游引物SEQ ID NO:64；/n特异性扩增人乳头瘤病毒52型的上游引物SEQ ID NO:65，下游引物SEQ ID NO:66；/n特异性扩增人乳头瘤病毒53型的上游引物SEQ ID NO:67，下游引物SEQ ID NO:68；/n特异性扩增人乳头瘤病毒56型的上游引物SEQ ID NO:69，下游引物SEQ ID NO:70；/n特异性扩增人乳头瘤病毒58型的上游引物SEQ ID NO:71，下游引物SEQ ID NO:72；/n特异性扩增人乳头瘤病毒59型的上游引物SEQ ID NO:73，下游引物SEQ ID NO:74；/n特异性扩增人乳头瘤病毒66型的上游引物SEQ ID NO:75，下游引物SEQ ID NO:76；/n特异性扩增人乳头瘤病毒68型的上游引物SEQ ID NO:77，下游引物SEQ ID NO:78；/n特异性扩增人乳头瘤病毒82型的上游引物SEQ ID NO:79，下游引物SEQ ID NO:80；/n所述的探针选自第一探针组合或者第二探针组合；/n所述的第一探针组合中，包括以下探针：/n针对人乳头瘤病毒16/31/33/58型的兼并探针SEQ ID NO:81；/n针对人乳头瘤病毒18/45/51/82型的兼并探针SEQ ...
【技术特征摘要】
1.一种高危型人乳头瘤病毒的检测和分型试剂盒，包括有检测引物对以及探针；其特征在于，所述的检测引物对和探针是用于对以下16种高中危型人乳头瘤病毒的分型：HPV16、HPV18、HPV39、HPV53、HPV31、HPV45、HPV68、HPV56、HPV33、HPV51、HPV35、HPV66、HPV58、HPV82、HPV59和HPV52；
所述的检测引物选自第一引物组合或者第二引物组合；
所述的第一引物组合中，包括以下引物：
特异性扩增人乳头瘤病毒16型的上游引物SEQIDNO:17，下游引物SEQIDNO:18；
特异性扩增人乳头瘤病毒18型的上游引物SEQIDNO:19，下游引物SEQIDNO:20；
特异性扩增人乳头瘤病毒31型的上游引物SEQIDNO:21，下游引物SEQIDNO:22；
特异性扩增人乳头瘤病毒33型的上游引物SEQIDNO:23，下游引物SEQIDNO:24；
特异性扩增人乳头瘤病毒35型的上游引物SEQIDNO:25，下游引物SEQIDNO:26；
特异性扩增人乳头瘤病毒39型的上游引物SEQIDNO:27，下游引物SEQIDNO:28；
特异性扩增人乳头瘤病毒45型的上游引物SEQIDNO:29，下游引物SEQIDNO:30；
特异性扩增人乳头瘤病毒51型的上游引物SEQIDNO:31，下游引物SEQIDNO:32；
特异性扩增人乳头瘤病毒52型的上游引物SEQIDNO:33，下游引物SEQIDNO:34；
特异性扩增人乳头瘤病毒53型的上游引物SEQIDNO:35，下游引物SEQIDNO:36；
特异性扩增人乳头瘤病毒56型的上游引物SEQIDNO:37，下游引物SEQIDNO:38；
特异性扩增人乳头瘤病毒58型的上游引物SEQIDNO:39，下游引物SEQIDNO:40；
特异性扩增人乳头瘤病毒59型的上游引物SEQIDNO:41，下游引物SEQIDNO:42；
特异性扩增人乳头瘤病毒66型的上游引物SEQIDNO:43，下游引物SEQIDNO:44；
特异性扩增人乳头瘤病毒68型的上游引物SEQIDNO:45，下游引物SEQIDNO:46；
特异性扩增人乳头瘤病毒82型的上游引物SEQIDNO:47，下游引物SEQIDNO:48；
所述的第二引物组合中，包括以下引物：
特异性扩增人乳头瘤病毒16型的上游引物SEQIDNO:49，下游引物SEQIDNO:50；
特异性扩增人乳头瘤病毒18型的上游引物SEQIDNO:51，下游引物SEQIDNO:52；
特异性扩增人乳头瘤病毒31型的上游引物SEQIDNO:53，下游引物SEQIDNO:54；
特异性扩增人乳头瘤病毒33型的上游引物SEQIDNO:55，下游引物SEQIDNO:56；
特异性扩增人乳头瘤病毒35型的上游引物SEQIDNO:57，下游引物SEQIDNO:58；
特异性扩增人乳头瘤病毒39型的上游引物SEQIDNO:59，下游引物SEQIDNO:60；
特异性扩增人乳头瘤病毒45型的上游引物SEQIDNO:61，下游引物SEQIDNO:62；
特异性扩增人乳头瘤病毒51型的上游引物SEQIDNO:63，下游引物SEQIDNO:64；
特异性扩增人乳头瘤病毒52型的上游引物SEQIDNO:65，下游引物SEQIDNO:66；
特异性扩增人乳头瘤病毒53型的上游引物SEQIDNO:67，下游引物SEQIDNO:68；
特异性扩增人乳头瘤病毒56型的上游引物SEQIDNO:69，下游引物SEQIDNO:70；
特异性扩增人乳头瘤病毒58型的上游引物SEQIDNO:71，下游引物SEQIDNO:72；
特异性扩增人乳头瘤病毒59型的上游引物SEQIDNO:73，下游引物SEQIDNO:74；
特异性扩增人乳头瘤病毒66型的上游引物SEQIDNO:75，下游引物SEQIDNO:76；
特异性扩增人乳头瘤病毒68型的上游引物SEQIDNO:77，下游引物SEQIDNO:78；
特异性扩增人乳头瘤病毒82型的上游引物SEQIDNO:79，下游引物SEQIDNO:80；
所述的探针选自第一探针组合或者第二探针组合；
所述的第一探针组合中，包括以下探针：
针对人乳头瘤病毒16/31/33/58型的兼并探针SEQIDNO:81；
针对人乳头瘤病毒18/45/51/82型的兼并探针SEQIDNO:82；
针对人乳头瘤病毒39/68/35/59型的兼并探针SEQIDNO:83；
针对人乳头瘤病毒53/56/66/52型的兼并探针SEQIDNO:84；
所述的第二探针组合中，包括以下探针：
针对人乳头瘤病毒16/18/39/53型的兼并探针SEQIDNO:85；<...
【专利技术属性】
技术研发人员：王少平，孟祥和，高龙，秦伟，丁赤武，吴金晶，
申请(专利权)人：杭州海基生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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