一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法技术

本发明专利技术提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法，属于牛体外胚胎的培养技术领域；所述牛体外胚胎的培养液，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。本发明专利技术所述培养方法，包括以下步骤：1细胞到8细胞期的牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎置于所述的胚胎培养液中，在38.5℃，0.5％CO

【技术实现步骤摘要】
一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法
本专利技术属于牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养
，尤其涉及一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法。
技术介绍
与体内胚胎相比，牛活体采卵技术是20世纪90年代发展起来的一项新型胚胎生产技术。该技术弥补了传统体外受精技术的缺陷，可获得大量遗传系谱明确的胚胎。相对于超数排卵/胚胎移植(MultipleOvulationEmbryoTransfer–MOET)技术来说，活体采卵/体外受精(OvumPickUp/InVitroFertilization-OPU/IVF)技术具有许多优势。0PU/IVF技术可以使每头牛在有限的时间内产生大量后代。因为OPU/IVF技术不依赖于供体牛的繁殖状态；人们可以通过非手术方式从出生三个月龄以上的犊牛，育成牛，成年牛，老龄牛，怀孕三个月以内的牛；超排不起作用的牛身上采集卵母细胞。另外，对一次采集的卵母细胞可以用不同公牛的精液进行体外受精。而在MOET育种体系中只能使用一头种公牛进行受精，因而OPU/IVF能够获得最大的遗传进展和最小的近交系数。OPU/IVF技术在体外受精时可选用性控精液，从而可以选择后代性别。收集的高质量的卵母可用于动物克隆和转基因等研究项目。目前，这两种技术已经成为欧美和大洋洲等畜牧业发达国家的农场主为扩大良种母牛群而采用的重要繁殖技术。然而，采用常规的牛胚胎培养体系(SOF液)，牛体外受精的囊胚发育率较低，而且胚胎质量也远不及体内胚胎，导致胚胎移植受体后的妊娠率低，因此如何提高囊胚发育率及胚胎质量成为体外受精胚胎生产的重点和研究的焦点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种专用于牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液和培养方法；所述培养液和培养方法能够显著提高囊胚发育率及胚胎质量，缩短囊胚期形成时间，降低体外生产胚胎的成本。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。优选的，所述瘦素在培养液中的浓度为5～12ng/ml。优选的，所述瘦素在培养液中的浓度为10ng/ml。优选的，所述胚胎基础培养液为合成输卵管液SOF。优选的，所述合成输卵管液SOF，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NaC199.7mmol/L，KC17.16mmol/L，NaHCO325.07mmol/L，MgC12·6H2O0.49mmol/L，KH2PO41.19mmol/L，丙酮酸钠0.4mmol/L，乳酸钠3.3mmol/L，体积分数5％的胎牛血清，CaC12·6H2O1.71mmol/L，体积分数1％的必需氨基酸和体积分数1％的非必须氨基酸。本专利技术提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养方法，包括以下步骤：将牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎置于所述的牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎培养液中，在38.5℃，0.5％CO2、100％湿度条件下进行体外培养。优选的，所述牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎为1细胞期～8细胞期胚胎。优选的，所述体外培养的时间为4～7天。优选的，所述牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎培养液的用量为0.08～0.12ng/每一枚胚胎。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素的添加能够显著提高体外发育系统的囊胚发育率。根据实施例记载，利用本专利技术所述的培养液培养的体外受精胚胎囊胚率为36％；比对照组(22％)提高14％。本专利技术提供的培养液能够缩短囊胚形成的时间，有60％的囊胚出现在胚胎培养的第六天，而对照组只有40％的囊胚出现在胚胎培养的第六天。最佳剂量瘦素(10ng/ml)培养液，显著提高胚胎质量，胚胎细胞从对照组的128增加到160，胚胎移植结果进一步证实了本专利技术所述的培养液的有效性，受胎率从38.7％提高到56％。利用本专利技术所述的培养液对牛克隆胚胎的培养同样有效，囊胚率为36％比对照组(55％)提高19％；胚胎细胞从对照组的169增加到208。具体实施方式本专利技术提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。在本专利技术中，所述瘦素在培养液中的浓度优选为5～12ng/ml，更优选为8～11ng/ml，最优选为10ng/ml。在本专利技术中，所述瘦素能够显著提高体外发育系统的囊胚发育率，并且能够缩短囊胚形成时间。在本专利技术中，所述胚胎基础培养液为合成输卵管液SOF。本专利技术中，所述合成输卵管液SOF优选的采用市售的合成输卵管液SOF；所述合成输卵管液SOF，以水为溶剂，优选的包括以下浓度的组分：NaC199.7mmol/L，KC17.16mmol/L，NaHCO325.07mmol/L，MgC12·6H2O0.49mmol/L，KH2PO41.19mmol/L，丙酮酸钠0.4mmol/L，乳酸钠3.3mmol/L，体积分数5％的胎牛血清，CaC12·6H2O1.71mmol/L，体积分数1％的必需氨基酸和体积分数1％的非必须氨基酸。本专利技术提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养方法，包括以下步骤：将牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎置于所述的牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎培养液中，在38.5℃，0.5％CO2、100％湿度条件下进行体外培养。在本专利技术中，所述牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎优选为1细胞期～8细胞期胚胎；瘦素对于上述时期的胚胎的囊胚发育率的提高更为显著。在本专利技术中，所述牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎培养液的用量优选为0.08～0.12ng/每一枚胚胎，更优选为0.1ng/每一枚胚胎。在本专利技术中，所述体外培养的时间优选为4～7天。本专利技术对所述牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养过程中的其他步骤和参数没有特殊限定，采用本领域常规的步骤和参数即可。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液组成：合成输卵管液SOF：NaC199.7mmol/L，KC17.16mmol/L，NaHCO325.07mmol/L，MgC12·6H2O0.49mmol/L，KH2PO41.19mmol/L，丙酮酸钠0.4mmol/L，乳酸钠3.3mmol/L，体积分数5％的胎牛血清，CaC12·6H2O1.71mmol/L，体积分数1％的必需氨基酸和体积分数1％的非必须氨基酸。瘦素10ng/ml。将牛体外受精胚胎和牛克隆胚胎分别置于上述牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎培养液中，0.1ng/每一枚胚胎；在38.5℃，0.5％CO2、100％湿度条件下进行体外培养7天。实施例2牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液组成：合成输卵管液SOF：NaC199.7mmol/L，KC17.16mmol/L，NaHCO325.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液，其特征在于，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。/n

【技术特征摘要】
1.一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液，其特征在于，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。


2.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述瘦素在培养液中的浓度为5～12ng/ml。


3.根据权利要求1或2所述的培养液，其特征在于，所述瘦素在培养液中的浓度为10ng/ml。


4.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述胚胎基础培养液为合成输卵管液SOF。


5.根据权利要求4所述的培养液，其特征在于，所述合成输卵管液SOF，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NaC199.7mmol/L，KC17.16mmol/L，NaHCO325.07mmol/L，MgC12·6H2O0.49mmol/L，KH2PO41.19mmol/L，丙酮酸钠0.4mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：何牧仁，
申请(专利权)人：草原和牛投资有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15