一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法组成比例

本发明专利技术公开了一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法，包括如下步骤：(1)标准溶液的配置；(2)供试品溶液的制备；(3)液相色谱分离；(4)含量计算方法。本发明专利技术样品提取前处理方法简单，有效成分可被充分提取；本发明专利技术准确、快速、灵敏度高，各项方法学指标均可满足实际检测的需要，节约时间与成本；本发明专利技术被测化合物在标准曲线线性范围内呈良好的线性(R

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法
本专利技术涉及中药成分分析
，具体涉及一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法。
技术介绍
华盖散出自中药经典名方《太平惠民和剂局方》。全方由麻黄，紫苏，杏仁，橘红，桑白皮，茯苓，甘草组成，具有宣肺化痰，止咳平喘的功效，是临床上治疗慢性阻塞性肺病疗效确切的中药组方。中药配方颗粒是近几年发展起来的利用现代生产技术，以中药饮片为原料，加入适宜的辅料，按照一定生产工艺制成，供临床调剂用的新型颗粒状制剂。中药复方的配伍使原有某些成分发生量的变化或产生新的化合物，从而表现出增效、减毒、或新的药理活性。在中药煎煮过程中，指标成分产生中和、络合、共溶等化学反应，导致含量与比例的变化，进而造成药理功效的改变。因此，配方颗粒有“单味饮片制剂、临证组方”的特点，决定其缺少水煎剂的合煎过程，进而导致指标成分含量、质量评价方法上存在较大差异。另外，配方颗粒在生产的过程中，存在提取、浓缩、干燥、制粒等过程，样品前处理方法也不同于一般的水煎剂。由于与传统中药水煎工艺差距较大，有效成分含量可能存在较大的差异，华盖散配方颗粒缺少系统规范的有效成分含量测定方法，导致其质量控制缺乏强有力的理论与科研数据支撑，使用范围受到一定的限制，因此，急需建立一种测定华盖散配方颗粒有效成分的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服
技术介绍
的技术缺陷，提供一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法。本专利技术旨在建立一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法，为华盖散配方颗粒质量评价提供更好的理论基础；本专利技术操作简单，结果可靠、灵敏，满足产品快速检测的需要。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案如下：一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法，包括样品提取和液相分离两个步骤，对华盖散配方颗粒中的有效成分甘草酸的充分提取和化合物的良好分离，采用美国安捷伦公司的C18反相高效液相色谱柱分离，以甲醇-0.15％甲酸溶液为流动相作梯度洗脱(表1)。一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法，括如下步骤：(1)标准溶液的配置：分别称取甘草酸的对照品适量，精密称定，加甲醇制成含有甘草酸0.4316mg/ml对照品溶液作为储备液，密封，避光保存在4℃冷柜中；(2)供试品溶液的制备：取干燥的华盖散配方颗粒粉末0.3g，精密称定，置10ml棕色容量瓶中，加入10ml甲醇，室温浸泡2h后超声30min，重复3次，合并提取液并过滤，回收溶剂后用甲醇溶解并转移至25ml茶色容量瓶，定容并摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，HPLC分析；(3)液相色谱分离：分离色谱柱：美国安捷伦公司C18反相高效液相色谱柱(5μm，250mm×4.6mm，Thermo)；流动相：甲醇(A)-0.15％甲酸(B)，梯度洗脱，见表1；流速：1.0ml/min；检测波长：250nm；柱温：30℃；进样体积：10μl；表1流动相梯度洗脱程序(4)含量计算方法：色谱中甘草酸通过与对照品的液相色谱图和保留时间相比较来确认，按标准曲线法以峰面积计算华盖散配方颗粒中甘草酸的含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术样品提取前处理方法简单，有效成分可被充分提取；(2)本专利技术准确、快速、灵敏度高，各项方法学指标均可满足实际检测的需要，节约时间与成本；(3)本专利技术被测化合物在标准曲线线性范围内呈良好的线性(R2＞0.9990)；有效成分日内精密度小于1.0％，日间精密度的相对标准偏差均小于3.0％；本专利技术甘草酸有效成分的回收率在90.0％～110.9％范围内。附图说明图1为本专利技术华盖散配方颗粒中甘草酸对照品色谱图；图2为本专利技术华盖散配方颗粒中甘草酸供试品色谱图；图3为本专利技术华盖散配方颗粒中甘草酸对照品标准曲线图；图4为本专利技术华盖散配方颗粒中甘草酸供试品标准曲线图；其中，图1和图2中的标识为：1-甘草酸。具体实施方式为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合具体实施例和附图作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于对本专利技术进一步说明，而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术所述的内容后，该领域的技术人员对本专利技术作出一些非本质的改动或调整，仍属于本专利技术的保护范围。一、实验部分1.仪器与试剂高效液相色谱仪：岛津LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；岛津PDA二级管阵列检测器(日本岛津公司)；岛津色谱工作站(日本岛津公司)；METTLERAB135-S(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；甲醇为色谱纯(赛默飞化学试剂)；其余试剂为分析纯(北京化学试剂厂)；水为双蒸水由Millipore纯水系统制备(Millipore，Milford，MA，USA)；甘草酸(批号：172146)对照品由中国药品生物制品检验检定研究院提供；以上对照品经HPLC分析其纯度均大于98％。2.液相色谱条件色谱柱：C18色谱柱(5μm，250mm×4.6mm，安捷伦)；流动相：甲醇(A)-0.05％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，所述梯度洗脱程序见表1；流速：1.0ml/min；检测波长：250nm；柱温：30℃；进样体积：10μl；表1流动相梯度洗脱程序(1)标准溶液的配置称取对照品适量，精密称定，加甲醇制成含有甘草酸0.4316mg/ml对照品溶液作为储备液密封，避光保存4℃冷柜中。(2)供试品溶液的制备取干燥的华盖散配方颗粒粉末0.2g，精密称定，置10ml棕色容量瓶中，加入10ml甲醇，室温浸泡2h后超声30min，重复3次，合并提取液并过滤，回收溶剂后用甲醇溶解并转移至25ml茶色容量瓶，定容并摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，HPLC分析。二、结果与讨论1.提取方法的选择为了最大程度的提取有效成分甘草酸，试验中比较了提取溶剂、提取方法、提取次数对提取率的影响。首先比较了不同提取溶剂50％甲醇，80％甲醇和纯甲醇对提取率的影响，结果显示纯甲醇提取效率高，基线平，重现好，故选择甲醇作为提取溶剂；随后比较了不同提取方法：超声30min、浸泡1h后超声30min、浸泡2h后超声30min对提取率的影响，结果显示提取效率无显著差异，因此随后的试验都采用超声30min。比较了不同提取次数1次、2次、3次、4次对提取率的影响，结果表明提取3次即可将指标成分完全提取。2.色谱条件的优化为了得到一个理想的色谱条件，即在尽量短的时间内使得有效成分的色谱峰与相邻峰之间达到基线分离，试验中对流动相(甲醇-水，乙腈-水，甲醇-乙酸-水，甲醇-甲酸-水，甲醇-磷酸-水)、柱温(25℃，30℃，3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)标准溶液的配置：/n分别称取甘草酸的对照品适量，精密称定，加甲醇制成含有甘草酸的对照品溶液作为储备液，密封，避光保存在4℃冷柜中；/n(2)供试品溶液的制备：/n取干燥的华盖散配方颗粒粉末0.3g，精密称定，置10ml棕色容量瓶中，加入10ml甲醇，室温浸泡2h后超声30min，重复3次，合并提取液并过滤，回收溶剂后用甲醇溶解并转移至25ml茶色容量瓶，定容并摇匀，经微孔滤膜滤过，HPLC分析；/n(3)液相色谱分离：/n分离色谱柱：美国安捷伦公司C18反相高效液相色谱柱，5μm，250mm×4.6mm；/n流动相：甲醇-0.15％甲酸，梯度洗脱，所述梯度洗脱程序见表1；/n流速：1.0ml/min；/n检测波长：250nm；/n柱温：30℃；/n进样体积：10μl；/n表1流动相梯度洗脱程序/n

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法测定华盖散配方颗粒中甘草酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)标准溶液的配置：
分别称取甘草酸的对照品适量，精密称定，加甲醇制成含有甘草酸的对照品溶液作为储备液，密封，避光保存在4℃冷柜中；
(2)供试品溶液的制备：
取干燥的华盖散配方颗粒粉末0.3g，精密称定，置10ml棕色容量瓶中，加入10ml甲醇，室温浸泡2h后超声30min，重复3次，合并提取液并过滤，回收溶剂后用甲醇溶解并转移至25ml茶色容量瓶，定容并摇匀，经微孔滤膜滤过，HPLC分析；
(3)液相色谱分离：
分离色谱柱：美国安捷伦公司C18反相高效液相色谱柱，5μm，250mm×4.6mm；
流动相：甲醇-0.15％甲酸，梯度洗脱，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘春燕，梅新路，
申请(专利权)人：金华市中心医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33