一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法技术

本发明专利技术提供了一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，解决了现有技术中的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其定量限较高，检测灵敏度不够，检测精确度不高的技术问题。该净化和检测方法包括下述步骤：（1）制备磁性纳米材料；（2）样品前处理；（3）采用超高效液相色谱‑Q‑Exactive高分辨质谱进行检测分析。本发明专利技术的净化检测方法的检出限和定量限可以达到为0.002‑0.005μg/kg和0.006‑0.015μg/kg，具有分析简便、快速，具有较高的灵敏度和精确度，重现性较好，定量准确且回收率较高，能够准确分析鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的含量的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法
本专利技术涉及氟虫腈及其代谢物检测的
，具体涉及一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法。
技术介绍
氟虫腈是一种新型苯基吡唑类杀虫剂，广泛用于农业害虫防治。苯基吡唑是一种神经毒性物质，能与昆虫的离子型γ-氨基丁酸受体(GABAR)结合，干扰氯离子的通路，在亚致死剂量时具有某些兴奋效应，而在高剂量时会导致死亡。此外，氟虫腈可以通过氧化、还原、水解和光解形成三种主要代谢产物：氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟甲腈。据动物实验研究表明，长期摄取受氟虫腈污染的食物，动物的肝脏、肾和甲状腺功能会受到损伤。2017年7月，比利时有关部门通过欧盟食品饲料类快速预警系统(RASFF)发现产自荷兰的鸡蛋中检测出氟虫腈，同年8月，问题鸡蛋波及欧洲16个国家、韩国等国家及中国香港、台湾地区，使“毒鸡蛋”事件成为世界范围内的重大食品安全事件，引起公众广泛关注。欧盟相关标准规定氟虫腈在蛋中的最大残留限量为0.005mg/kg，我国食品安全国家标准GB2763-2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中仅明确了氟虫腈及其代谢物在蔬菜、水果、油料、谷物等植物源性食品的限量(玉米为0.1mg/kg，其他为0.02mg/kg)，蛋类中的限量未明确。有研究表明，鸡蛋经过加工烹饪后，氟虫腈及其代谢物的含量不会发生明显变化，因此，鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的检测尤为重要。目前，有关鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的检测标准仅有GB23200.115-2018食品安全国家标准鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的测定采用的是液相色谱-质谱联用法，该标准使用QuEChERS方法净化，虽然简单、快速，但其原理是通过去除杂质来达到净化效果，所以方法的定量限较高(0.005mg/kg)。和该标准的净化方法类似的有公开号为CN107505421A(名称为一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留的快速提取及净化方法)和公开号为CN107860841A(名称为一种检测鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的方法氟虫腈及其代谢物)的专利技术专利，同样方法的定量限较高(均大于0.5μg/kg)。而其他的行业内的检测手段还存在一定的不足，国家知识产权局于2019年5月14日公开的一件公开号为CN109752531A，名称为一种检测鸡蛋中氟虫腈的试剂盒及其检测方法的专利技术专利，该专利使用的酶联免疫吸附测定法灵敏度低，而且会出现假阳性结果；授权号为CN107037149B(名称为一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量测定的方法)和公开号为CN107917974A(名称为一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的检测方法)的专利技术专利，使用的是固相萃取柱净化，操作步骤复杂且时间较长；2019年1月18日公开的公开号为CN109239248A(名称为一种蛋及蛋制品中氟虫腈的LC-Q-TOF检测方法)的专利技术专利，该方法仅只检测氟虫腈，不包括其代谢物(氟甲腈、氟虫腈亚砜和氟虫腈砜)，且使用的净化方法是超临界CO2萃取方法，需要用到萃取釜装置，仪器投入大，过程复杂、操作要求高。为了去除基质干扰，提高方法灵敏度，常用的氟虫腈及其代谢物的前处理方法包括固相萃取法(SPE)和QuEChERS方法。然而，传统的固相萃取法操作繁琐，成本高，耗费时间长；而QuEChERS方法虽然简单、快速，但其原理是通过去除杂质来达到净化效果，所以对于目标化合物的回收率较低。本申请人发现现有技术至少存在以下技术问题：1、现有技术中的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其定量限较高，检测灵敏度不够，检测精确度不高；2、现有技术中的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，使用了固相萃取柱净化，操作步骤复杂且时间较长；3、现有技术中的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，较多使用的仪器是低分辨质谱，低分辨质谱由于分辨率低，有时不能有效识别目标物与杂质，导致结果可靠性低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，以解决现有技术中存在的现有技术中现有技术中的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其定量限较高，检测灵敏度不够，检测精确度不高的技术问题。本专利技术提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供的一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，包括下述步骤：(1)制备磁性纳米材料A1、将柠檬酸钠、乙酸钠和FeCl3·6H2O通过乙二醇溶解后在高压反应釜中反应生成Fe3O4纳米颗粒，经磁分离、洗涤、冷冻干燥后，得Fe3O4纳米粒子；此步骤中，FeCl3被乙二醇还原得到Fe3O4颗粒，乙酸钠起到防止Fe3O4颗粒团聚的作用，柠檬酸钠则可以对四氧化三铁颗粒进行表面处理；A2、将步骤A1中制备的Fe3O4纳米粒子经过盐酸超声处理、洗涤后，将洗涤后的Fe3O4纳米粒子、甲醇、水和氨水溶液加入反应容器中，向反应容器中滴加TEOS，反应后生成的纳米粒子，经磁分离、洗涤后，得Fe3O4@nSiO2纳米粒子；A3、将步骤A2中合成的Fe3O4@nSiO2纳米粒子、水、无水乙醇、CTAB、氨水溶液加入反应容器中进行超声分散，超声分散后在搅拌的状态下滴加TEOS进行反应，反应生成的纳米粒子，经洗涤、冷冻干燥，得Fe3O4@nSiO2@mSiO2纳米粒子；A4、将步骤A3中合成的Fe3O4@nSiO2@mSiO2纳米粒子分散在Tris溶液中，加入多巴胺，将反应生成的纳米粒子进行磁分离后，经洗涤、冷冻干燥，得Fe3O4@nSiO2@mSiO2-PDA磁性纳米材料；(2)样品前处理B1、新鲜鸡蛋去壳后搅拌混匀，然后将搅拌混匀的鸡蛋液通过乙腈进行超声提取，最后进行磁性固相萃取净化，得到含氟虫腈及其代谢物的稀释溶液；B2、向步骤B1中所得的稀释溶液中加入步骤(1)中制备的磁性纳米材料，使稀释溶液中的氟虫腈及其代谢物被吸附到磁性纳米材料上；B3、用磁铁将吸附了氟虫腈及其代谢物的磁性纳米材料与溶液进行磁分离，弃去上清液，进行洗涤；再次进行磁分离，弃去上清液；B4、使用乙腈将步骤B3中吸附了氟虫腈及其代谢物的磁性纳米材料上的氟虫腈及其代谢物的洗脱下来，然后进行磁分离，将磁性纳米材料分离出来，保留上清液；B5、将步骤B4中的上清液经滤膜过滤处理，得待测样品；(3)采用超高效液相色谱-Q-Exactive高分辨质谱进行检测分析。进一步的，所述步骤(1)A1中，在高压反应釜中反应是在温度为190℃-210℃反应11h-13h；所述FeCl3·6H2O和乙二醇间的比例为1：50～200；其中，所述FeCl3·6H2O以g计，所述乙二醇以mL计。进一步的，所述步骤(1)A2中，所述Fe3O4纳米粒子和TEOS间的比例为1:2～10；其中，所述Fe3O4纳米粒子以g计，所述TEOS以mL计。进一步的，所述步骤(1)A3中，所述Fe3O4@nSiO2纳米粒子、CTAB和TEOS间的比例为1：1～6:2～10；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其特征在于：包括下述步骤：/n（1）制备磁性纳米材料/nA1、将柠檬酸钠、乙酸钠和FeCl

【技术特征摘要】
1.一种鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其特征在于：包括下述步骤：
（1）制备磁性纳米材料
A1、将柠檬酸钠、乙酸钠和FeCl3·6H2O通过乙二醇溶解后在高压反应釜中反应生成Fe3O4纳米颗粒，经磁分离、洗涤、冷冻干燥后，得Fe3O4纳米粒子；
A2、将步骤A1中制备的Fe3O4纳米粒子经过盐酸超声处理、洗涤后，将洗涤后的Fe3O4纳米粒子、甲醇、水和氨水溶液加入反应容器中，向反应容器中滴加TEOS，反应后生成的纳米粒子，经磁分离、洗涤后，得Fe3O4@nSiO2纳米粒子；
A3、将步骤A2中合成的Fe3O4@nSiO2纳米粒子、水、无水乙醇、CTAB、氨水溶液加入反应容器中进行超声分散，超声分散后在搅拌的状态下滴加TEOS进行反应，反应生成的纳米粒子，经洗涤、冷冻干燥，得Fe3O4@nSiO2@mSiO2纳米粒子；
A4、将步骤A3中合成的Fe3O4@nSiO2@mSiO2纳米粒子分散在Tris溶液中，加入多巴胺，将反应生成的纳米粒子进行磁分离后，经洗涤、冷冻干燥，得Fe3O4@nSiO2@mSiO2-PDA磁性纳米材料；
（2）样品前处理
B1、新鲜鸡蛋去壳后搅拌混匀，然后将搅拌混匀的鸡蛋液通过乙腈进行超声提取，最后进行磁性固相萃取净化，得到含氟虫腈及其代谢物的稀释溶液；
B2、向步骤B1中所得的稀释溶液中加入步骤（1）中制备的磁性纳米材料，使稀释溶液中的氟虫腈及其代谢物被吸附到磁性纳米材料上；
B3、用磁铁将吸附了氟虫腈及其代谢物的磁性纳米材料与溶液进行磁分离，弃去上清液，进行洗涤；再次进行磁分离，弃去上清液；
B4、使用乙腈将步骤B3中吸附了氟虫腈及其代谢物的磁性纳米材料上的氟虫腈及其代谢物的洗脱下来，然后进行磁分离，将磁性纳米材料分离出来，保留上清液；
B5、将步骤B4中的上清液经滤膜过滤处理，得待测样品；
（3）采用超高效液相色谱-Q-Exactive高分辨质谱进行检测分析。


2.根据权利要求1所述的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其特征在于：所述步骤（1）A1中，在高压反应釜中反应是在温度为190℃-210℃反应11h-13h；所述FeCl3·6H2O和乙二醇间的比例为1：50～200；其中，所述FeCl3·6H2O以g计，所述乙二醇以mL计。


3.根据权利要求1所述的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其特征在于：所述步骤（1）A2中，所述Fe3O4纳米粒子和TEOS间的比例为1:2～10；其中，所述Fe3O4纳米粒子以g计，所述TEOS以mL计。


4.根据权利要求1所述的鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的净化和检测方法，其特征在于：所述步骤（1）A3中，所述Fe3O4@nSiO2纳米粒子、CTAB和TEOS间的比例为1：1～6:2～10；其中，所述Fe3O4@nSiO2纳米粒子和CTAB均以g计，所述TEOS以mL计。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖循，赵艳，白小琳，
申请(专利权)人：中国科学院成都生物研究所，
类型：发明
国别省市：四川;51