一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，包括多价糖链和衔接物，糖链末端糖单元为为D‑甘露糖，可被甘露糖受体识别；衔接物用于连接多价糖链和抗非洲猪瘟病毒siRNA药物，末端至少有一羧基和一羟基，分别用于和多价糖链、抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的连接。本发明专利技术靶向载体为新型甘露糖受体载体，结合抗非洲猪瘟病毒的专有siRNA药物，定向地识别巨噬细胞或树突细胞的甘露糖受体，并通过胞吞作用进入细胞内，从而提高药物的疗效并减少对其他组织毒副作用，靶向作用强、安全性高。在细胞内，siRNA药物能抑制目标基因的表达，使靶基因得以沉默，从而达到了杀灭病毒的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体及其应用
本专利技术涉及药物靶向载体
，具体涉及一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体及其应用。
技术介绍
受体是一种能够识别和选择性结合某种分子的大分子物质，受体介导的胞吞作用是目前大多数动物细胞实现从细胞外液中捕获生物大分子的重要途径。大部分药物进入细胞内，改变细胞的生理生化功能而产生效应。一般传统的药物不具有主动靶向性，治疗疾病的同时，会有一定的毒副作用，甚至会产生一些不良反应。而药物靶向载体的研究应用，能够弥补这些不足，它能把药物集中于靶向细胞使药物发挥最大效用，同时能够降低药物对正常细胞的毒性等。甘露糖受体(mannosereceptor,MR)主要表达于巨噬细胞、树突细胞，并在肝、脾和肺泡巨噬细胞中高度表达，巨噬细胞也是药物运送的重要目标。甘露糖受体可识别末端是甘露糖的糖链。非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、高度传染性的疾病，致死率极高，通常为致死性疾病。非洲猪瘟在多个国家发生、流行，但到目前为止，还没有任何疫苗和药物来预防或治疗这种疾病。非洲猪瘟病毒是双链DNA病毒，主要感染巨噬细胞、单核细胞和树突细胞。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体及其应用，以解决现有技术的不足。本专利技术采用以下技术方案：本专利技术第一方面提供了一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，包括多价糖链和衔接物，糖链末端糖单元为为D-甘露糖，可被甘露糖受体识别；衔接物用于连接多价糖链和抗非洲猪瘟病毒siRNA药物，末端至少有一羧基和一羟基，分别用于和多价糖链、抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的连接。进一步地，所述多价糖链为三价糖链或四价糖链。进一步地，所述多价糖链为四价糖链。进一步地，除糖单元，糖链含13-22个碳碳/碳氧/碳氮单键。进一步地，除糖单元，糖链含16-20个碳碳/碳氧/碳氮单键。进一步地，所述抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的siRNA是下述双链RNA序列之一：1)正义链为序列表中的SEQIDNO:6，反义链为序列表中的SEQIDNO:7的双链RNA序列；2)正义链为序列表中的SEQIDNO:8，反义链为序列表中的SEQIDNO:9的双链RNA序列；3)正义链为序列表中的SEQIDNO:10，反义链为序列表中的SEQIDNO:11的双链RNA序列；4)正义链为序列表中的SEQIDNO:12，反义链为序列表中的SEQIDNO:13的双链RNA序列；5)正义链为序列表中的SEQIDNO:14，反义链为序列表中的SEQIDNO:15的双链RNA序列。进一步地，双链RNA3′端还含有dTdT结构。本专利技术第二方面提供了上述靶向载体在装载抗非洲猪瘟病毒siRNA药物中的应用。本专利技术的有益效果：1、本专利技术靶向载体为新型甘露糖受体载体，结合抗非洲猪瘟病毒的专有siRNA药物，定向地识别巨噬细胞或树突细胞的甘露糖受体，并通过胞吞作用进入细胞内，从而提高药物的疗效并减少对其他组织毒副作用，靶向作用强、安全性高。在细胞内，siRNA药物能抑制目标基因的表达，使靶基因得以沉默，从而达到了杀灭病毒的目的。2、本专利技术糖链为多价糖链，优选为三价糖链或四价糖链，更优选为四价糖链，多价糖链亲和性比单价糖链亲和性强，能高效地靶向目标区域。经过胞吞作用进入细胞后，精准释放抗非洲猪瘟病毒siRNA药物分子。3、本专利技术糖链骨架含13-22个碳碳/碳氧/碳氮单键，优选，16-20个碳碳/碳氧/碳氮单键，使各糖单元之间保持了一定的空间距离，并保证了各糖单元和甘露糖受体的空间适合作用距离，有利于发挥靶向作用。附图说明图1为小鼠巨噬细胞吞饮糖基分子的荧光图。图2为pEGFP-N1质粒结构图。图3为O174L基因、H359L基因、MGF505-7R基因、MGF360-15R基因、EP402R基因转染NIH-3T3细胞后的PCR扩增图。图4为O174L-siRNA、H359L-siRNA、MGF505-7R-siRNA、MGF360-15R—siRNA、EP402R-siRNA对基因的抑制率。图5为O174L-siRNA、H359L-siRNA、MGF505-7R-siRNA、MGF360-15R—siRNA、EP402R-siRNA对蛋白的相对表达量。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本专利技术，但并不用来限定本专利技术的实施范围。一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，包括多价糖链和衔接物，总体结构如下：糖链--衔接物--核酸多价糖链优选为三价糖链或四价糖链，更优选为四价糖链。糖链末端糖单元为D-甘露糖，可被甘露糖受体识别；除糖单元，糖链优选含13-22个碳碳/碳氧/碳氮单键，更优选含16-20个碳碳/碳氧/碳氮单键。结构如下所示(示意但不限于)：衔接物用于连接多价糖链和抗非洲猪瘟病毒siRNA药物，末端至少有一羧基和一羟基，分别用于和多价糖链、抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的连接。结构如下所示(示意但不限于)：本专利技术四价糖链是由四条碳链衍生，用于衍生的四条碳链，每条碳链含2-4个碳碳单键，末端为羟基、氨基或羧酸基，其中一条碳链上含氨基结构；每条碳链再通过烷基酰胺，烷基醚或者烷基氨等构成的链接单元和糖单元连接；衔接物通过羧基和碳链上的氨基连接从而构成所述靶向载体。所述抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的siRNA是下述双链RNA序列之一：1)正义链为序列表中的SEQIDNO:6，反义链为序列表中的SEQIDNO:7的双链RNA序列；2)正义链为序列表中的SEQIDNO:8，反义链为序列表中的SEQIDNO:9的双链RNA序列；3)正义链为序列表中的SEQIDNO:10，反义链为序列表中的SEQIDNO:11的双链RNA序列；4)正义链为序列表中的SEQIDNO:12，反义链为序列表中的SEQIDNO:13的双链RNA序列；5)正义链为序列表中的SEQIDNO:14，反义链为序列表中的SEQIDNO:15的双链RNA序列。优选地，双链RNA3′端还含有dTdT结构，以增加siRNA的稳定性。如无特别说明，下述试验方法均为常规方法，实验材料均可从商业公司获取。以下实施例反应路线如下：实施例1：D-甘露糖乙酰化在0℃，100克D-甘露糖的醋酸酐(Ac2O)(400毫升)悬浊液中加入500毫升无水吡啶(Py)，通氮气保护，并且搅拌15分钟；随后在反应物中加入5克4-二甲氨基吡啶(DMAP)和100毫升的三乙胺(Et3N)，搅拌过夜。反应完全后(用薄层色谱监控反应)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，其特征在于，包括多价糖链和衔接物，/n糖链末端糖单元为为D-甘露糖，可被甘露糖受体识别；/n衔接物用于连接多价糖链和抗非洲猪瘟病毒siRNA药物，末端至少有一羧基和一羟基，分别用于和多价糖链、抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的连接。/n

【技术特征摘要】
1.一种适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，其特征在于，包括多价糖链和衔接物，
糖链末端糖单元为为D-甘露糖，可被甘露糖受体识别；
衔接物用于连接多价糖链和抗非洲猪瘟病毒siRNA药物，末端至少有一羧基和一羟基，分别用于和多价糖链、抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的连接。


2.根据权利要求1所述的适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，其特征在于，所述多价糖链为三价糖链或四价糖链。


3.根据权利要求2所述的适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，其特征在于，所述多价糖链为四价糖链。


4.根据权利要求1所述的适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，其特征在于，除糖单元，糖链含13-22个碳碳/碳氧/碳氮单键。


5.根据权利要求4所述的适用于抗非洲猪瘟病毒siRNA药物的靶向载体，其特征在于，除糖单元，糖链含16-20个碳碳/碳氧/碳氮单键。


6.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喆明，
申请(专利权)人：杭州勇诚睿生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33