一种神经精神性狼疮的诊断标志物及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及神经精神性狼疮的诊断标志物及其检测试剂盒，具体是涉及21种代谢物(L‑天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α‑D‑葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2‑乙酰基呋喃、1，3‑二异丙基苯、正辛醛、萘、反式‑2‑辛烯‑1‑醇、β‑氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1‑十五醇)单独或联合作为生物标志物的应用，更具体的，涉及用于神经精神性狼疮诊断的方法。本发明专利技术涉及利用质谱技术、酶联免疫吸附(ELISA)、蛋白芯片等生物标志物检测技术平台检测NPSLE患者体液(如脑脊液等)中的生物标志物。

【技术实现步骤摘要】
一种神经精神性狼疮的诊断标志物及其检测试剂盒
本专利技术涉及标志物的鉴定和使用，具体是涉及21种代谢物(L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇)单独或联合作为生物标志物的应用。
技术介绍
系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是一种由自身免疫机制介导的弥漫性结缔组织病，以产生针对细胞成分的多种自身抗体并导致多系统、多器官受累为特征。神经精神性狼疮(NeuropsychiatricSystemicLupusErythematosus，NPSLE)主要包括19种SLE神经精神损害类型，是重型SLE的常见系统受累表现和严重预后不良因素。NPSLE患者可死于各种神经系统损害或精神行为异常，包括颅内血栓或出血、脑炎、癫痫持续状态等引起的脑组织坏死；颅内压严重升高引起的脑疝以及精神损害患者的自伤、自杀行为等等，造成了沉重的社会经济负担。NPSLE患者病情难以缓解、预后极差，与目前该病的临床诊断困难、缺乏特异性的辅助检查方法有关。特异性生物标志物由于其低检测难度和高诊断价值，在SLE的诊断过程中占据不可或缺的地位。尤其该病难以行病理活检、影像学检查昂贵而缺乏特异性的情况下，血清或脑脊液标志物的发现，非常有助于临床诊断和病情评估。Muller等发表在Nature上的综述显示，此前二十年尚未发现与发病机制密切相关、在患者临床研究中被确证的NPSLE标志物；既往研究报道的潜在标志物，包括抗磷脂抗体、抗rRNP抗体、抗NMDA受体抗体、抗微管相关蛋白2抗体，在NPSLE中的阳性率为6-46％，且不同研究的结果缺乏一致性，不具备可靠的临床基础(Jeltsch-DavidH，MullerS.Neuropsychiatricsystemiclupuserythematosus：pathogenesisandbiomarkers.NatureReviewsNeurology2014；10(10)：579-96)。更多的具备临床诊断意义的NPSLE标志物亟待被发现(Hanly，J.G.，Kozora，E.，Beyea，S.，&Birnbaum，J.(2018).NervoussystemdiseaseinSystemicLupusErythematosus：Currentstatusandfuturedirections.Arthritis&Rheumatology.doi：10.1002/art.40591)。
技术实现思路
本申请提供了一种用于诊断对象中NPSLE的专利技术方法，包括分析对象的生物样品以检测一个或更多生物标志物的存在；基于样品中一个或更多生物标志物的水平诊断神经系统疾病。本专利技术诊断方法在诊断NPSLE中是有用的。我们通过超高效液相色谱-串联质谱或ELISA等检测技术比较了多种代谢物在NPSLE患者和出现神经精神症状的对照组(包括SLE对照、其它结缔组织病(connectivetissuedisease，CTD)对照和其它神经系统疾病(nervoussystemdisease，NSD)对照的体液中的水平，发现L-天冬酰胺等21种标志物在NPSLE患者脑脊液中显著升高或降低，各个标志物单独应用均对NPLSE有较高诊断效力。将这些标志物联合应用于诊断NPSLE，也具有很高的敏感性及特异性。本专利技术的目的之一是提供能够有效诊断NPSLE的标志物——L-天冬酰胺等21种代谢物。本专利技术的目的之一是通过L-天冬酰胺等21种标志物在神经精神性狼疮中单独及联合诊断意义的发现，有望填补NPSLE在诊断标志物方面的空白，提高临床诊断的准确度，从而有助于实现早诊早治，降低该病的致残率与死亡率。本专利技术提供一种用于区分NPSLE和具有神经精神性症状但并非NPSLE的SLE以及其他神经损伤的组合物，包括：从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品，生物样品为从对象分离的体液。另一方面，本专利技术提供了L-天冬酰胺等21种标志物在制备用于诊断神经精神性狼疮的试剂中的用途。进一步地，根据本专利技术的上述用途，其包括步骤：a)提供来自个体的脑脊液或血清等体液样品；b)确定来自步骤a)的样品中L-天冬酰胺等21种标志物中的单个成分或多个成分的绝对或相对定量数值；其中，L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮量的升高是辅助诊断神经精神性狼疮的指征；胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇量的降低是辅助诊断神经精神性狼疮的指征。特别地，在所述步骤b)中的优选方法包括质谱技术、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、抗体微阵列、组织微阵列(TMA)、电化学分析法、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学或免疫荧光染色技术、免疫放射测定法(IRMA)和免疫酶测定法(IEMA)，包括使用单克隆和/或多克隆抗体的三明治测定法。根据本专利技术，“诊断”指将NPSLE患者与具有神经精神性症状但被除外NPSLE的SLE患者、没有神经精神性症状的SLE患者、非SLE患者以及其他神经损伤、健康人等人群区分开。另外的，本专利技术同时提供一种用于诊断NPSLE可能性的试剂盒，该试剂盒包括：用于富集从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品中的生物标志物的基体，生物样品在从对象分离之前是一种与生物神经系统连通的液体；用于检测上述生物标志物的抗体或检测试剂；和用于检测上述生物样品中标志物的存在或量的操作指南。进一步的，本专利技术提供了一种神经精神性狼疮的检测试剂盒，包括：a)样品接收区，添加来自受试者的样品；b)轭合区包含至少一种被标记的结合试剂，每种结合试剂与选自L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇中的至少一种标志物特异性结合；c)一种固体支持物，其限定样品的液体流动路径，并包含至少一种标志物中的相应检测线，每条检测线包含固定的另外的结合试剂，该试剂能特异性结合至少一种标志物，从而在检测线处固定标志物，通过也与标志物特异性结合的被标记的结合试剂产生信号。进一步的，检测试剂盒进一步包括：d)至少一种被标记的对照结合试剂，其能与固定在至少一种标志物的检测线下游的对照线上的结合配体结合，从而证实检测已成功完成；进一步的，检测试剂盒进一步包括e)一种在检测线下游的吸收剂用来吸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.21种代谢物作为分子标志物，在制备用于诊断、分期和/或预后神经精神性狼疮的试剂或者检测试剂盒中的用途，所述21种代谢物具体为：L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇。/n

【技术特征摘要】
1.21种代谢物作为分子标志物，在制备用于诊断、分期和/或预后神经精神性狼疮的试剂或者检测试剂盒中的用途，所述21种代谢物具体为：L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇。


2.如权利要求1所述的用途，其包括步骤：
a)提供来自个体的体液样品；
b)确定来自步骤a)的体液样品中所述21种代谢物中的单个成分或多个成分的绝对或相对定量数值。


3.如权利要求2所述的用途，其中，L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮量的升高是辅助诊断神经精神性狼疮的指征；胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇量的降低是用于辅助诊断神经精神性狼疮的指征。


4.如权利要求2所述的用途，其中，在所述步骤b)中的优选方法包括质谱技术、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、抗体微阵列、组织微阵列(TMA)、电化学分析法、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学或免疫荧光染色技术、免疫放射测定法(IRMA)和免疫酶测定法(IEMA)，包括使用单克隆和/或多克隆抗体的三明治测定法。


5.一种用于诊断和治疗NPSLE可能性的试剂盒，该试剂盒包括：用于富集从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品中的生物标志物的基体，生物样品在从对象分离之前是一种与生物神经系统连通的液体；用于检测上述生物标志物的抗体或检测试剂；和用于检测上述生物样品中标志物的存在或量的操作指南。


6.如权利要求5所述的试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗占国，孙晓麟，李雪，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京;11