一种ELISA检测试剂盒的构建方法、试剂盒及应用技术

本发明专利技术属于标志物及其检测技术领域，公开了一种ELISA检测试剂盒的构建方法、试剂盒及应用，进行包被液1L配制，10XPBST洗液1L配制，1X PBST洗液1L配制，封闭液配制，抗体稀释液配制，McIvain`s buffer配制，显色液配制，0.5M磷酸盐缓冲液配制。本发明专利技术验证EGFR能够引起机体产生免疫反应并使机体产生相应的自身抗体，成本低、特异度高、敏感度强、准确性高、无创伤，可以作为早期肺癌的诊断生物标志物，用于区别肺癌患者和正常人，对不同类型肺癌患者与正常对照组进行鉴别；EGFR自身抗体对早期肺癌亦具有诊断价值，可与临床指标CEA联合进而提高肺癌诊断准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种ELISA检测试剂盒的构建方法、试剂盒及应用
本专利技术属于肺癌诊断的标志物及其检测
，尤其涉及一种ELISA检测试剂盒的构建方法、试剂盒及应用。
技术介绍
目前，肺癌是最常见恶性肿瘤之一，是全世界发病率与死亡率最高的恶性肿瘤，每年约有180万新的肺癌病例发生，约占全部癌症诊断的13％。近年来发病率呈现升高趋势，肺癌起病隐匿并且早期无明显临床症状、病程发展快，通常确诊时已为中晚期而错过最佳治疗时机，预后较差。目前临床主要联合影像学和“金标准”病理细胞技术诊断肺癌，由于早期确诊率和灵敏度低、费用高、有创等缺点均不适合肺癌早期的筛查诊断。因此，在癌症早期就表现出来异常的生物标志物受到高度重视。目前，临床上用于肺癌检测的标志物有CA125(糖抗原125)，CEA(癌胚抗原)，NSE(神经元烯醇化酶)，CYFRA211(细胞角蛋白19片段)等，这些指标主要用于肺癌预后评价和术后监测，对于肺癌诊断的灵敏度和特异性不高，所以至今尚无理想的可用于早期肺癌的诊断标志物。癌症发生后，肿瘤相关抗原能够激活人体的细胞和体液免疫反应，产生相应的自身抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒的构建方法包括：/n包被液配制：1.5g Na

【技术特征摘要】
1.一种ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒的构建方法包括：
包被液配制：1.5gNa2CO3，2.9gNaHCO3，800ml去离子水加去离子水定容至1L；
10XPBST洗液配制：81.8gNaCl，28.8gNa2HPO4·12H2O，3.1gNaH2PO4·12H2O，0.1g硫柳汞钠，800ml去离子水，5mlTween20，200ulproclin300，加去离子水定容至1L；
1XPBST洗液配制：100ml10XPBST洗液，加去离子水定容至1L；
封闭液配制：2gBSA溶解于100ml1XPBST洗液；
抗体稀释液配制：1gBSA溶解于100ml1XPBST洗液或者将50ml封闭液用1XPBST稀释一倍；
McIvain`sbuffer配制：量取234ml0.2MNa2HPO4和266ml0.1M柠檬酸，混匀；
显色液配制：量取2ml10mg/mlABTS、18mlMcIlvain`s缓冲液和0.1ml30％H2O2，混匀；
磷酸盐缓冲液配制：称取5.68gNa2HPO4、1.56gNaH2PO4·H2O，溶解于80ml去离子水中，调pH后加去离子水至100ml。


2.如权利要求1所述ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，所述包被液1L配制中去离子水pH9.6；
10XPBST洗液1L配制中去离子水pH7.4。


3.如权利要求1所述ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，封闭液配制中，封闭液为100ml，2％BSA；
抗体稀释液配制中，抗体稀释液为100ml，1％BSA。


4.如权利要求1所述ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，McIvain`sbuffer配制中，Na2HPO4和柠檬酸混合后调pH至4.6；
0.5M磷酸盐缓冲液配制中，pH7.4，100ml；Na2HPO4、NaH2PO4·H2O，溶解于去离子水中，调pH至7.4。


5.一种利用权利要求1～4任意一项所述构建方法构建的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒包括：包被液、包被重组纯化EGFR蛋白的96孔酶标板、PBST洗液、封闭液、抗体稀释液、显色液、McIvain`sbuffer液、磷酸盐缓冲液。


6.一种利用权利要求5所述ELISA检测试剂盒检测肺癌诊断标志物的方法，其特征在于，所述肺癌诊断标志物的检测方法包括利用构建的ELISA检测试剂盒对EGFR自身抗体水平进行检测，具体包括以下步骤：
步骤一，包被抗原蛋白：用纯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：代丽萍，王猛，刘峰辉，欧阳松云，王雨林，赵春玲，刘曼，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41