一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1基因突变的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞PD‑L1基因突变的试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫组化技术检测CTC的PD‑L1表达情况。本发明专利技术提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发胃癌患者PD‑L1表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。本发明专利技术提供的方法，能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1基因突变的试剂盒及检测方法
本专利技术提供了一种通过外周血循环肿瘤细胞胃癌检测患者PD-L1基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
胃癌（Gastriccancer,GC）是一种高度致命的恶性肿瘤，发病率居世界第四位（每年新增病例95万例），在2012年肿瘤相关死亡患者中排第三位。尽管近年来胃癌诊断和治疗方法有所改善，但胃癌患者5年生存率还不到30％，大约有50％胃癌患者治愈性切除后遭受肿瘤复发或转移。肿瘤复发和转移是胃癌患者死亡的主要原因。循环肿瘤细胞（Circulatingtumorcell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。PD-1/PD-L1为免疫靶点的免疫疗法为胃癌治疗带来了新的曙光。研究发现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、PD-L1（人）一抗100μL、羊抗人 IgG/HRP 100μL、0.1% Triton X-100 100μL、0.3% H

【技术特征摘要】
1.一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A0.5mL、染色液B1mL、PD-L1（人）一抗100μL、羊抗人IgG/HRP100μL、0.1%TritonX-100100μL、0.3%H2O2100μL、0.5mL试剂A、6×PBS缓冲液60mL。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液组成为：1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.1%海藻糖+0.2%酪氨酸+PBS缓冲液150mmol/L，其中所述百分比为体积比。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按容积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂A为二甲苯。


6.一种利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒非诊断目的检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC：采集无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血：肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血CTC：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏梅，高德海，李胜，李浩，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：山东;37