一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。所述的试剂盒，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、羊抗CA199一抗100μL、兔抗羊IgG/HRP 100μL、0.1%Triton X‑100 100μL、0.3% H

【技术实现步骤摘要】
一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法
本专利技术涉及一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，也是预后最差的恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤所导致的死亡中，胰腺癌排第四位，90％患者在确诊后一年内死亡，5年生存率不足5％。由于胰腺癌早期症状隐匿，且没有特异性，侵袭性强，转移早，确诊时多处于中晚期，手术切除率低，确诊时候仅15％，因此对胰腺癌患者治疗方法的选定显得尤为重要，可以使部分患者避免不必要的手术创伤及风险。CAl99(carbohydrateantigenl99)又称肿瘤相关199抗原、胃肠癌相关抗原或糖抗原，是一种黏蛋白类肿瘤标记物，系细胞膜上的糖脂质，在血液中以黏蛋白的形式存在。CAl99是一种与腺癌高度相关的抗原物质，由腺癌细胞产生，经胸导管引流入血。血清CAl99正常参考值为39kU／L，恶性肿瘤血清中CAl99浓度多明显升高，尤其是胰腺癌、结肠癌患者，升高几倍至几十倍不等，甚至可达1000U／m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、羊抗CA199一抗100μL、兔抗羊IgG/HRP100μL、0.1% Triton X-100 100μL、0.3% H

【技术特征摘要】
1.一种检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A0.5mL、染色液B1mL、羊抗CA199一抗100μL、兔抗羊IgG/HRP100μL、0.1%TritonX-100100μL、0.3%H2O2100μL、试剂A15ml、试剂B50ml、6×PBS缓冲液60mL。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液为氯化钾19g/L，乙二胺四乙酸二钾4.8g/L，吡啶鎓钠2.6g/L，磷酸二氢钾17g/L，氢氧化钠9g/L，羟乙基哌嗪乙硫磺酸0.2g/L，二羟基甲基脲2g/L，余量为纯化水。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由0.5%盐酸-70%乙醇溶液组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂A为甲醛-甲醇按照体积比2：1组成；所述试剂B为二甲苯。


6.一种利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒非诊断目的检测胰腺癌患者外周血循环肿瘤细胞CA199表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发胰腺癌患者外周血中的CTC：采集无法获取组织标本的晚期或复发胰腺癌患者外周血：肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液45ml进行稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周...

【专利技术属性】
技术研发人员：高德海，崔凯，李胜，夏梅，李浩，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：山东;37