一种具有抗氧化活性的新酚酸类化合物的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种新的酚酸类化合物在制备抗氧化药物中的应用，发明专利技术还涉及从中药小花清风藤中提取、分离、纯化本化合物的制备方法。该制备方法简单易行，所得化合物纯度高。药理研究表明该新化合物具有较好的体外清除自由基的能力，可以降低H

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化活性的新酚酸类化合物的制备方法及应用
本专利技术属于中医药
，具体为从小花清风藤茎叶中提取分离酚酸类化合物及含有该化合物的中药提取物或混合物的制备方法和在制备抗氧化药物中的用途。
技术介绍
氧化应激反应对人体衰老和健康具有非常重大的影响，各种因素导致的过量自由基可以引发和加剧多种疾病，例如阿尔兹海默症、心血管疾病、恶性肿瘤等，因此应用抗氧化剂来维持人体健康具有广泛的需求。由于合成抗氧化剂存在潜在的致癌、毒性等风险，寻找安全、有效、无毒的天然抗氧化剂，成为了当今食品科学中抗氧化剂开发的必然趋势。H2O2是诱导氧化损伤细胞模型的关键因子，它能够刺激体内的巨噬细胞合成和释放多种内源性活性因子。利用H2O2处理巨噬细胞是常用的体外氧化损伤细胞模型的造模手段。花清风藤为清风藤科Sabiaceae清风藤属Sabia植物小花清风藤SabiaparvifloraWall.exRoxb.的干燥茎和叶，大部分生长在我国贵州省和广西省的西南部地区和云南省的西南部至东南部等地。在民间有“小黄药”之称，通常被用来治疗肝炎、黄疸、风湿关节痛和跌打损伤等。中药是我国巨大的资源宝库，具有五千余年的临床应用经验，从中药中寻找先导化合物已成为近年来新药研究的重要来源，本专利技术应用现代分离技术与波谱分析方法相结合，从小花清风藤中分离出一种具有抗H2O2致RAW264.7氧化损伤细胞模型的酚酸类化合物，非常有望开发成具有知识产权的抗氧化新药候选药物，并将其应用于治疗氧化应激反应的相关疾病。
技术实现思路
<br>本专利技术的目的是提供一种新的酚酸类化合物及其在制备抗氧化药物中的应用。用这种方法制备的该化合物具有较好的体外清除自由基的能力，该化合物还可以降低H2O2诱导的巨噬细胞RAW264.7内活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）的生成。此外，可以升高细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活性。实施本专利技术的技术方案如下：一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物，其特征为：名称为：5-(3-羧基-4-羟基)-5-氧-2-甲基-2-戊烯酸，其结构式如下：本专利技术提供的一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物其制备方法为：方法的具体步骤为：S1用70%乙醇将小花清风藤的干燥茎和叶提取三次，小花清风藤的茎叶与溶剂的质量比约为1：（10-16），浓缩至无醇味得到浸膏；S2将得到浸膏上样于大孔树脂树脂，分别用30%，50%，70%，95%，乙醇进行洗脱；S3对于经HP-20树脂30%乙醇洗脱部位的部分进行分离，将所得浸膏，依次采用大孔树脂、反相柱色谱、半制备型高效液相色谱、制备型高效液相色谱进行分离，得到该化合物。优选的，所述的提取方法包括冷浸法、渗漉法、微波提取法、超声提取法、回流提取法和连续回流提取法。优选的，所述大孔树脂主要包括以下型号：HP-20、HP-21、SP850、SP700、SP207、AB-8、D101、XDA1、X-5、NKA-2、ADS-2。优选的，所述反相柱色谱主要包括低压制备色谱、中压制备色谱、高效液相色谱或动态轴向压缩色谱，其中，反相色谱所用的流动相为有机溶剂的水溶液，有机溶剂为甲醇或乙腈。优选的，所述反相柱色谱的洗脱为梯度洗脱，以体积分数计，所述梯度洗脱程序为：20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%有机溶剂的水溶液，分别洗脱2个柱体积。优选的，所述的制备型高效液相色谱的流动相为甲醇-水溶液或乙腈-水溶液。上述方法制备的一种酚酸类化合物或含有该化合物的中药提取物或混合物在制备抗氧化类药物中的应用。上述方法制备的酚酸类化合物或含有该化合物的提取物或混合物和药学上可接受的载体制备成片剂、胶囊剂、注射剂、粉针剂、颗粒剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸、软膏剂或透皮控释贴剂等剂型。用这种方法制备的该新化合物具有较好的体外清除自由基的能力，细胞模型法评价结果显示该化合物还可以降低H2O2诱导的巨噬细胞RAW264.7内活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）的生成。此外，可以升高细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活性。显示良好的抗氧化活性，可用于开发抗氧化的相关药物。附图说明附图1为本专利技术提供一种新的酚酸类化合物结构式。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1制备该酚酸化合物的方法，包括如下步骤：（1）将小花清风藤茎叶用12倍量的70%乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，过滤，将滤液减压浓缩得到粗浸膏；（2）将步骤（1）所得粗浸膏，用30%乙醇溶解，过滤后得上清液；（3）取步骤（2）得到的上清液上样于HP-20型大孔树脂柱（样品：树脂按照1：3的体积比填充），依次用水、30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、乙醇洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积。取30%乙醇洗脱部位经ODS中低压反相液相色谱柱（50*500mm），MeOH-H2O（20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%）洗脱得到7个馏份A～G。D经制备型高效液相色谱，色谱条件为：C18-ODS色谱柱（30mm×250mm，10μm），乙腈-水20:80为流动相，流速10ml/min，保留时间为65min，最后分离得到所述酚酸类化合物(134.4mg)。实施例2制备如式1结构的化合物的方法，包括如下步骤：（1）将小花清风藤茎叶用20倍量的95%乙醇溶液加热回流提取2次，每次3小时，过滤，将滤液减压浓缩得到粗浸膏；（2）将步骤（1）所得粗浸膏，用30%乙醇溶解，过滤后得上清液；（3）取步骤（2）得到的上清液上样于HP-20型大孔树脂柱（样品：树脂按照1：3的体积比填充），依次用水、30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、乙醇洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积。取30%乙醇洗脱部位经ODS中低压反相液相色谱柱（50*500mm），MeOH-H2O（20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%）洗脱得到7个馏份A～G。D经制备型高效液相色谱，色谱条件为：C18-ODS色谱柱（30mm×250mm，10μm），乙腈-水20:80为流动相，流速10ml/min，保留时间为65min，最后分离得到所述酚酸类化合物(134.4mg)。实施例3制备如式1结构的化合物的方法，包括如下步骤：（1）将小花清风藤茎叶用30倍量的75%乙醇溶液冷浸法提取3次，每次24小时，过滤，将滤液减压浓缩得到粗浸膏；（2）将步骤（1）所得粗浸膏，用30%乙醇溶解，过滤后得上清液；（3）取步骤（2）得到的上清液上样于HP-20型大孔树脂柱（样品：树脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物，其特征为：名称为：5-(3-羧基-4-羟基)-5-氧-2-甲基-2-戊烯酸，其结构式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物，其特征为：名称为：5-(3-羧基-4-羟基)-5-氧-2-甲基-2-戊烯酸，其结构式如下：

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2.如权利要求1所述的一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物的制备方法，其特征为：具体步骤为：
S1用70%乙醇将小花清风藤的干燥茎和叶提取三次，小花清风藤的茎叶与溶剂的质量比约为1：（10-16），浓缩至无醇味得到浸膏；
S2将得到浸膏上样于大孔树脂树脂，分别用30%，50%，70%，95%，乙醇进行洗脱；
S3对于经HP-20树脂30%乙醇洗脱部位的部分进行分离，将所得浸膏，依次采用大孔树脂、反相柱色谱、半制备型高效液相色谱、制备型高效液相色谱进行分离，得到该化合物。


3.如权利要求2所述的一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物的制备方法，其特征为：其中，S1步骤所述的提取方法包括冷浸法、渗漉法、微波提取法、超声提取法、回流提取法和连续回流提取法。


4.如权利要求2所述的一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂包括以下型号：HP-20、HP-21、SP850、SP700、SP207、AB-8、D101、XDA1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志峰，冯育林，王琦，杨世林，杜伟东，黄文平，游梦，
申请(专利权)人：江西中医药大学，江西本草天工科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江西;36