噻唑-吡唑啉类衍生物在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种化合物2‑(3‑(4‑氯苯基)‑5‑(4‑甲氧基苯基)‑4,5‑二氢‑1H‑吡唑‑1‑基)‑4‑(吡啶‑4‑基)噻唑在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用。实验证实本发明专利技术提供的化合物CPT能够显著抑制A549细胞生长，并且抑制作用优于临床药物5‑FU；且CPT能够以浓度和时间依赖的方式显著促进A549细胞自噬。其有望作为一种有效的抑制肿瘤生长工具，为开发非小细胞肺癌治疗药物奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
噻唑-吡唑啉类衍生物在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用
本专利技术涉及噻唑-吡唑啉类衍生物在制备抗肺癌药物中的应用，尤其涉及荧光化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑(简略记为CPT)在制备促进A549细胞自噬、抑制A549癌细胞生长的抗非小细胞肺癌药物中的应用。
技术介绍
目前，癌症是除心脏病和脑血管病变以外的三大疾病之一，而在百余种不同病变的痛症中，至今尚未发现有特效的治疗方法。肺癌因其发现晚，高致死率，在癌症治疗中成为一个全球性难题。环境因素尤其是大气污染和不良生活习惯如抽烟，也加剧了肺癌病症的发展。其中非小细胞肺癌在所有肺癌中约占85％的比重，约75％的患者在发现时已处于中晚期，5年存活率极低。目前除了手术摘除外，化疗仍是治疗肺癌不可或缺的手段。小分子化合物可以作为肿瘤抑制因子，成为一种有前景的新治疗策略。自噬是哺乳动物中普遍存在的机制，是细胞内通过溶酶体降解细胞质蛋白和细胞器的进化保守途径。这一保守过程在维持细胞稳态中发挥着极其重要的作用，在多种人类疾病，如神经退行性疾病、心血管疾病、免疫失调、糖尿病尤其是癌症中都发现自噬的失调。研究表明在多种癌症发生中都存在自噬相关基因不同程度的缺失，而且自噬在不同类型的癌症以及不同时段的肿瘤中的作用往往大相径庭。近年来的研究揭示了自噬缺陷对肿瘤恶性转化有促进作用，自噬作为癌症治疗的靶点，对肿瘤治疗具有重要意义。目前，最常用的自噬激活剂是雷帕霉素，它能够靶向哺乳动物雷帕霉素靶点mTORC1，抑制其活性，促进自噬。然而，临床上应用雷帕霉素时会有很多的毒副作用，有时会加重某些疾病的发展。因此，迫切需要研发更多具有激活自噬活性的化合物或制剂。经检索，有关荧光化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑在制备促进A549细胞自噬、抑制A549癌细胞生长的抗肺癌药物中的应用尚未见报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术要解决的问题是提供一种化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑(简略记为CPT)在制备促进A549细胞自噬、抑制A549癌细胞生长的抗非小细胞肺癌药物中的应用。本专利技术所述的化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用，其中所述2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑简略记为CPT，其结构式如式(I)所示：上述的应用中：所述2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑能够有效促进A549细胞自噬的剂量为1～5μM。上述的应用中：所述2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑能够有效抑制A549细胞增长的剂量为1～10μM。上述化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑促进A549细胞自噬、抑制癌生长的细胞生物学实验及结果如下：1.化合物CPT对A549细胞存活率的影响。实验组：分别将浓度为0.1μM，1μM，5μM，10μM的CPT处理A549细胞24h和48h。阴性对照：DMSO(0.02％，v/v)，阳性对照：临床抗癌药物五氟尿嘧啶(5-FU)。结果表明：在用5μM，10μM的CPT处理A549细胞24h和48h后能够显著抑制A549细胞的存活，见图1。2.化合物CPT对A549细胞形态的影响。实验组：分别用浓度为0.1μM，1μM，5μM，10μM的CPT处理A549细胞12h，24h和48h后拍摄细胞形态变化。对照组：DMSO(0.02％，v/v)。结果表明：在上述时间条件下，用5μM，10μM的CPT处理能够减少A549细胞的数量，见图2。3.化合物CPT对A549细胞的抑制作用优于临床药物5-FU。实验组：分别计算化合物CPT以及5-FU处理A549细胞48h的半抑制浓度(IC50)。发现CPT的IC50值为2.6μM，优于临床药物5-FU(9.4μM)。4.化合物CPT以浓度依赖方式促进LC3B-Ⅱ蛋白水平升高，促进自噬。实验组：分别将浓度为1μM，5μM和10μM的CPT处理A549细胞24h后，检测轻链蛋白LC3B-Ⅰ，LC3B-Ⅱ蛋白水平变化情况。对照组：DMSO(0.02％，v/v)。结果表明：上述浓度条件下，CPT能够显著促进LC3B-Ⅱ水平上升，所以会以浓度依赖方式促进A549细胞自噬，见图3。5.化合物CPT以时间依赖方式促进LC3B-Ⅱ蛋白水平升高，促进自噬。实验组：将浓度为10μM的CPT处理A549细胞3h，6h，12h和24h后，检测轻链蛋白LC3B-Ⅰ，LC3B-Ⅱ蛋白水平变化情况。对照组：DMSO(0.02％，v/v)。结果表明：上述时间条件下，CPT能够显著促进LC3B-Ⅱ水平上升，所以会以时间依赖方式促进A549细胞自噬，见图4。上述的实验数据统计学处理：实验数据以平均值±标准误差表示，经t检验：*P<0.05表示有显著性差异；**P<0.01表示有极显著性差异。由上述实验及其结果，可以得出如下结论：CPT能够显著抑制A549细胞生长，并且抑制作用优于临床药物5-FU。实验证实：CPT能够以浓度和时间依赖的方式显著促进A549细胞自噬。本专利技术提供的CPT所显示的促进A549细胞自噬、抑制A549癌细胞生长的结果，预示CPT有望作为一种有效的抑制肿瘤生长工具，为开发抗非小细胞肺癌治疗药物奠定基础。附图说明图1：CPT抑制A549细胞存活。其中：A:CPT处理A549细胞24h后，检测A549细胞存活率。B:CPT处理A549细胞48h后，检测A549细胞存活率。图2：CPT促进A549形态改变并减少细胞数量。不同浓度CPT处理A549细胞12h，24h和48h后，显微镜拍照观察A549细胞形态和数量变化。图3：CPT以浓度依赖方式促进A549细胞自噬。不同浓度CPT处理A549细胞24h后，检测LC3B-Ⅰ，LC3B-Ⅱ蛋白水平。图4：CPT以时间依赖方式促进A549细胞自噬。10μMCPT处理A549细胞不同时间后，检测LC3B-Ⅰ，LC3B-Ⅱ蛋白水平。具体实施方式下面结合具体附图和实施例对本
技术实现思路
进行详细说明。如下所述例子仅是本专利技术的较佳实施方式而已，应该说明的是，下述说明仅仅是为了解释本专利技术，并非对本专利技术作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用，其中所述2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑简略记为CPT，其结构式如式(I)所示：/n

【技术特征摘要】
1.化合物2-(3-(4-氯苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)-4-(吡啶-4-基)噻唑在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：林兆民，张明，高冬芳，张璐，陈元，王鹏，林御星，
申请(专利权)人：山东大学第二医院，
类型：发明
国别省市：山东;37