一种用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属生物技术领域，涉及银屑病药物疗效检测分子标志物及检测试剂盒，本发明专利技术提出了血浆可溶性GP5水平作为预测甲氨蝶呤治疗银屑病的临床疗效的分子标志物；通过研究血浆可溶性GP5水平与MTX治疗银屑病临床疗效的关系提供了检测试剂盒，针对血浆可溶性GP5水平高的银屑病患者用MTX治疗干预的有效率的发生情况，预测评估MTX治疗银屑病的临床药物疗效，本发明专利技术有助于指导临床医生制定适合的MTX治疗干预方案，为提高MTX的临床疗效提供基础。

【技术实现步骤摘要】
一种用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效的检测试剂盒
本专利技术属于生物
，涉及银屑病药物疗效检测试剂盒，具体涉及一种新型的用于预测甲氨蝶呤(MTX)治疗银屑病疗效的检测试剂盒，该试剂盒通过检测银屑病患者血浆可溶性血小板膜蛋白(glycoproteinVplatelet，GPV)的水平，预测MTX的临床疗效。可用于指导临床医生选择MTX治疗干预银屑病的方案，为提高MTX的临床疗效提供基础。
技术介绍
：现有技术公开了银屑病为常见的慢性炎症性疾病，可累及皮肤、指甲、关节、肾脏、心血管等多个脏器。由于该疾患发病率高、病程长、易复发、难根治，给患者带来严重的身心损害和经济负担。研究显示，银屑病是一定遗传背景下由免疫细胞与角质形成细胞相互作用共同介导的慢性炎症性疾病，临床表现为边界清楚的白色鳞屑性斑块，特征性的组织病理表现与表皮分化异常密切相关。目前，临床实践中常采用的药物干预中，如，常使用的阿维A其有效率仅20％左右，而且会引起血脂增高，增加患者心血管疾病的风险，且其中部分患者还出现肝肾功能的损害；又如，生物制剂的临床有效率虽然高在50％-80％左右，但由于价格昂贵，致使大多数患者无力承担。甲氨蝶呤(MTX)于1972年被FDA批准治疗银屑病，结构类似叶酸，与二氢叶酸还原酶不可逆地结合，发挥抗增殖活性，诱导凋亡和增加腺苷浓度，具有抗炎和免疫调节作用；MTX为目前临床较常采用的较经济、有效的治疗银屑病的药物，但由于其存在有骨髓抑制和肝纤维化影响的风险，因此，较严重限制了MTX在银屑病治疗中的广泛应用，寻找一个生物标记预测MTX的临床疗效成为本领域科学家和医生关注的热点。有研究发现叶酸代谢通路相关的酶的基因多态性与MTX治疗类风湿性关节炎的临床疗效和毒副作用的相关：如MTHFR1298A＞C(rs1801131)，ATIC347C＞G(rs2372536)，RFC-180G＞A(rs1051266)，SLC19A1A＞G(rs2838956)andSLC19A1G＞A(rs7499)与MTX的临床疗效相关；而RFC-180G＞A(rs1051266)基因多态性与MTX的毒性相关。鲜见有关通过蛋白质组学研究寻找与MTX疗效相关的分子标记的报道。基于现有技术的研究现状，本申请的专利技术人拟通过同位素标记相对和绝对定量(isobarictagsforrelativeandabsolutequantification，iTRAQ)技术，研究银屑病有效组(治疗第12周疾病严重程度评分改善75％以上)和无效组(治疗第12周疾病严重程度评分改善低于50％)外周血单个核细胞蛋白质水平的变化，寻找与疾病改善相关的蛋白质分子标记，本申请研究发现血浆可溶性GP5的水平与MTX治疗银屑病的疾病严重改善程度正相关，因此可通过ELISA检测血浆中GP5的水平来预测MTX的临床疗效，进一步用于制备预测MTX临床疗效的检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的是基于现有技术的现状，提供新的检测MTX临床疗效的蛋白质标志物，进一步用于制备银屑病药物疗效检测试剂盒，尤其涉及一种用于预测甲氨蝶呤(MTX)治疗银屑病疗效的检测试剂盒。本专利技术通过研究银屑病患者血浆可溶性GP5的水平，发现银屑病患者血浆可溶性GP5的水平显著高于正常人，MTX治疗有效组患者血浆GP5水平高于无效组，有效组患者治疗后血浆可溶性GP5水平显著下降，无效组治疗前后无显著变化，且银屑病患者血浆可溶性GP5水平与MTX改善疾病严重程度正相关，所述的血浆可溶性GP5的水平可作分子标记尤其是作为MTX治疗银屑病预测临床疗效的分子标记。本专利技术的进一步目的是提供用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效的检测试剂盒。本专利技术中，通过研究银屑病患者血浆可溶性GP5水平与MTX治疗银屑病临床疗效的关系，如比较正常人和银屑病患者血浆可溶性GP5的水平，评估MTX有效组和无效组治疗前后血浆可溶性GP5的水平，及血浆可溶性GP5水平与疾病严重度改善水平的关系，有助于指导临床医生制定适合的MTX治疗干预方案。本专利技术中，通过ITRAQ技术分析了4例MTX治疗有效组和4例MTX治疗无效组外周血单个核细胞蛋白质的差异，结果显示：1)MTX有效组和无效组间286个差异蛋白有统计学意义，p＜0.05；2)通过DAVID(https：//david.ncifcrf.gov/)信号通路分析发现主要集中在血小板活化信号通路3)MTX治疗有效组患者外周血单个核细胞上GP5水平低于MTX无效组，差异有统计学意义；且有效组治疗后GP5的水平上调，差异有统计学意义p＜0.05，无效组治疗前后差异无统计学意义。本专利技术进一步检分析了31例MTX治疗前后银屑病患者血浆可溶性GP5的水平与MTX治疗银屑病临床疗效间的关系，及10例正常对照血浆可溶性GP5水平，结果显示：1)银屑病患者血浆可溶性GP5水平显著高于正常人，差异有统计学意义，p＜0.01；2)银屑病患者血浆可溶性GP5水平与MTX治疗第12周疾病改善严重程度正相关，p＜0.001；3)MTX治疗有效组患者血浆可溶性GP5水平治疗后显著下降，差异有统计学意义p＜0.05，无效组治疗后无显著变化。本专利技术经试验结果证实，检测银屑病患者血浆可溶性GP5水平可用作预测MTX治疗银屑病的临床疗效。本专利技术提供了新的预测MTX临床疗效的分子标志物，银屑病患者血浆可溶性GP5的水平可作为预测MTX治疗银屑病的临床疗效的分子标志物；本专利技术进一步提供了用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效的检测试剂盒，针对血浆可溶性GP5水平高的银屑病患者采用MTX治疗干预其治疗有效率高，本专利技术可用于预测MTX治疗银屑病的临床疗效的评估，有助于指导临床医生制定适合的MTX治疗干预方案。本专利技术所述的分子标记的基因图谱，可通过如下述途径查找获得：https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/2814。附图说明图1显示了共鉴定出286个差异蛋白。图2显示了KEGG信号通路分析发现差异蛋白富集在血小板活化信号通路。图3显示了差异蛋白的血小板活化通路中的分析，其中，19个差异蛋白参与血小板活化。图4显示了银屑病患者基线状态血浆可溶性GP5水平显著高于正常对照，差异有统计学意义p＜0.01。图5显示了银屑病患者基线状态血浆可溶性GP5水平与治疗第12周疾病严重改善程度正相关，p＜0.001.图6显示了MTX治疗有效组银屑病患者血浆可溶性GP5水平显著高于正常对照和无效组p＜0.01。图7显示了MTX治疗有效组银屑病患者血浆可溶性GP5水平治疗后显著下调，差异有统计学意义，p＜0.05。图8显示了MTX治疗无效组银屑病患者血浆可溶性GP5水平治疗前后无显著差异。具体实施方式实施例1：MTX治疗银屑病的临床疗效观察实验材料与方法：1)银屑病患者：选定2015年1月到2017年6月到华山医院皮肤科银屑病专病门诊就诊的银屑病患本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血浆可溶性GP5在用于制备预测甲氨蝶呤药物疗效的分子标志物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.血浆可溶性GP5在用于制备预测甲氨蝶呤药物疗效的分子标志物中的用途。


2.血浆可溶性GP5在用于制备预测甲氨蝶呤治疗银屑病的临床药物疗效的分子标志物中的用途。


3.按权利要求1或2所述的用途，其特征在于，针对血浆可溶性GP5水平高的银屑病患者采用甲氨蝶呤治疗干预有效率的情况，预测甲氨蝶呤治疗干预的药物疗效。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜克香，徐金华，王志成，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31