一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法技术

本发明专利技术公开了一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法。其中，该方法包括：(1)将蛋白质样品与酸混合配制酸性溶液，其中所述蛋白质样品中含有天冬氨酸；(2)于密闭环境中将所述酸性溶液加热至高温高压状态，以便使所述蛋白质样品水解；(3)采用高分辨质谱仪对步骤(2)得到的水解液进行质谱分析。方法不仅步骤简单、处理快速、引入杂质少且成本低廉，还可以通过鉴定蛋白质的特异性水解片段得到原始蛋白序列信息，该自下而上的蛋白质分析方法可以作为蛋白质特征肽段、以及指纹图谱分析的有力工具，从而特异性地鉴定目标蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法
本专利技术属于蛋白质组学研究领域，具体而言，涉及蛋白质的自下而上的特征多肽碎片的检测方法，更具体地，涉及一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法。
技术介绍
使用蛋白酶对蛋白质进行特异性解离，检测新产生游离特征肽段的方法是最为常见的蛋白质分析手段之一。不同种类的蛋白酶作用的位点不尽相同，最常见的胰蛋白酶的作用位点是赖氨酸和精氨酸的C末端。传统酶解通常需要适宜的环境温度(约37℃)和较长的反应时间(大于10h)，且由于引入的反应体系复杂，杂质较多，需要使用液相色谱等方式进行分离纯化，或使用基质辅助激光解离技术进行质谱进样。近些年来，固定化蛋白酶技术、微波催化蛋白酶技术等新型酶切技术在一定程度上提升了蛋白质解离的效率，但仍然存在着装置重复性差，反应体系复杂、引入较多大分子有机物(如蛋白酶自溶片段)和小分子无机盐等杂质的劣势。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法，该方法步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法，其特征在于，包括：/n(1)将蛋白质样品与酸混合配制酸性溶液，其中所述蛋白质样品中含有天冬氨酸；/n(2)于密闭环境中将所述酸性溶液加热至高温高压状态，以便使所述蛋白质样品水解；/n(3)采用高分辨质谱仪对步骤(2)得到的水解液进行质谱分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种高温高压状态下的蛋白质快速水解分析方法，其特征在于，包括：
(1)将蛋白质样品与酸混合配制酸性溶液，其中所述蛋白质样品中含有天冬氨酸；
(2)于密闭环境中将所述酸性溶液加热至高温高压状态，以便使所述蛋白质样品水解；
(3)采用高分辨质谱仪对步骤(2)得到的水解液进行质谱分析。


2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤(1)中，所述酸性溶液的pH值为1～5，优选2～3；
任选地，所述蛋白质样品为重组人泛素蛋白、牛血清蛋白、重组结核抗原Esat-6蛋白、重组结核抗原Cfp-10蛋白、核糖核酸酶或辣根过氧化氢酶；
任选地，步骤(1)中，配制所述酸性溶液之前，预先将所述蛋白质样品与还原剂混合，以便切断所述蛋白质样品中的二硫键。


3.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于，步骤(2)中，所述加热时间不大于20min，优选1～4min；
任选地，步骤(2)中，所述酸性溶液在高温高压状态下的温度为105～200℃，压力为1.2～16atm；
任选地，步骤(2)中，所述酸性溶液在高温高压状态下的温度为150～200℃，压力为5～16atm。


4.根据权利要求3所述的分析方法，其特征在于，步骤(3)中，预先将步骤(2)得到的水解液与极性溶剂混合后再采用高分辨质谱仪进行分析；
任选地，步骤(3)中，所述水解液中蛋白质的质量浓度为1～200ppm；
任选地，步骤(3)中，所述质谱分析的进样方式为纳流电喷雾离子源。


5.根据权利要求1或4所述的分析方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述酸性溶液置于微型密闭反应容器中进行加热，所述微型密闭反应容器为微型毛细管反应器或微型高压反应釜。


6.根据权利要求5所述的分析方法，其特征在于，所述微型毛细管反应器中，所述毛细管的材质为柔性毛细管或刚性毛细管；
任选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳证，王宇晨，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11