一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术将普通变形杆菌来源的硫酸软骨素ABC裂解酶进行了定点突变，通过融合信号肽加强了其分泌表达，对表达酶的菌株进行了外膜蛋白敲除，并进一步提供了菌株的培养策略。

【技术实现步骤摘要】
一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法
本专利技术涉及一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法，属于生物工程

技术介绍
硫酸软骨素，是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖。硫酸软骨素广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面，糖链由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺(又称N-乙酰氨基半乳糖)二糖单位组成，通过一个似糖链接区连接到核心蛋白的丝氨酸残基上。硫酸软骨素表现出高的生物活性，如抗癌症、抗动脉粥样硬化作用、抗炎、免疫调节、抗氧化等，不仅在细胞转移、分化、增殖、识别以及组织形成等生物过程中起到了重要的作用，还应用于医药及临床。由于硫酸软骨素的分子量大，生物利用度低，在治疗脊柱损伤、轴突再生、抑制肿瘤发生时，硫酸软骨素的很多功效不能得到有效的发挥。近年来有实验证明分子量在3500-5300Da的硫酸软骨素，其药理活性最强，对防治风湿性炎症以及伤口愈合等具有更好的疗效。因此，制备低分子量的硫酸软骨素是非常有必要的。目前，制备低分子量的硫酸软骨素的方法主要有：(1)酸法降解，酸降解是指将本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体，其特征在于，编码所述突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体，其特征在于，编码所述突变体的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.一种重组基因工程菌，其特征在于，所述重组基因工程菌的宿主是敲除了外膜A蛋白OMPA的EscherichiacoliBL21(DE3)，所述重组基因工程菌携带了表达载体，所述表达载体是以pET-28a质粒为骨架，并在XhoI和NdeI酶切位点插入了融合了来源于大肠杆菌的信号肽OmpA的编码硫酸软骨素ABC裂解酶突变体的基因。


3.根据权利要求2所述的一种重组基因工程菌，其特征在于，编码硫酸软骨素ABC裂解酶突变体的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


4.根据权利要求2所述的一种重组基因工程菌，其特征在于，所述信号肽替换为PelB或PhoA。


5.根据权利要求2所述的一种重组基因工程菌，其特征在于，所述外膜A蛋白替换为脂蛋白(LPP)或微孔蛋白(Porins)。


6.一种重组基因工程菌，其特征在于，携带编...

【专利技术属性】
技术研发人员：康振，张琳，堵国成，陈坚，王浩，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32