一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法组成比例

本发明专利技术公开了一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，取小蓟配方颗粒于甲醇中，经超声处理、放冷、滤过后，制得供试品溶液；取蒙花苷对照品、芹菜素对照品、咖啡酸对照品、绿原酸对照品、原儿茶酸对照品，混合后用甲醇溶解，制得参照物溶液；分别吸取所述供试品溶液和参照物溶液注入高效液相色谱仪，采用梯度脱洗进行测定，得到小蓟配方颗粒的指纹谱图。本发明专利技术通过高效液相色谱法经梯度脱洗方式构建得到小蓟配方颗粒的指纹谱图，用于测定小蓟配方颗粒中蒙花苷、芹菜素、咖啡酸、绿原酸、原儿茶酸的多种有效物质，可作为小蓟配方颗粒的精确质量控制方法，具有分离效果好、灵敏度高的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法
本专利技术是一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，具体涉及采用高效液相色谱法构建的小蓟配方颗粒指纹谱图的质量测定方法，属于中药质量控制领域。
技术介绍
小蓟为菊科蓟属植物刺儿菜（Cirsiumsetosum（Wild.）MB）的干燥地上部分，气微，味微苦，分布于全国大部分地区，具有凉血止血，祛瘀消肿的功效，用于衄血、吐血、便血、尿血、崩漏下血、外伤出血、痈肿疮毒等。现代研究发现，小蓟还具有降血压、抗菌、抗肿瘤、抗氧化等多种药理活性。小蓟配方颗粒是以小蓟药材的干燥地上部分经炮制并按标准汤剂的主要质量标准制成其配方颗粒。现代药理研究发现，从小蓟药材中可以提取到多种有效成分，例如咖啡酸脂类（绿原酸和咖啡酸）和黄酮类（芦丁和蒙花苷等）其它还含有原儿茶酸和原儿茶醛等。但由于受不同产地、气候、生态环境等药材本身因素，以及配方颗粒制备过程中各环节工艺条件等因素的影响，往往会造成不同批次或生产工艺下小蓟配方颗粒所含的主要成分的差异较大。因此，为使小蓟配方颗粒性味、功效与其原生药保持一致，势必需要建立小蓟配方颗粒的质量控制体系，以针对小蓟配方颗粒或其中的某个有效成分或指标成分进行定性及定量的分析。何冬黎等在“HPLC同时测定小蓟配方颗粒中蒙花苷和芹菜素的含量”（《中国现代应用药学》，2007年3月第34卷第3期，410-412）中记载了采用HPLC高效液相色谱法同时测定小蓟配方颗粒中蒙花苷和芹菜素含量的方法，检测条件：Diamonsil-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈-1%冰醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1.0mL·min-1，检测波长335nm，柱温30℃。蒙花苷和芹菜素进样量分别在0.3～1.5μg（r=0.9994）和0.075～0.375（r=0.9997）内与峰面积呈良好的线性关系；加样回收率分别为99.19%和99.12%，RSD分别为1.27%和1.26%。除此之外，方红玫等在“HPLC-DAD法同时测定小蓟配方颗粒中5种活性成分的含量”（《中国药师》，2018年底21卷第6期，1125-1127）中还记载了采用HPLC-DAD法同时测定小蓟配方颗粒中绿原酸、黄芩苷、芦丁、蒙花苷、芹菜素5中活性成分含量的方法，采用ThermoHypersilBDSC18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈（A）-1%磷酸水溶液（B），流速1.0mL·min-1，梯度脱洗，检测波长326nm，柱温35℃。绿原酸、黄芩苷、芦丁、蒙花苷和芹菜素的质量浓度分别为0.072～1.446μg（r=0.9997）、0.043～0.864μg（r=0.9995）、0.094～1.884μg（r=0.9997）、0.150～3.000μg（r=0.9998）、0.043～0.856μg（r=0.9996）内与峰面积线性关系良好。绿原酸、黄芩苷、芦丁、蒙花苷和芹菜素的加样回收率分别为97.67%、98.19%、97.92%、98.12%、98.02%和1/17/5（n=6）。由上述内容可以知道，小蓟配方颗粒中含有多种有效成分，在现有HPLC（-DAD）法建立的测定标准中，所测成分大部分仅为其中2至3类物质的指标成分，而不是与其疗效相关的全部的主要有效成分。因此，对于小蓟配方颗粒而言，更需要的是一种全面的针对小蓟配方颗粒中有效成分的含量检测。现有技术中，色谱指纹图谱分析是一种十分可行的质量控制模式，它可为中药材和中成药提供综合的、宏观的和可量化的质量评价。为此，本专利技术提供了一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，通过高效液相色谱法经梯度脱洗方式构建得到小蓟配方颗粒的指纹谱图，用于测定小蓟配方颗粒中蒙花苷、芹菜素、咖啡酸、绿原酸、原儿茶酸的多种有效物质，可作为小蓟配方颗粒的精确质量控制方法，具有分离效果好、灵敏度高的特点。本专利技术通过下述技术方案实现：一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，包括以下步骤：A：取小蓟配方颗粒于甲醇中，经超声处理、放冷、滤过后，制得供试品溶液，备用；B：取蒙花苷对照品、芹菜素对照品、咖啡酸对照品、绿原酸对照品、原儿茶酸对照品，混合后用甲醇溶解，制得参照物溶液，备用；C：测定：分别吸取所述供试品溶液和参照物溶液注入高效液相色谱仪，采用梯度脱洗进行测定，得到小蓟配方颗粒的指纹谱图。所述步骤A中，将小蓟配方颗粒粉末0.1～0.3g，加入10～30ml质量浓度为40～60%的甲醇中，超声处理20～40min，放冷至5～20℃，滤过后制得供试品溶液。所述步骤B中，甲醇的质量浓度为5～100%，控制每1ml参照物溶液中含有10～50μg蒙花苷、10～40μg芹菜素、5～50μg咖啡酸、5～50μg绿原酸、5～50μg原儿茶酸。所述步骤C中，所述高效液相色谱仪的检测条件满足：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸溶液，进行梯度脱洗，色谱柱温度：30～40℃，流速：0.8～1.2ml/min，检测波长：320～336nm。所述梯度脱洗如下：0～10min：10%流动相A、90%流动相B，10～20min：10～15%流动相A、90～85%流动相B，20～55min：15～40%流动相A、85～60%流动相B，55～60min：40～50%流动相A、60～50%流动相B，60～80min：50～75%流动相A、50～25%流动相B。所述小蓟配方颗粒的指纹图谱共有9个特征峰，以蒙花苷色谱峰为参照物S峰，9个特征峰的相对保留时间分别为：1号峰0.176、2号峰0.332、3号峰0.355、4号峰0.422（S峰）、5号峰0.624、6号峰0.861、7号峰1.000、8号峰1.168、9号峰2.546，各特征峰的相对保留时间应在规定值的±8%之内。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：（1）本专利技术针对现有小蓟配方颗粒存在的质量控制问题，以小蓟配方颗粒中的多种有效物质蒙花苷、芹菜素、咖啡酸、绿原酸、原儿茶酸为对照物，采用高效液相色谱法构建了小蓟配方颗粒的指纹图谱，不仅为小蓟配方颗粒质量评价体系研究提供了科学的实验依据，还可实现小蓟配方颗粒质量的专属鉴定。（2）本专利技术方法采用甲醇溶解、超声处理的方法对小蓟配方颗粒进行提取，可较全面的检测小蓟配方颗粒中的多种主要有效成分，从而构建小蓟配方颗粒的指纹图谱，为小蓟配方颗粒的整体质量评价提供有效方法。（3）本专利技术方法在特定的检测条件下得到小蓟配方颗粒的特征图谱，以蒙花苷色谱峰为参照物S峰，共有9个色谱峰，色谱峰分布均匀。（4）本专利技术方法以高效液相色谱法采用梯度脱洗进行测定，具有操作简单、分离度好、精密度高、重复性好、检测时间合理等优点。（5）本专利技术方法构建的小蓟配方颗粒的特征图谱与对照本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：/nA：取小蓟配方颗粒于甲醇中，经超声处理、放冷、滤过后，制得供试品溶液，备用；/nB：取蒙花苷对照品、芹菜素对照品、咖啡酸对照品、绿原酸对照品、原儿茶酸对照品，混合后用甲醇溶解，制得参照物溶液，备用；/nC：测定：分别吸取所述供试品溶液和参照物溶液注入高效液相色谱仪，采用梯度脱洗进行测定，得到小蓟配方颗粒的指纹谱图。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
A：取小蓟配方颗粒于甲醇中，经超声处理、放冷、滤过后，制得供试品溶液，备用；
B：取蒙花苷对照品、芹菜素对照品、咖啡酸对照品、绿原酸对照品、原儿茶酸对照品，混合后用甲醇溶解，制得参照物溶液，备用；
C：测定：分别吸取所述供试品溶液和参照物溶液注入高效液相色谱仪，采用梯度脱洗进行测定，得到小蓟配方颗粒的指纹谱图。


2.根据权利要求1所述的一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，其特征在于：所述步骤A中，将小蓟配方颗粒粉末0.1～0.3g，加入10～30ml质量浓度为40～60%的甲醇中，超声处理20～40min，放冷至5～20℃，滤过后制得供试品溶液。


3.根据权利要求1所述的一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，其特征在于：所述步骤B中，甲醇的质量浓度为5～100%，控制每1ml参照物溶液中含有10～50μg蒙花苷、10～40μg芹菜素、5～50μg咖啡酸、5～50μg绿原酸、5～50μg原儿茶酸。


4.根据权利要求1所述的一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法，其特征在于：所述步骤C中，所述高效液相色谱仪的检测条件满足...

【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，胡昌江，姚丽琴，冯健，罗俊，钱江平，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51