一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片制造技术

本发明专利技术提供了一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，属于基因工程技术领域，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上。芯片的敏感性：猪瘟病毒10拷贝、猪伪狂犬病毒100拷贝、猪嵴病毒100拷贝、猪细小病毒I型100拷贝，猪细小病毒IV型100拷贝，猪乙型脑炎病毒100拷贝，猪圆环病毒2型100拷贝，高致病性猪猪繁殖与呼吸综合征病毒100拷贝，美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒10拷贝。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片。
技术介绍
猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒、高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒、猪流行性乙型脑炎病毒等9种病原体严重危害着重养猪业，快速、准确对该类猪病原体进行鉴别诊断，有助于动物疫病的预防和控制，对畜牧业的健康发展具有积极的意义。目前用于猪瘟病毒、猪细小病毒、猪狂伪犬病毒、猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸综合病毒、高致病性猪繁殖和呼吸综合病毒、猪流行性乙型脑炎病毒的实验室方法主要为PCR和荧光定量PCR方法，尽管二者的检测速度、灵敏度和特异性较传统的病毒培养及抗原检测的方法有了明显提高，但鉴于病毒种类繁多，当前临床应用中的PCR和荧光定量PCR检测方法单次只能检测单一或三种以内的猪病毒，无法同时对上述多种猪病毒进行筛查，若要筛查上述猪病原体必须通过多次荧光定量PCR或PCR方法检测后才能明确，费时费力，并且浪费样本。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，采用本专利技术提供的微流体芯片能够同时检测9种猪病原体。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上；所述猪瘟病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～3所示；所述猪伪狂犬病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.4～6所示；所述猪嵴病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.7～9所示；所述猪细小病毒I型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.10～12所示；所述猪细小病毒Ⅳ型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.13～15所示；所述猪流行性乙型脑炎病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.16～18所示；所述美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.19～21所示；所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的的核苷酸序列依次如SEQIDNo.22～24所示；所述猪圆环病毒2型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.25～27所示。优选的，所述猪瘟病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述猪伪狂犬病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述猪嵴病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述猪细小病毒I型引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述猪细小病毒Ⅳ型引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述猪流行性乙型脑炎病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。优选的，所述猪圆环病毒2型引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。本专利技术提供了一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上。采用本专利技术提供的微流体芯片的检测敏感性：猪瘟病毒10拷贝、猪伪狂犬病毒100拷贝、猪嵴病毒100拷贝、猪细小病毒I型100拷贝，猪细小病毒IV型100拷贝，猪流行性乙型脑炎病毒100拷贝，猪圆环病毒2型100拷贝，猪高致病性繁殖与呼吸综合征病毒100拷贝，美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒10拷贝。附图说明图1为猪瘟病毒微流体芯片扩增标准曲线；图2为猪伪狂犬病毒微流体芯片扩增标准曲线；图3为猪嵴病毒微流体芯片扩增标准曲线；图4为猪I型细小病毒微流体芯片扩增标准曲线；图5为猪IV型细小病毒微流体芯片扩增标准曲线；图6为猪流行性乙型脑炎病毒微流体芯片扩增标准曲线；图7为猪圆环病毒2型微流体芯片扩增标准曲线；图8为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒微流体芯片扩增标准曲线；图9为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒微流体芯片扩增标准曲线。具体实施方式本专利技术提供了一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，其特征在于将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上。在本专利技术种，所述猪瘟病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～3所示，具体如下：SEQIDNo.1:5-ATGCCCAYAGTAGGACTAGCA-3；SEQIDNo.2:5-CTACTGACGACTGTCCTGTAC-3；SEQIDNo.3:5-TGGCGAGCTCCCTGGGTGGTCTAAGT-3，在使用时优选在探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。在本专利技术中，所述猪伪狂犬病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.4～6所示，具体如下：SEQIDNo.4:5-ACAAGTTCAAGGCCCACATCTAC-3；SEQIDNo.5:5-GTCYGTGAAGCGGTTCGTGAT-3；SEQIDNo.6:5-ACGTCATCGTCACGACC-3，在使用时优选在探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。在本专利技术中，所述猪嵴病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.7～9所示，具体如下：SEQIDNo.7:5-CACYCGYGTCAGAGATCAGGT-3；SEQIDNo.8:5-AGTCTATTCTACACARRGCGATACAGAGC-3；SEQIDNo.9:5-TGTATCTGGTGTCACGCTGCCA-3，在使用时优选在探针的5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，其特征在于，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上；/n所述猪瘟病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.1～3所示；/n所述猪伪狂犬病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.4～6所示；/n所述猪嵴病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.7～9所示；/n所述猪细小病毒I型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQID No.10～12所示；/n所述猪细小病毒Ⅳ型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQID No.13～15所示；/n所述猪流行性乙型脑炎病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.16～18所示；/n所述美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.19～21所示；/n所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的的核苷酸序列依次如SEQ ID No.22～24所示；/n所述猪圆环病毒2型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQID No.25～27所示。/n...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，其特征在于，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上；
所述猪瘟病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～3所示；
所述猪伪狂犬病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.4～6所示；
所述猪嵴病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.7～9所示；
所述猪细小病毒I型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.10～12所示；
所述猪细小病毒Ⅳ型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.13～15所示；
所述猪流行性乙型脑炎病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.16～18所示；
所述美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.19～21所示；
所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的的核苷酸序列依次如SEQIDNo.22～24所示；
所述猪圆环病毒2型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQIDNo.25～27所示。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢荣辉，徐辉，赵灵燕，王雅婷，张红丽，冯肖肖，柴娟，周蕾，吴贇竑，
申请(专利权)人：浙江省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33