铁皮石斛DcCSLA8基因及其在促进植物多糖的合成中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛DcCSLA8基因，所述基因的序列如下:(a)由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，或(b)与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的核苷酸序列。本发明专利技术还提供了铁皮石斛DcCSLA8基因在促进植物多糖的合成中的应用。通过在植物中提高铁皮石斛DcCSLA8基因，可促进植物多糖的合成。

【技术实现步骤摘要】
铁皮石斛DcCSLA8基因及其在促进植物多糖的合成中的应用
本专利技术涉及铁皮石斛DcCSLA8基因及其在促进植物多糖的合成中的应用。
技术介绍
铁皮石斛(Dendrobiumcatenatum)为兰科石斛属多年生草本植物，以茎入药，具有滋阴清热、益胃生津等功效。葡甘聚糖是铁皮石斛茎中主要的活性多糖，对提高免疫、抗肿瘤、调节血糖、改善记忆衰退等方面具有重要作用。在多种植物中，类纤维合成酶A(cellulosesynthaselikeA，CSLA)基因参与1，4-β-葡甘聚糖的生物合成，是调控植物体内葡甘聚糖骨架合成的关键酶基因。例如，在拟南芥中，CSLA2、CSLA3以及CSLA9共同调控茎中葡甘聚糖的生物合成，CSLA7参与胚胎中葡甘聚糖的生物合成；在魔芋曲霉中AkCSLA3具有葡甘露糖甘露糖基和葡萄糖基转移酶活性；杨树CSLA1编码葡甘聚糖合成酶。在铁皮石斛中，已报道有到8个DcCSLA基因，大部分CSLA基因在茎中表达量高于叶片和根部，其中DcCSLA6基因对甘露糖的合成有促进作用，而其他DcCSLA基因的功能未见报道。因此，克隆DcCSLA8基因，构建过表达载体，对转基因植株多糖含量进行测定与分析，可探讨研究铁皮石斛DcCSLA8基因的功能。
技术实现思路
本专利技术的目的揭晓铁皮石斛DcCSLA8基因的功能应用，并提供铁皮石斛DcCSLA8基因及其在促进植物多糖合成中的应用。本专利技术提供了一种铁皮石斛DcCSLA8基因，所述基因的序列如下:(a)由SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，或(b)与SEQIDNO：1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述铁皮石斛DcCSLA8基因的序列为SEQIDNO：1。本专利技术还提供了上述基因的重组载体、转基因细胞系或重组菌。在一个实施方案中，所述重组菌为将上述基因插入表达载体得到的重组菌。本专利技术还提供了一种铁皮石斛DcCSLA8基因在促进植物多糖的合成中的应用，所述基因的序列如下:(a)由SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，或(b)与SEQIDNO：1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述铁皮石斛DcCSLA8基因的序列为SEQIDNO：1。在一个实施方案中，所述植物为拟南芥或烟草。优选情况下，所述植物为拟南芥。在一个实施方案中，所述应用还包括：将包含铁皮石斛DcCSLA8基因连接到载体上，通过农杆菌介导转化到拟南芥、筛选、培养和获得转基因株系。本专利技术提供了铁皮石斛DcCSLA8基因在促进植物多糖的合成中的应用。通过在植物中提高铁皮石斛DcCSLA8基因，可促进植物多糖的合成。附图说明此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：图1为铁皮石斛DcCSLA8基因PCR扩增电泳结果(M：DL5000DNAMareker)；图2为T1-DcCSLA8菌落PCR扩增电泳结果(M：DL2000DNAMareker；1～8：不同的单克隆)；图3为eHGFP双酶切后，琼脂糖凝胶电泳结果(M：DL5000DNAMareker；1：eHGFP双酶切；2：对照(未进行双酶切的eHGFP)；3：T1-DcCSLA8质粒双酶切)；图4为eHGFP-DcCSLA8转化大肠杆菌PCR扩增结果(M：DL2000DNAMareker1～5：不同单克隆的PCR结果)；图5为eHGFP-DcCSLA8转化农杆菌菌落PCR扩增结果(M：DL2000DNAMareker)；图6为转基因拟南芥的潮霉素抗性筛选；图7为T3代纯合DcCSLA8转基因拟南芥观察；图8为野生型拟南芥和DcCSLA8过表达拟南芥的多糖含量测定。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。1.实验方法1.1实验材料与试剂1.1.1植物材料供试铁皮石斛取自浙江农林大学国家重点实验室药用植物遗传育种团队组培室(培养温度为25℃，光照时间为16h·d-1)。用于遗传转化的拟南芥品种为Col型。1.1.2主要试剂表1试验所需主要试剂1.1.3主要仪器BiometraPCR仪、Lanyan恒温金属浴、Sigma台式高速冷冻离心机、Thermonanodrop2000分光光度计、AB104-N电子分析天平、DK-S24型电热恒温水浴锅、D-37520型高速离心机、GENSYS10SUV-Vis紫外分光光度仪、DHG-9070HA精密性强制对流干燥箱、ALPHA1-2LDPlus冻干机、AB104-N电子分析天平、光吸收酶标仪SpectraMax190等。1.1.4主要缓冲液配方1.1.4.1RNA提取缓冲液制备1)DEPC水：ddH2O加0.1％DEPC原液，摇床过夜，灭菌待用。2)1mol/LTris:12.11gTris溶于60ml灭菌的DEPC水中，用浓HCl调节PH8.0定容至100ml。3)50mMEDTA：18.61Na2EDTA.H2O加入80ml灭菌的DEPC水，搅拌溶解，用NaOH调节PH8.0定容至100ml。4)10mol/LLiCl：42.4gLiCl，100ml灭菌的DEPC水溶解即可。5)提取缓冲液：2gCTAB、2gPVP、10ml1mol/LTris、5ml500mM的EDTA、11.7gNaCl定容至100ml。6)4％β-巯基乙醇。7)氯仿/异戊醇(24：1)。8)SSTE：2.9gNaCl、0.25gSDS、0.5ml1mol/LTris、100μL500mMEDTA，调至PH8.0，定容至50ml。将上述配好的试剂于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min两次备用。1.1.4.2LB培养基混匀后121℃高压灭菌20min，冷却后于4℃保存。液体LB培养基无需加入琼脂1.1.4.3拟南芥转化渗透液(pH＝5.7～5.8)混匀后121℃高压灭菌20min，冷却后于4℃保存。使用时加入0.05％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁皮石斛DcCSLA8基因，其特征在于,所述基因的序列如下:/n(a)由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，或/n(b)与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛DcCSLA8基因，其特征在于,所述基因的序列如下:
(a)由SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，或
(b)与SEQIDNO：1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述铁皮石斛DcCSLA8基因的序列为SEQIDNO：1。


3.含有权利要求1所述基因的重组载体、转基因细胞系或重组菌。


4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌为将权利要求1所述基因插入表达载体得到的重组菌。


5.一种铁皮石斛DcCSLA8基因在促进植物多糖合成中的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈东红，高雅倩，刘京晶，斯金平，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33