丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用。本发明专利技术的实验证明：丹酚酸B能有效地促进MSC的成骨分化潜能，并且能够抑制骨质疏松的形成，促进骨质疏松性骨折的修复，可作为治疗骨质疏松及骨质疏松骨折的药物。

【技术实现步骤摘要】
丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用
本专利技术涉及生物制药
，具体涉及丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用。
技术介绍
骨质疏松是一种骨平衡失调性疾病。人体骨平衡的协调主要是由成骨细胞和破骨细胞协调完成，有研究表明破骨细胞主要负责老化骨吸收，而成骨细胞主要负责新骨形成。骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一类来源于中胚层具有自我更新的非造血干细胞，也是至今研究最为广泛的间充质干细胞群，在体内外兼具有高度自我更新及多潜能分化能力，可分化为成骨细胞。间充质干细胞已广泛以各种形式的组织修复应用于在骨质再生，包括局部和全身注射，特别体现在骨折的动物模型上。MSC在促进骨折愈合方面发挥着重要的作用。但是，在体内环境下，间充质干细胞分化成为功能性的成骨细胞的能力依然有限，严重阻碍了间充质干细胞在组织工程中应用。
技术实现思路
为此，本专利技术提供丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供的应用为丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用。具体的，本专利技术提供丹酚酸B在如下(a)和/或(b)/(c)中的应用：(a)制备治疗骨质疏松的药物；(b)制备治疗骨质疏松骨折的药物；(c)促进骨髓间充质干细胞Runx2蛋白、骨髓间充质干细胞OCN成骨基因表达的药物。本专利技术还提供治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物，其活性成分为丹酚酸B。优选地，所述药物的作用为如下(1)和/或(2)和/或(3)：(1)促进骨髓间充质干细胞Runx2蛋白、骨髓间充质干细胞OCN成骨基因表达；(2)治疗骨质疏松及骨质疏松骨折；(3)促进骨髓间充质干细胞成骨分化优选地，所述药物还促进骨桥蛋白蛋白基因表达。本专利技术中，丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)为唇形科植物丹参的干燥根和根茎，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈的功效。丹酚酸B(SalvianolicacidB)是一种丹参的有效水溶性成分，其分子式为C36H30O16，相对分子质量为718.62。本专利技术具有如下优点：本专利技术的实验证明：丹酚酸B能有效地促进MSC的成骨分化潜能，并且能够抑制骨质疏松的形成，促进骨质疏松性骨折的修复，作为治疗骨质疏松及骨质疏松骨折的药物。本专利技术的丹酚酸B对骨质疏松及骨质疏松骨折的致病机理及治疗作用，提供更多可用于治疗骨质疏松及骨质疏松骨折的药物。附图说明为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。图1为本专利技术提供的MTT法检测丹酚酸B药物毒性的曲线图；图2为本专利技术提供的蛋白印迹法检测在成骨诱导液中加入丹酚酸B和未添加丹酚酸B对照组中的Runx2(runt-relatedtranscriptionfactor2),Osx(Osterix),磷酸化ERK和ERK的表达情况图；图3为本专利技术提供的qPCR检测成骨相关基因表达情况的柱状图，其中，A为骨钙素OCN，B为骨涎蛋白BSP，C为骨桥蛋白OPN；图4为本专利技术提供的茜素红和碱性磷酸酶染色观察成骨现象图，其中，A为诱导14天后使用茜素红染色检测成骨照片图，染色越深，成骨越明显；B为诱导7天后使用碱性磷酸酶染色检测成骨的照片图，染色越深，促成骨作用越强；图5为本专利技术提供的microCT观察骨质疏松和骨质疏松骨折预后图，其中，A为骨质疏松图，B为骨质疏松骨折图。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。为更进一步阐述本专利技术为达成预定专利技术目的所采取的技术手段及功效，下述说明中的多个实施例中的特定特征、结构、特点可由任何合适形式组合。下述实施例所采用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。MEM(Hyclone公司产品)、胎牛血清(Gibco公司产品)、胰蛋白酶(Sigma公司产品)、噻唑蓝(索莱宝公司产品)、超净工作台、Leica倒置显微镜、二氧化碳培养箱(Thermo公司产品)、酶标仪、凝胶成像系统、微计算机断层扫描仪、丹酚酸B(中检所)、96孔板(Corning公司)、骨髓间充质干细胞购于中科院上海细胞所。实施例1、丹MTT法检测丹酚酸B药物毒性1、丹酚酸B的配制：由四川维克奇生物公司购得丹酚酸B(纯度98％)，称取1g后用10ml磷酸缓冲盐溶液(PBS)溶解，制成终浓度为100mg/ml的丹酚酸B母液，再用培养基稀释至不同浓度的工作液。2、丹酚酸B对骨髓间充质干细胞体内增殖的影响将骨髓间充质干细胞接种于96孔板中，细胞密度为5000个/孔，培养24h后加入不同浓度的丹酚酸B工作液进行刺激，终浓度分别为0μM、0.1μM、0.5μM、1μM、5μM，细胞在37℃孵育1天和3天。MTT法测定细胞增殖活性：在37℃条件下，用MTT溶液(终浓度0.5mg/ml)避光放置4h。在完整细胞中形成的蓝色福尔马赞晶体用150μlDMSO，摇匀10min，置于酶标仪在570nm处测定吸光值。如图1所示，结果显示，本专利技术的0.1-10μM丹酚酸B对骨髓间充质干细胞增殖并无影响。实施例2、不同浓度丹酚酸B对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响1、丹酚酸B的配制及稀释同实施例1。2、Westernblot实验验证丹酚酸B促进骨髓间充质干细胞成骨分化的作用：将骨髓间充质干细胞接种在6孔板中，调整细胞密度为100000个/孔，待细胞贴壁后，分别加入终浓度为0μM、0.1μM、0.5μM、1μM、5μM的丹酚酸B作用24h，用PBS洗涤细胞1次，用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞悬液，2000rpm离心5min去除上清，每个样品加入60μlRIPA裂解液，冰水浴裂解30min后，6000rpm离心10min后，收集上清，用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白定量，调蛋白上样量为40μg，加入loadingbuffer后将样品煮沸10min，至此制备好Westernblot样品，接着进行West本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.丹酚酸B在制备治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物中的应用。


2.丹酚酸B在如下(a)和/或(b)/(c)中的应用：
(a)制备治疗骨质疏松的药物；
(b)制备治疗骨质疏松骨折的药物；
(c)促进骨髓间充质干细胞Runx2蛋白、骨髓间充质干细胞OCN成骨基因表达的药物。


3.治疗骨质疏松及骨质疏松骨折药物，其活性成分为丹酚酸B...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐亮亮，李滢，徐道华，李婧斓，刘亚梅，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广东;44