一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，涉及毒性检测技术领域。该奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法包括：将奶粉提取液与水混合后形成培养液，将斑马鱼胚胎置于培养液中培养，通过斑马鱼胚胎的心率或畸形率判断奶粉中黄曲霉毒素M1的超标情况；其中，畸形是依据斑马鱼胚胎的肝脏和卵黄囊情况进行判断。该检测方法无需大型紧密仪器，操作方便，能够实现快速高效地检测。

【技术实现步骤摘要】
一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法
本专利技术涉及毒性检测
，且特别涉及一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法。
技术介绍
近年来，随着生活水平的提高，奶粉中的黄曲霉毒素污染问题逐渐成为人们关注的焦点。由于加工过程中工艺的影响，奶粉中黄曲霉毒素及其代谢产物的污染十分普遍。其中，黄曲霉毒素M1作为黄曲霉毒素的一类主要代谢产物，具有剧毒性和强致癌性，严重威胁着人们的安全与健康，潜在风险不容忽视。然而，目前关于黄曲霉毒素M1的检测方法主要集中于传统的化学检测方法，对于操作人员与操作环境的依赖性较强，耗费大量人力和物力；其结果仅能确定黄曲霉毒素M1的浓度水平，难以直观反映黄曲霉毒素M1对奶粉所造成的实际风险，无法对奶粉安全性进行全面评价。现有的检测方法主要还是利用化学检测的方法，不能从个体的角度全面反映污染物的实际水平以及潜在风险，且检测成本高、效率低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其无需大型精密仪器，操作成本低且能够快速高效地进行检测。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出了一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，包括如下步骤：将奶粉提取液与水混合后形成培养液，将斑马鱼胚胎置于培养液中培养，通过斑马鱼胚胎的心率或畸形率判断奶粉中黄曲霉毒素M1的超标情况；其中，畸形是依据斑马鱼胚胎的肝脏和卵黄囊情况进行判断。本专利技术实施例提供一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法的有益效果是：其通过将奶粉提取液与水混合形成饲养斑马鱼胚胎的培养液，通过测定斑马鱼胚胎的心率、观察斑马鱼胚胎的畸形情况判断奶粉中黄曲霉毒素M1的含量是否超标。该检测方法无需大型紧密仪器，操作方便，能够实现快速高效地检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为正常斑马鱼胚胎与发育畸形斑马鱼胚胎对比图。1-肝脏；2-卵黄囊。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例提供的一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法进行具体说明。本专利技术实施例提供了一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，包括如下步骤：将奶粉提取液与水混合后形成培养液，将斑马鱼胚胎置于所述培养液中培养，通过所述斑马鱼胚胎的心率或畸形率判断奶粉中黄曲霉毒素M1的超标情况；其中，畸形是依据斑马鱼胚胎的肝脏和卵黄囊情况进行判断。需要说明的是，本专利技术实施例通过将奶粉提取液与水混合形成饲养斑马鱼胚胎的培养液，通过测定斑马鱼胚胎的心率、观察斑马鱼胚胎的畸形情况判断奶粉中黄曲霉毒素M1的含量是否超标。该检测方法无需大型紧密仪器，操作方便，能够实现快速高效地检测。专利技术人发现采用斑马鱼检测黄曲霉毒素M1检测的准确性更高，这可能是由于其与人类基因相似度高，且拥有与人相似的组织器官和系统。下面从培养液的制备、斑马鱼的饲养与胚胎选取和培养测试方法三个方面进行介绍。(1)培养液的制备培养液是将奶粉提取液与水混合形成，奶粉提取液与水的体积比为0.8-1.2:1000，优选为0.9-1.1:1000，通过控制奶粉提取液与水的配比，提高检测的准确性。奶粉提取液的制备过程包括：将奶粉与水混合溶解后与提取剂溶液混合提取，然后再与氯化物混合，分离上清液；将得到的上清液进行蒸干并复溶。优选地，提取剂选自0.5-1.5％乙酸乙腈、0.5-1.5％甲酸乙腈、甲醇和乙腈中的至少一种；更优选为0.5-1.5％乙酸乙腈；每克奶粉对应提取剂溶液的用量为5-10mL，每克奶粉对应水的用量为3-8mL；氯化物为氯化钠，每克奶粉对应氯化钠的用量为1.5-2.5g。通过进一步控制提取剂的选择和用量提高对黄曲霉毒素M1的提取率，提升检测的准确性。进一步地，分离上清液的过程是涡旋0.5-1.5min后，在4000-5000rpm/min的转速下离心3-8min，然后再进行过滤分离。通过涡旋和离心能够加速盐析的过程，使乙酸乙腈和水分层。进一步地，将复溶过程所用的溶剂选自二甲基亚砜、丙酮中的至少一种；更优选为二甲基亚砜；上清液与复溶过程所用的溶剂的体积比为70-80:1。通过蒸发和复溶，并选择毒性更低的溶剂进行复溶，防止溶剂作为干扰因素影响测试结果。(2)斑马鱼的饲养与胚胎选取斑马鱼的饲养是在进行交配产卵之前的长时间培养，将斑马鱼在水温27-29℃、溶氧量6-10mg/L、pH为7-7.3的条件下饲养，在饲养过程中一个光周期包括12-16h光照条件和8-12h黑暗条件。专利技术人进一步控制斑马鱼的饲养条件，为斑马鱼生长提供更加优越的条件。优选地，养殖用水经过曝气处理4-6天；饲养饵料为热带小鱼饲料和丰年虫中的至少一种，每日喂食3次；分别在每日10:00-11:00时，15:00-16:00时和20:00-21:00时进行投喂饵料。斑马鱼胚胎是由成年AB系斑马鱼按雌雄比1:1的比例进行交配，采集受精卵并挑选出发育正常的3-4hpf的斑马鱼胚胎，专利技术人发现受精3h左右的斑马鱼胚胎比较适合于进行检测，能够进一步提升检测的准确性。进一步地，在交配取卵日前一晚，将挑选好的成年雌雄斑马鱼移入产卵容器中，并将雌雄斑马鱼分开进行培养10-13h，并保持噪声值小于40-50dB、温度为26-28℃。具体地，在取卵日前一晚20-21时，将雌雄斑马鱼分开进行培养，在取卵日当天的8:00-10:00时将雌雄斑马鱼混合进行自由交配产卵，并于取卵日12:00-1:00时收集产卵容器中的受精卵；在收集受精卵之后，清理出受精卵中的杂质，并进行冲洗后移入培养液中培养。(3)培养测试方法在培养液中培养过程中控制温度为27-28℃，培养时间为90-100h(优选95-98h)，在培养过程中进行避光处理，培养完成后进行心率或畸形率的测定。一般而言，畸形的判断标准包括：心脏(心包水肿、无心房或心室)、脑部(变性、变小、不规则)、耳(变小)、下颌(缺失、畸形)、眼(变小、畸形、色素减少)、肝脏(缺失、变性、大小异常)、卵黄囊吸收(延迟)、肠道(内脏缺失、褶皱缺失、大小异常、颜色异常)，还可以通过观察躯干、尾、尾鳍、脊索畸形、肌肉、体节、循环系统、身体着色等指标是否异常。专利技术人创造性地发现仅观察肝脏或卵黄囊的情况即可判断暴露于黄曲霉毒素M1的斑马鱼胚胎是否畸形。如图1所示，图中A表示发育正常的斑马鱼，B和C为畸形斑马鱼,肝脏1和卵黄囊2分别发生了明显的畸形变化。优选地，分别在培养时间达到2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将奶粉提取物与水混合后形成培养液，将斑马鱼胚胎置于所述培养液中培养，通过所述斑马鱼胚胎的心率或畸形率判断奶粉中黄曲霉毒素M1的超标情况；/n其中，畸形是依据斑马鱼胚胎的肝脏和卵黄囊情况进行判断。/n

【技术特征摘要】
1.一种奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
将奶粉提取物与水混合后形成培养液，将斑马鱼胚胎置于所述培养液中培养，通过所述斑马鱼胚胎的心率或畸形率判断奶粉中黄曲霉毒素M1的超标情况；
其中，畸形是依据斑马鱼胚胎的肝脏和卵黄囊情况进行判断。


2.根据权利要求1所述的奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其特征在于，所述奶粉提取物为奶粉提取液的形式，所述奶粉提取液与水的体积比为0.8-1.2:1000，在所述培养液中培养90-100h后进行心率或畸形率的测定；
优选地，畸形是指肝脏发生变性或卵黄囊吸收延迟。


3.根据权利要求2所述的奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其特征在于，所述奶粉提取液与水的体积比为0.9-1.1:1000；
优选地，在所述培养液中培养过程中控制温度为27-28℃；
优选地，在所述培养液中培养时间为95-98h，在培养过程中进行避光处理。


4.根据权利要求3所述的奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其特征在于，所述奶粉提取液的制备过程包括：将奶粉与水混合溶解后与提取剂溶液混合提取，再经过盐析后分离上清液；将得到的所述上清液进行蒸干并复溶；
优选地，所述提取剂选自0.5-1.5％乙酸乙腈、0.5-1.5％甲酸乙腈、甲醇和乙腈中的至少一种；更优选为0.5-1.5％乙酸乙腈。


5.根据权利要求4所述的奶粉中黄曲霉毒素M1的检测方法，其特征在于，所述提取剂溶液的质量分数为0.5-1.5％，每克奶粉对应所述提取剂溶液的用量为5-10mL，每克奶粉对应水的用量为3-8mL；
优选地，盐析过程所用试剂为氯化物；更优选地，所述氯化物为氯化钠，每克奶粉对应氯化钠的用量为1.5-2.5g。


6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱静，宋晓，贾琪，李耘，钱永忠，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11