检测生殖道致病微生物的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了检测生殖道致病微生物的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒，属于生殖道感染检测技术领域，所述LAMP引物组，包括检测无乳链球菌引物组、粪肠球菌引物组、阴道加德纳菌引物组、白色念珠菌引物组和沙眼衣原体引物组；所述微流控芯片上固定上述LAMP引物组。本发明专利技术所述的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒能够快速灵敏、准确、重复性强的检测无乳链球菌、粪肠球菌、阴道加德纳菌、白色念珠菌和沙眼衣原体。

【技术实现步骤摘要】
检测生殖道致病微生物的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒
本专利技术属于生殖道感染检测
，尤其涉及检测生殖道致病微生物的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒。
技术介绍
生殖道感染(reproductivetractinfection，RTI)是指发生在生殖系统的一组感染性疾病。女性RTI是全球性的社会及公共卫生问题，是女性生殖系统受到细菌、病毒、假丝酵母菌、滴虫、衣原体、支原体等致病微生物感染的总称，具有发病率高、复发率高、流行范围广的特点。感染是多种疾病的源头，如果生殖道感染得不到及时诊断和正确治疗，可使艾滋病(AIDS)和宫颈癌的发生风险增加，以及引起不孕症、异位妊娠、流产、死胎、死产、早产、先天感染及新生儿感染、慢性腹痛等并发症，影响两代人的健康。世界卫生组织(WHO)发布的数据表明，中国女性中有40％患有不同程度的生殖道感染，(廖秦平,张岱.中国女性生殖道感染诊治现状及研究进展[J].国际妇产科学杂志,2011,38(6):469-471+474.)据此估算，中国每年至少有2亿女性患生殖道感染及相关疾病。另据统计表明，妇产科门诊患者中，生殖道感染占55％以上，由此产生的医疗费用每年高达200多亿元。围生期妇女细胞免疫功能下降，体内会产生过量的雌激素，阴道微生态环境易被破坏，进而引起下生殖道感染，最终导致早产、胎膜早破、产褥感染、低出生体重儿、新生儿感染等。早产是指在怀孕28周至37周之间的分娩。早产儿死亡率国内为12.7％～20.8％，(黄善珠.早产儿护理研究进展[J].现代保健·医学创新研究,2008,5(3):26-28.)胎龄越小、体重越低，死亡率越高。早产儿即使存活，亦多有神经智力发育缺陷。心肺功能缺陷、肝脏发育不全、体温中枢发育不全和抗感染能力较低等都是早产儿多发的病症。按照最新的国内每年出生1200万新生儿的数据统计，早产发生率为7％，即每年出生120万的早产儿。在2003～2008年，我国33.6％～40.9％的新生儿死亡与早产直接或间接相关。而感染是导致早产儿的最大的危险因素，感染所致的早产总体来说约占早产的40％。越早发生的早产感染因素所占的比例越大，30周前的早产感染因素占到80％。(崔浩,何春花,缪蕾,etal.1996-2013年中国早产或低出生体重儿死亡率变化趋势分析[J].中华预防医学杂志,2015,49(2)：161-165.；时春艳,董悦.感染与早产[J].实用妇产科杂志,2005,21(11):648-650.)临床常规的生化指标分析无法对患者所感染的病原菌种属做出准确鉴定，大多数临床治疗仍处于经验抗菌素应用阶段，在使用高级抗生素方面存在较大的盲目性。目前临床上对病原菌鉴定的方法主要是培养法。其主要步骤为取样、培养、鉴定。培养法本身存在较多缺陷，不能满足临床需要。首先培养法检测耗时长，培养时间与所感染的细菌种类有关，至少用时2-3天，当临床出现急性病症时，培养法无法适用；其次培养法准确性低，尤其是批量鉴定时，样品之间很容易互相感染；并且难以检出需要特殊培养条件的细菌等；再次受国内实验室安全防护条件的限制，实验室工作人员在分离培养病原菌时存在着高风险被感染的可能；最后培养法对实验条件要求较高，需要的培养基种类较多，乡镇医院、社区医疗单位和户外等均无法使用细菌培养的检测方法，很容易对病人造成贻误。对于普通PCR(PolymeraseChainReaction，聚合酶链式反应)技术鉴定病原微生物的方法，因其对实验室要求高，需要特殊仪器，容易出现假阳性和交叉污染等缺点，也不利于其应用的开展。在当前医疗卫生重心转移的大背景下，在临床上尤其是基层医疗机构对快速准确、操作简单、实验环境要求低的诊断产品具有迫切需求。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供检测生殖道致病微生物的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒；本专利技术所述的LAMP引物组、微流控芯片和试剂盒能够快速灵敏、准确、重复性强的检测无乳链球菌、粪肠球菌、阴道加德纳菌、白色念珠菌和沙眼衣原体。本专利技术提供的LAMP引物组中的5组引物组能特异检测上述5种致病微生物，且不会和其他病原微生物发生交叉反应。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种检测生殖道致病微生物的LAMP引物组，包括检测无乳链球菌引物组、粪肠球菌引物组、阴道加德纳菌引物组、白色念珠菌引物组和沙眼衣原体引物组；其中所述无乳链球菌引物组包括正向外引物1-F3、反向外引物1-B3、正向内引物1-FIP和反向内引物1-BIP；所述1-F3、1-B3、1-FIP、1-BIP的的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～SEQIDNo.4所示；所述粪肠球菌引物组包括正向外引物2-F3、反向外引物2-B3、正向内引物2-FIP和反向内引物2-BIP；所述2-F3、2-B3、2-FIP、2-BIP的的核苷酸序列依次如SEQIDNo.5～SEQIDNo.8所示；所述阴道加德纳菌引物组包括正向外引物3-F3、反向外引物3-B3、正向内引物3-FIP、反向内引物3-BIP、正向环引物3-LF和反向环引物3-LB；所述3-F3、3-B3、3-FIP、3-BIP、3-LF和3-LB的核苷酸序列依次如SEQIDNo.9～SEQIDNo.14所示；所述白色念珠菌引物组包括正向外引物4-F3、反向外引物4-B3、正向内引物4-FIP、反向内引物4-BIP和反向环引物4-LB；所述4-F3、4-B3、4-FIP、4-BIP、4-LB的核苷酸序列依次如SEQIDNo.15～SEQIDNo.19所示；所述沙眼衣原体引物组包括正向外引物5-F3、反向外引物5-B3、正向内引物5-FIP、反向内引物5-BIP和反向环引物5-LB；所述5-F3、5-B3、5-FIP、5-BIP、5-LB的核苷酸序列依次如SEQIDNo.20～SEQIDNo.24所示。本专利技术提供了一种检测生殖道致病微生物的微流控芯片，所述微流控芯片上固定有所述的引物组。优选的，所述微流控芯片包括若干个反应池，每一个反应池内固定一种微生物的引物组。优选的，所述引物1-F3、1-B3、2-F3、2-B3、3-F3、3-B3、4-F3、4-B3、5-F3和5-B3的固定量分别为10～20pmol；所述1-FIP、1-BIP、2-FIP、2-BIP、4-FIP、4-BIP、5-FIP和5-BIP的固定量分别为110～115pmol；所述3-FIP和3-BIP的固定量分别为50～60pmol；所述3-LF、3-LB、4-LB和5-LB的固定量分别为50～60pmol。优选的，所述引物1-F3、1-B3、2-F3、2-B3、3-F3、3-B3、4-F3、4-B3、5-F3和5-B3的固定量分别为14pmol；所述1-FIP、1-BIP、2-FIP、2-BIP、4-FIP、4-BIP、5-FIP和5-BIP的固定量分别为112pmol；所述3-FIP和3-BIP的固定量分别为56pmol；所述3-LF、3-LB、4-LB和5-L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测生殖道致病微生物的LAMP引物组，其特征在于，包括检测无乳链球菌引物组、粪肠球菌引物组、阴道加德纳菌引物组、白色念珠菌引物组和沙眼衣原体引物组；/n其中所述无乳链球菌引物组包括正向外引物1-F3、反向外引物1-B3、正向内引物1-FIP和反向内引物1-BIP；所述1-F3、1-B3、1-FIP、1-BIP的的核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～SEQ ID No.4所示；/n所述粪肠球菌引物组包括正向外引物2-F3、反向外引物2-B3、正向内引物2-FIP和反向内引物2-BIP；所述2-F3、2-B3、2-FIP、2-BIP的的核苷酸序列依次如SEQ ID No.5～SEQ IDNo.8所示；/n所述阴道加德纳菌引物组包括正向外引物3-F3、反向外引物3-B3、正向内引物3-FIP、反向内引物3-BIP、正向环引物3-LF和反向环引物3-LB；所述3-F3、3-B3、3-FIP、3-BIP、3-LF和3-LB的核苷酸序列依次如SEQ ID No.9～SEQ ID No.14所示；/n所述白色念珠菌引物组包括正向外引物4-F3、反向外引物4-B3、正向内引物4-FIP、反向内引物4-BIP和反向环引物4-LB；所述4-F3、4-B3、4-FIP、4-BIP、4-LB的核苷酸序列依次如SEQ ID No.15～SEQ ID No.19所示；/n所述沙眼衣原体引物组包括正向外引物5-F3、反向外引物5-B3、正向内引物5-FIP、反向内引物5-BIP和反向环引物5-LB；所述5-F3、5-B3、5-FIP、5-BIP、5-LB的核苷酸序列依次如SEQ ID No.20～SEQ ID No.24所示。/n...

【技术特征摘要】
1.检测生殖道致病微生物的LAMP引物组，其特征在于，包括检测无乳链球菌引物组、粪肠球菌引物组、阴道加德纳菌引物组、白色念珠菌引物组和沙眼衣原体引物组；
其中所述无乳链球菌引物组包括正向外引物1-F3、反向外引物1-B3、正向内引物1-FIP和反向内引物1-BIP；所述1-F3、1-B3、1-FIP、1-BIP的的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～SEQIDNo.4所示；
所述粪肠球菌引物组包括正向外引物2-F3、反向外引物2-B3、正向内引物2-FIP和反向内引物2-BIP；所述2-F3、2-B3、2-FIP、2-BIP的的核苷酸序列依次如SEQIDNo.5～SEQIDNo.8所示；
所述阴道加德纳菌引物组包括正向外引物3-F3、反向外引物3-B3、正向内引物3-FIP、反向内引物3-BIP、正向环引物3-LF和反向环引物3-LB；所述3-F3、3-B3、3-FIP、3-BIP、3-LF和3-LB的核苷酸序列依次如SEQIDNo.9～SEQIDNo.14所示；
所述白色念珠菌引物组包括正向外引物4-F3、反向外引物4-B3、正向内引物4-FIP、反向内引物4-BIP和反向环引物4-LB；所述4-F3、4-B3、4-FIP、4-BIP、4-LB的核苷酸序列依次如SEQIDNo.15～SEQIDNo.19所示；
所述沙眼衣原体引物组包括正向外引物5-F3、反向外引物5-B3、正向内引物5-FIP、反向内引物5-BIP和反向环引物5-LB；所述5-F3、5-B3、5-FIP、5-BIP、5-LB的核苷酸序列依次如SEQIDNo.20～SEQIDNo.24所示。


2.一种检测生殖道致病微生物的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片上固定有权利要求1所述的引物组。


3.根据权利要求2所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括若干个反应池，每一个反应池内固定一种微生物的引物组。


4.根据权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙群，许文明，董凯，鞠丹，姚小青，
申请(专利权)人：天津红日药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12