变形假单胞菌TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供变形假单胞菌TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法，包含特异性检测变形假单胞菌的引物和探针，其序列如下：gyrB‑F：5’–AGCGTTCGAGCAAGGAAGAGT–3’，gyrB‑R：5’–TTGGTGAAGCACAGCAGGTTT–3’，gyrB‑Probe：5’–FAM–CCTGAACACCAACAAGACGCCGGT–BHQ1–3’。本发明专利技术试剂齐全，操作简单，为以后对该病的流行检测和防控提供了检测工具。

【技术实现步骤摘要】
变形假单胞菌TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及一种鱼类致病菌的检测领域，具体涉及一种变形假单胞菌（Pseudomonasplecoglossicida）的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
变性假单胞菌（Pseudomonasplecoglossicida）是一种呈直或微弯的革兰氏阴性杆菌，具有极性鞭毛，其大小在0.5~1μm×2.5~4.5μm。它于1991年首次从患细菌性出血性腹水病的香鱼（Plecoglossusaltivelis）中分离出来。据报道，变形假单胞菌能够感染香鱼（P.altivelis）、大黄鱼（Larimichthyscrocea）、斜带石斑鱼（Epinepheluscoioides）和虹鳟（Oncorhynchusmykiss）等。由变形假单胞菌引起的内脏白点病是网箱养殖大黄鱼最严重的季节性传染病，每年给大黄鱼养殖业造成巨大的经济损失。TaqMan探针实时荧光定量PCR是一种用于检测细菌和病毒最常用的方法，已经应用到了多种细菌性和病毒性鱼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.变形假单胞菌TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含特异性检测变形假单胞菌的引物和探针，其序列如下：/ngyrB-F：5’ – AGCGTTCGAGCAAGGAAGAGT – 3’，/ngyrB-R：5’ – TTGGTGAAGCACAGCAGGTTT – 3’，/ngyrB-Probe：5’ – FAM – CCTGAACACCAACAAGACGCCGGT – BHQ1 – 3’。/n

【技术特征摘要】
1.变形假单胞菌TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含特异性检测变形假单胞菌的引物和探针，其序列如下：
gyrB-F：5’–AGCGTTCGAGCAAGGAAGAGT–3’，
gyrB-R：5’–TTGGTGAAGCACAGCAGGTTT–3’，
gyrB-Probe：5’–FAM–CCTGAACACCAACAAGACGCCGGT–BHQ1–3’。


2.如权利要求1所述的变形假单胞菌TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）制备盒体；
2）配制检测试剂：
裂解液：100mmol/LEDTA、100mmol/LpH8.0Tris-HCl、1.5mol/LNaCl、2wt.%CTAB；
蛋白酶溶液：20mg/mLProteinaseK；
吸附液：苯酚:氯仿:异戊醇体积比=25:24:1；
析出液：异丙醇；
洗涤液：体积分数为75%乙醇；
溶解液：灭菌超纯水；
PCR反应液：每19.8μLPCR反应液含有0.1μL10mMgyrB-F引物；0.1μL10mMgyrB-R引物；0.4μL10mMgyrB-Probe;10μLPremixExTaq（ProbeqPCR）；9.2μL双蒸水；
阴性对照：灭菌超纯水；
阳性对照：重组质粒pMD18-gyrB；
3）将操作说明书、裂...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈新华，李承伟，何天良，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35