交替假单胞菌属细菌PB02及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)的海洋细菌PB02，本发明专利技术的海洋细菌PB02具有产生蛋白酶的能力。

【技术实现步骤摘要】
交替假单胞菌属细菌PB02及其应用
本专利技术涉及微生物
，特别是涉及交替假单胞菌属(Pseudoalteromonassp.)的新细菌以及该菌株的应用。技术背景
技术实现思路
为此，本专利技术第一方面提供了一种交替假单胞菌属(Pseudoalteromonassp.)细菌PB02。本专利技术第二方面提供了一种蛋白酶液，其中所述的蛋白酶液是利用细菌PB02发酵制备。本专利技术第三方面提供了一种制备蛋白酶液的方法，其包括以下步骤：(a)从PB02斜面上取一环菌接种至2216E液体培养基中，于25℃，150r/min培养24小时，制成种子液；(b)将种子液接种于液体发酵培养基中进行发酵培养；(c)将培养结束的菌悬液在4℃下，10000r/min离心10分钟，上清液即为粗酶液。根据本专利技术第三方面的方法，其中步骤(b)中，所述的液体发酵培养基为2216E液体培养基。根据本专利技术第三方面的方法，其中步骤(b)中，所述的液体发酵培养基的初始pH值为6～8。根据本专利技术第三方面的方法，其中步骤(b)中，所述的液体发酵培养基的装液量为5％～20％。根据本专利技术第三方面的方法，其中步骤(b)中，所述种子液接种量为0.1％～1.5％。根据本专利技术第三方面的方法，其中步骤(b)中，所述发酵培养的温度为15～25℃。根据本专利技术第三方面的方法，其中步骤(b)中，所述发酵培养的时间为8-24小时。附图说明图1为装液量对菌株产酶活力的影响关系图图2为接种量对菌株产酶活力的影响关系图图3为培养温度对菌株产酶活力的影响关系图图4为培养基初始pH值对菌株产酶活力的影响关系图图5为培养时间对菌株产酶活力的影响关系图具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述一、装液量对菌株产酶活力的影响250ml三角瓶中分别盛装12.5ml、25.0ml、50.0ml、75.0ml和100.0ml液体发酵培养基，取培养24小时的PB02种子液，按1％的接种量进行接种，在150r/min的条件下，25℃培养24小时后测酶活力情况。如图1所示，25.0ml装液量时蛋白酶活力最高，装液量多于25.0ml时酶活力开始有逐渐下降的趋势。二、接种量对菌株产酶活力的影响250ml三角瓶中盛装25.0ml液体发酵培养基，取培养24小时的PB02种子液，分别按0.5％、1％、1.5％和2％的接种量接种，在150r/min的条件下，25℃培养24小时后测酶活力情况。如图2所示，以0.5％的接种量为发酵培养的最适接种量。三、培养温度对菌株产酶活力的影响250ml三角瓶中盛装25.0ml液体发酵培养基，取培养24小时的PB02种子液，以0.5％的接种量接种，在150r/min的条件下，分别于15℃、20℃、25℃、30℃和35℃培养24小时后测酶活力情况。结果如图3所示，当温度为15～20℃之间时，酶活力随温度的增加有升高的趋势；当温度高于20℃时，酶活力有下降的趋势；以20℃发酵时，测得的酶活力最高，所以确定20℃为最适发酵温度。四、培养基初始pH值对菌株产酶活力的影响250ml三角瓶中盛装25.0ml液体发酵培养基，将液体发酵培养基的pH分别调至3、4、5、6、7、8、9和10，取培养24小时的PB02种子液，以0.5％的接种量接种，在150r/min的条件下，20℃培养24小时后测酶活力情况。如图4所示，当初始pH值为6～7时，酶活力随初始pH值的增大而出现升高的趋势；初始pH值高于7时，酶活力有逐渐下降的趋势；初始pH值为7时，测得的酶活力最高，所以确定最适宜产酶发酵的初始pH值为7。五、培养时间对菌株产酶活力的影响250ml三角瓶中盛装25.0ml液体发酵培养基，将液体发酵培养基的pH分调至7，取培养24小时的PB02种子液，以0.5％的接种量接种，在100r/min的条件下，20℃培养，每隔8小时取样测酶活力情况。如图5所示，发酵时间为0～16h时酶活力逐渐提高，说明这时的菌体数不断增加；发酵时间为16～32h时酶活力平缓下降，其中16h酶活力最高，所以确定最适产酶发酵时间为16h。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种交替假单胞菌属细菌PB02。/n

【技术特征摘要】
1.一种交替假单胞菌属细菌PB02。


2.一种蛋白酶液，其利用权利要求1所述的细菌PB02发酵制备。


3.制备权利要求2所述蛋白酶液的方法，其包括以下步骤：
(a)从PB02斜面上取菌接种至2216E液体培养基中，于25℃，150r/min培养24小时，制成种子液；
(b)将种子液接种于液体发酵培养基中进行发酵培养；
(c)将培养结束的菌悬液在4℃下，10000r/min离心10分钟，上清液即为粗酶液。


4.根据权利要求3的方法，其中步骤(b)中，所述的液体发酵培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲均革，
申请(专利权)人：浙江医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：浙江;33