具有复制子颗粒和油佐剂的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及使用α病毒‑复制子RNA颗粒和油佐剂针对动物病原体的接种。涉及疫苗和试剂盒，其包含所述复制子颗粒和所述油佐剂。还涉及制备和使用所述疫苗和所述试剂盒的组分的方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有复制子颗粒和油佐剂的疫苗
本专利技术涉及使用α病毒-复制子RNA颗粒和油佐剂针对动物病原体的接种。涉及疫苗和试剂盒(kitofparts)，其包含所述复制子颗粒和所述油佐剂。还涉及制备和使用所述疫苗和所述试剂盒的组分的方法和用途。
技术介绍
多年来，已在疫苗中使用多种载体策略，以努力针对动物病原体产生保护作用。一种这样的载体策略包括使用α病毒衍生的复制子RNA颗粒(RP)[VanderVeen等，AnimHealthResRev.13(1):1-9(2012)doi:10.1017/S1466252312000011；Kamrud等，JGenVirol.91(Pt7):1723-1727(2010)]，其是由几种不同α病毒开发而成，包括委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)[Pushko等，Virology239:389-401(1997)]、辛德毕斯(Sindbis)病毒[Bredenbeek等，JournalofVirology67:6439-6446(1993)]和塞姆利基森林病毒(SemlikiForestvirus)[Liljestrom和Garoff,Biotechnology(NY)9:1356-361(1991)]。编码的病原体抗原在其感染人或动物靶细胞后由复制子颗粒表达。结果是诱导针对表达的抗原的保护性抗体。当与一些传统疫苗制剂比较时，RP具有有吸引力的安全性和功效性质[VanderVeen等，AnimHealthResRev.13(1):1-9(2012)]。RP平台是几种USDA许可的疫苗的基础，包括：猪流行性腹泻疫苗，RNA颗粒(产品代码19U5.P1)、猪流感疫苗，RNA(产品代码19A5.D0)、禽流感疫苗，RNA(产品代码19O5.D0)和处方产品，RNA颗粒(产品代码9PP0.00)。α病毒衍生的复制子RNA颗粒缺乏α病毒结构蛋白基因，但是保留了胞质RNA自我扩增必需的复制元件，并且在高活性26Sα病毒亚基因组启动子的驱动下表达插入的异源核酸。因此，RP是单周期感染性颗粒，由于缺乏结构蛋白基因使得其是复制缺陷的。[Lundstrom,Vaccines6:2392-2415(2014)]。因此，反而必须在适宜的宿主细胞中提供包装和生产复制子颗粒所必需的结构蛋白，以产生RP[参见Vajdy等，Immunol.andCellBiol.82:617-627(2004)]。通常通过复制子RNA和编码结构蛋白的一种或多种“辅助”RNA的瞬时共转染来提供结构蛋白。或者，可以由包装细胞系产生RP，包装细胞系由一个或多个DNA表达盒组成型或瞬时表达病毒结构蛋白。这样，产生的复制子颗粒保留了载体的复制缺陷性质，因为结构蛋白不包括在所得到的RP基因组中[Polo等，Dev.Biol.,104:181–185(2000)]。当用于免疫目标人类或动物时，这些复制缺陷的α病毒RNA复制子颗粒在体内诱导保护性免疫应答。例如，在全身性免疫小鼠和大动物后，基于VEE的α病毒载体激发较强的粘膜和全身性免疫应答[Davis等，IUBMBLife53:209-211(2002)]。佐剂是能够对目标人类或动物的免疫系统提供非特异性刺激的已知化合物。佐剂的标准用途是在基于灭活或亚单位抗原的疫苗中。存在多种佐剂类型和组分，例如：铝盐(氢氧化铝或磷酸铝)、脂质体、葡聚糖、海藻酸盐(alginate)、细菌组分(如细胞壁组分)、矿物油或非矿物油、合成佐剂(如：非离子嵌段聚合物)、聚胺(如硫酸葡聚糖)、CarbopolTM、吡喃和皂苷(如：QuilATM或Q-vacTM)。可以将皂苷和疫苗组分组合在ISCOMTM中。此外，诸如胞壁二肽、二甲基甘氨酸、特夫素(tuftsin)的肽通常作为佐剂。类似地，组合产品如ISATM组合物(Seppic,France)。关于佐剂及其用途和作用的手册是：“Vaccineadjuvants”(Methodsinmolecularmedicine,vol.42,D.O’Haganed.,2000,Humanapress,NJ,ISBN:0896037355)。不应将本文引用的任何参考文献解释为承认该参考文献可作为本申请的“现有技术”。
技术实现思路
本专利技术提供了一种疫苗，其包含编码来源于动物病原体的抗原的α病毒RNA复制子颗粒，其中所述疫苗还包含油佐剂。在本专利技术疫苗的一个实施方式中，油佐剂包含至少一种选自下述的油：矿物油和非矿物油。在本专利技术疫苗的一个实施方式中，油佐剂包含矿物油；优选地，矿物油是液体石蜡油。在本专利技术疫苗的一个实施方式中，油佐剂包含非矿物油；优选地，非矿物油选自合成油、半合成油、动物油和植物油。更优选地，非矿物油选自角鲨烷、角鲨烯、生育酚和植物油。在一个实施方式中，生育酚是α生育酚；更优选地，α生育酚选自维生素E和维生素E-乙酸酯。在一个实施方式中，植物油是油酸酯，更优选地油酸乙酯。更优选地，非矿物油是角鲨烷。在本专利技术疫苗的一个优选实施方式中，油佐剂包含一种以上油。在包含一种以上油的油佐剂的一个实施方式中，佐剂包含矿物油和一种或多种非矿物油。更优选地，油佐剂包含液体石蜡油作为矿物油和一种或多种选自下述的非矿物油：角鲨烷、角鲨烯、维生素E、维生素E-乙酸酯、油酸酯和油酸乙酯。更优选地，油佐剂包含液体石蜡油和维生素E-乙酸酯。最优选地，油佐剂是XSolveTM。在包含一种以上油的油佐剂的一个替代实施方式中，佐剂包含一种以上非矿物油。优选地，油佐剂包含一种以上选自下述的非矿物油：角鲨烷、角鲨烯、维生素E、维生素E-乙酸酯、油酸酯和油酸乙酯。更优选地，油佐剂包含角鲨烷和维生素E乙酸酯。最优选地，油佐剂是SVEATM。在本专利技术疫苗的一个实施方式中，矿物油在油佐剂中的量是油佐剂的1-70％v/v。优选地，油佐剂包含的矿物油的量为油佐剂的5-60％v/v。在本专利技术疫苗的一个实施方式中，非矿物油的总量是油佐剂的0.1-30％w/v。优选地，油佐剂包含的非矿物油的总量为油佐剂的0.5-25％v/v。在一个实施方式中，当非矿物油包含角鲨烷时，油佐剂包含的角鲨烷为油佐剂的0.5-30％w/v；更优选地，油佐剂包含1-25％w/v、2-15％w/v的角鲨烷，或者甚至包含占油佐剂3-10％w/v的角鲨烷。替代地或另外地，在一个实施方式中，当非矿物油包含维生素E乙酸酯时，油佐剂包含的维生素E乙酸酯为油佐剂的0.1-30％w/v；更优选地，油佐剂包含0.5-20％w/v、1-16％w/v维生素E乙酸酯，或者甚至包含占油佐剂2-10％w/v的维生素E-乙酸酯。在本专利技术疫苗的一个实施方式中，将油佐剂配制成油相和水相的乳剂。优选地，将油佐剂配制成水包油(O/W)乳剂。在一个实施方式中，水相包含药学上可接受质量的水。在一个实施方式中，将油佐剂的乳剂配制成微乳，其中内相的液滴小于1微米。优选地，微乳是O/W乳剂，更优选地，使用高能量均质化来制备O/W微乳，甚至更优选地，通过微流化法来制备。在本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗，其包含编码来源于动物病原体的抗原的α病毒RNA复制子颗粒，其中所述疫苗包含油佐剂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171204 US 62/594,342;20171218 US 62/607,1011.一种疫苗，其包含编码来源于动物病原体的抗原的α病毒RNA复制子颗粒，其中所述疫苗包含油佐剂。


2.根据权利要求1所述的疫苗，其中所述油佐剂包含矿物油。


3.根据权利要求1所述的疫苗，其中所述油佐剂包含非矿物油。


4.根据权利要求1、2或3所述的疫苗，其中所述油佐剂包含矿物油和一种或多种非矿物油。


5.根据权利要求4所述的疫苗，其中所述油佐剂包含液体石蜡油和维生素E-乙酸酯。


6.根据权利要求1或3所述的疫苗，其中所述油佐剂包含一种以上非矿物油。


7.根据权利6所述的疫苗，其中所述油佐剂包含角鲨烷和维生素E-乙酸酯。


8.根据权利要求1、2、4或5所述的疫苗，其中所述矿物油在所述油佐剂中的量是所述油佐剂的1-70％v/v。


9.根据权利要求1、3、4、5、6或7所述的疫苗，其中所述非矿物油在所述油佐剂中的总量是所述油佐剂的0.1-30％w/v。


10.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9所述的疫苗，其中将所述油佐剂配制成水包油乳剂。


11.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9或10所述的疫苗，其中所述α病毒RNA复制子颗粒是委内瑞拉马脑炎(VEE)α病毒RNA复制子颗粒。


12.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所述的疫苗，其中来源于动物病原体的编码抗原是来源于病毒或细菌的抗原。


13.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12所述的疫苗，其中来源于动物病原体的编码抗原是来源于选自下述的动物的病原体的抗原：鱼类、禽类和哺乳动物。


14.根据权利要求13所述的疫苗，其中所述哺乳动物是猪。


15.根据权利要求13所述的疫苗，其中所述禽类是鸡或火鸡。


16.根据权利要求13所述的疫苗，其中所述鱼类是慈鲷科成员。


17.根据权利要求16所述的疫苗，其中所述慈鲷科成员是罗非鱼。


18.一种试剂盒，其包括至少两个容器，其中至少一个容器包含编码来源于动物病原体的抗原的α病毒RNA复制子颗粒，和至少一个容器包含油佐剂。


19.一种免疫动物的方法，其包括向所述动物施用免疫有效量的编码来源于动物病原体的抗原的α病毒RNA复制子颗粒和油佐剂。


20.根据权利要求19所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·A·莫勒，E·斯特雷特，R·P·A·M·西格斯，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL