犬莱姆病疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种用于犬莱姆病的疫苗以及单独或与其他保护剂组合制备和使用所述疫苗的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】犬莱姆病疫苗相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(c)要求2017年12月04日提交的美国临时申请系列号62/594,342的优先权。
本专利技术涉及用于犬莱姆病的新疫苗。还提供了单独或与其他保护剂组合的疫苗的制备和使用方法。
技术介绍
犬莱姆病由感染疏螺旋体(Borrelia)属种(spp.)的螺旋体引起，主要包括在美国的B.burgdorferi狭义(ss)以及在欧洲的B.burgdorferiss、B.garinii和B.afzelii[Baranton等，Int.J.Sys.Bacteriol.42:378-383(1992)；Hovius等，J.Clin.Microbiol.38:2611-2621(2000)]。螺旋体通过吸食血液的感染硬蜱属种(Ixodesspp.)蜱虫(ticks)传播，感染在犬中引起从亚滑膜炎到急性关节炎和关节痛的临床体征[Jacobson等，Semin.Vet.Med.Surg.11:172-182(1996)；Summers等，J.Comp.Path.133:1-13(2005)]。重要的是，犬莱姆病病例的发病率每年持续增加，与人类病例数增加一致[Haninkova等，Emerg.Infect.Dis.12:604-610(2006)]。此外，一些犬种(特别是猎犬和伯恩山犬)已发展成严重的肾小球肾炎[Dambach等，VetPathol34:85-96(1997)]，并且并已报道了因并发症而死亡的情况[Littman等，JVetInternMed.20:422-434(2006)]。对Borreliaspp.感染应答产生的抗体具有两种不同功能[Schwan,Biochem.Soc.Trans.31:108-112(2003)；Tokarz等，Infect.Immun.72:5419-5432(2004)]。最常见的体液免疫应答是产生非特异性结合/调理(包被)抗体，其“标记”螺旋体以便被吞噬细胞所摄取。因此，这种体液免疫应答导致产生免疫球蛋白(Ig)M抗体，其结合并诱导杀死外源性抗原的补体介导的膜攻击复合物。然而，IgM抗体应答通常类别转换为结合抗原但不再刺激补体介导的杀伤作用的IgG抗体。相反，IgG抗体与靶抗原结合，并有效“标记”螺旋体以便被吞噬细胞所摄取。接种疫苗后，这种更为典型的调理性IgG抗体应答未能提供有效的保护，这主要是因为诱导免疫应答的蛋白通常是多种其他微生物所共有，并且莱姆病螺旋体可能在血液中更罕见地持续存在[Caine等，InfectImmun83:3184-3194(2015)]，其中与吞噬细胞的相互作用可能是更有效的。的确，调理抗体是由与其他微生物共有的几种蛋白诱导的(即，41kDa蛋白，其包含细菌鞭毛)，这使其在疫苗接种诱导的抗体介导的免疫中的价值充其量是可疑的。另一方面，一些疏螺旋体属种蛋白诱导的抗体应答即使在转换为IgG抗体后仍保持固定补体(杀疏螺旋体)的能力。更具体地，杀疏螺旋体抗体与特定蛋白靶标结合并诱导补体，以形成杀死该生物体的膜攻击复合物，但无需被吞噬细胞清除。与调理抗体不同的是，这种杀疏螺旋体应答已形成了最有效的犬莱姆病细菌疫苗(bacterin)的基础。最早的犬莱姆病细菌疫苗通过诱导对B.burgdorferi外表面蛋白(Osp)A具有特异性的杀疏螺旋体抗体提供保护作用[Chu等，JAVMA201:403-411(1992)；Ma等，Vaccine14:1366-1374(1996)；Wikle等，Intern.J.Appl.Res.Vet.Med.4:23-28(2006)；和Straubinger等，Vaccine20:181-193(2002)]。该方法可能是有效的，但现在发现，这种策略具有重大缺陷，可能导致疫苗接种失败。例如，抗体仅识别表达OspA的B.burgdorferiss螺旋体[Jobe等，J.Clin.Microbiol.32:618-622(1994)；Lovrich等，Infect.Immun.63:2113-2119(1995)]，且蜱虫也经常感染不表达OspA的B.burgdorferiss螺旋体[Fikrig等，Infect.Immun.63:1658-1662(1995)；Ohnishi等，Proc.Natl.Acad.Sci.98:670-675(2001)]。此外，蜱虫还经常感染其他疏螺旋体属种，如B.afzelii或B.garinii[Ornstein等，J.Clin.Microbiol.39:1294-1298(2001)]，其也引起莱姆病，且OspA抗体是基因种特异性的[Lovrich等，Infect.Immun.63:2113-2119(1995)]。此外，提供保护的“机会窗”之所以短暂，是因为在感染的蜱虫进食后不久，OspA的表达即被关闭[Schwan等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:2909-2913(1995)]，OspA的表达介导附着至蜱虫中肠[Pal等，JClinInvest106:561-569(2000)]。与基于OspA的犬莱姆病疫苗的开发一致，研究人员发现B.burgdorferissOspC蛋白也诱导保护性杀疏螺旋体抗体[Rousselle等，J.Infect.Dis.178:733-741(1998)；Ikushima等，FEMSImmunol.Med.Microbiol.29:15-21(2000)]，但是认为该应答对于有效的莱姆病疫苗是没有用的，因为即使在同一地理区域收集的B.burgdorferiss分离物中，OspC的异质性也极高[Ing-Nang等，Genetics151:15-30(1999)；Buckles等，Clin.Vacc.Immunol.13:1162-1165(2006)]。因此，研究人员推测，OspC杀疏螺旋体抗体只能针对少量莱姆病螺旋体提供抗体介导的免疫。一致地，Callister等[U.S.6,210,676和U.S.6,464,985]建议使用特异性针对Osp羧基(C)末端的OspC免疫原性多肽片段，将其单独或与OspA多肽联合用于疫苗中，以保护人和其他哺乳动物免于罹患莱姆病。具体而言，该策略诱导与OspC羧基(C)末端内的7个氨基酸表位特异性结合的杀疏螺旋体抗体[Jobe等，Clin.Diagn.Lab.Immuno.10:573-578(2003)；Lovrich等，Clin.Diagn.Lab.Immunol.12:746-751(2005)]，因为该表位在迄今已鉴定的所有B.burgdorferiss菌株中均是保守的，并且在其他病原性疏螺旋体属种中也是保守的(如在BLAST检索中找到的)。因此，无论OspC基因的系统(phyletic)特征如何，预期诱导针对保守表位的OspC杀疏螺旋体抗体的疫苗将针对每种B.burgdorferiss“菌株”提供保护作用，还能够针对其他犬莱姆病病原体(如B.garinii或B.afzelii)提供保护作用。Livey等[U.S.6,872本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫原性组合物，其包含两种或更多种α病毒RNA复制子颗粒，每种各自编码一个或多个伯氏疏螺旋体抗原或其抗原性片段；/n其中一种α病毒RNA复制子颗粒编码一个或多个伯氏疏螺旋体外表面蛋白A(OspA)或其抗原性片段，和其中另一种α病毒RNA复制子颗粒编码一个或多个伯氏疏螺旋体外表面蛋白C(OspC)或其抗原性片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171204 US 62/594,3421.一种免疫原性组合物，其包含两种或更多种α病毒RNA复制子颗粒，每种各自编码一个或多个伯氏疏螺旋体抗原或其抗原性片段；
其中一种α病毒RNA复制子颗粒编码一个或多个伯氏疏螺旋体外表面蛋白A(OspA)或其抗原性片段，和其中另一种α病毒RNA复制子颗粒编码一个或多个伯氏疏螺旋体外表面蛋白C(OspC)或其抗原性片段。


2.一种免疫原性组合物，其包含编码两个或更多个伯氏疏螺旋体抗原的α病毒RNA复制子颗粒；其中至少一个伯氏疏螺旋体抗原是外表面蛋白A(OspA)或其抗原性片段；和其中至少一个其他伯氏疏螺旋体抗原是外表面蛋白C(OspC)或其抗原性片段。


3.根据权利要求2所述的免疫原性组合物，其包含第一和第二α病毒RNA复制子颗粒，每种各自编码OspA或其抗原性片段和OspC或其抗原性片段，其中所述第一RNA复制子颗粒包含位于编码OspC或其抗原性片段的核酸序列的上游的编码OspA或其抗原性片段的核酸序列，和所述第二RNA复制子颗粒包含位于编码OspA或其抗原性片段的核酸序列的上游的编码OspC或其抗原性片段的核酸序列。


4.根据权利要求1、2或3所述的免疫原性组合物，其中至少一种所述α病毒RNA复制子颗粒是委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)RNA复制子颗粒。


5.根据权利要求1、2、3或4所述的免疫原性组合物，其包含一种或多种另外的α病毒RNA复制子颗粒，其编码选自下述的伯氏疏螺旋体抗原：来源于与所述OspA不同的伯氏疏螺旋体菌株的第二OspA或其抗原性片段，来源于与所述OspC不同的伯氏疏螺旋体菌株的第二OspC或其抗原性片段，及其任何组合。


6.根据权利要求5所述的免疫原性组合物，其中所述一种或多种另外的α病毒RNA复制子颗粒是VEEVRNA复制子颗粒。


7.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的免疫原性组合物，其中至少一个OspA来源于B.burgdorferi菌株297和至少一个OspC来源于B.burgdorferi菌株50772。


8.根据权利要求7所述的免疫原性组合物，其中所述OspA包含与SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，和所述OspC包含与SEQIDNO:4的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。


9.一种有助于预防由于伯氏疏螺旋体感染引起的疾病的疫苗，其包含权利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·L·拉弗勒，J·C·丹特，M·A·莫勒，S·M·卡利斯特，许志昌，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL