复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法，它包括以下步骤：乙酰半胱氨酸对照品和乙酰酪氨酸对照品溶液配制、供试品溶液配制、确定色谱条件、对对照品溶液进行高效液相色谱检测并记录峰面积、对供试品溶液进行高效液相色谱检测并记录峰面积，再采用外标法计算供试品中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量。本发明专利技术采用耐水反相色谱柱，以硫酸水溶液与乙腈相结合作为流动相，梯度洗脱，达到同时对复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量进行测定的目的。该方法操作简单、色谱柱平衡快、专属性好、准确性佳、重现性好。

【技术实现步骤摘要】
复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法
本专利技术涉及一种检测乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的方法，具体涉及到一种利用HPLC检测复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的方法。
技术介绍
乙酰半胱氨酸、乙酰酪氨酸是复方氨基酸注射液中两个含有乙酰基的主成分，由于该基团易水解，无法使用现有的衍生法检测其含量。乙酰半胱氨酸极性强，紫外吸收弱，在普通C18色谱柱，和其他大部分组分一样，保留很弱，难分离。而乙酰酪氨酸由于结构中含有苯环，和C18作用力较强，与乙酰半胱氨酸相反，需要使用较强流动相才能洗脱。普通离子对色谱法保留时间不重现、色谱柱寿命短，亲水模式色谱法HILIC色谱柱较难平衡且分析时间较长，阳离子交换色谱柱对此两种成分专属性差。因此，如何使用同一个体系快速准确的检测出复方氨基酸注射液中二者的含量成为一个难点。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种操作简单、色谱柱平衡快、专属性好、准确性佳且重现性好的复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法。按照本专利技术提供的技术方案，所述复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法包括以下步骤：步骤一、使用0.01～0.1mol/L盐酸作为溶剂配制浓度均为0.010mg/ml～0.080mg/ml的乙酰半胱氨酸对照品和乙酰酪氨酸对照品溶液；步骤二、复方氨基酸注射液加溶剂0.01～0.1mol/L盐酸进行稀释后作为供试品溶液；步骤三、确定色谱条件：色谱柱：采用耐水反相色谱柱；流动相：流动相A为pH值为3.0-3.5的硫酸水溶液；流动相B：流动相A与乙腈按体积比为70:30的比例混合；线性梯度洗脱条件为：0～7分钟：100％流动相A、0％流动相B；7～7.1分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为70％流动相A、30％流动相B；7.1～20分钟：70％流动相A、30％流动相B；20～20.1分钟：由70％流动相A、30％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；20.1分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；或者，线性梯度洗脱条件为：0～7分钟：100％流动相A、0％流动相B；7～7.1分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为60％流动相A、40％流动相B；7.1～17分钟：60％流动相A、40％流动相B；17～17.1分钟：由60％流动相A、40％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；17.1分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；或者，线性梯度洗脱条件为：0～6.5分钟：100％流动相A、0％流动相B；6.5～8.5分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为70％流动相A、30％流动相B；8.5～20分钟：70％流动相A、30％流动相B；20～21分钟：由70％流动相A、30％流动相B匀速变为0％流动相A、100％流动相B；21～23分钟：0％流动相A、100％流动相B；23～24分钟：由0％流动相A、100％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；24分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；流速：0.9-1.1mL/min；柱温：23-30℃；检测波长：200-210nm；进样器温度：5℃；步骤四、对所述对照品溶液进行高效液相色谱检测，记录峰面积；步骤五、对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，记录峰面积，再采用外标法计算供试品中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量。作为优选，步骤一和步骤二中所用溶剂为0.1mol/L盐酸。作为优选，步骤三中，流速为1.0mL/min。作为优选，步骤三中，柱温为25℃。作为优选，步骤三中，检测波长为210nm。本专利技术采用耐水反相色谱柱，以硫酸水溶液与乙腈相结合作为流动相，梯度洗脱，达到同时对复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量进行测定的目的。该方法操作简单、色谱柱平衡快、专属性好、准确性佳、重现性好，可用于氨基酸注射液或者乙酰半胱氨酸、乙酰酪氨酸原料药中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的定性或定量分析。附图说明图1是本专利技术实施例1中供试品溶液的高效液相色谱图。图2是本专利技术实施例2中供试品溶液的高效液相色谱图。图3是本专利技术实施例3中供试品溶液的高效液相色谱图。图4是本专利技术实施例4中供试品溶液的高效液相色谱图。图中：NAC—乙酰半胱氨酸，NAT—乙酰酪氨酸。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1一种复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法包括以下步骤：步骤一、NAC和NAT贮备液制备：精密称定NAC对照品25mg，至25ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至最大刻度；精密称定NAT对照品26.9mg，至25ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至最大刻度；NAC和NAT对照品溶液制备：分别精密移取1mlNAC和1mlNAT对照品贮备液至同一25ml容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至最大刻度；步骤二、精密移取复方氨基酸注射液1mL于20mL容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至最大刻度，稀释倍数为20；步骤三、确定色谱条件：色谱柱：采用250mm×4.6mm、5μm的AgilentSB-Aq色谱柱；流动相：流动相A为pH值为3.5的硫酸水溶液；流动相B：流动相A与乙腈按体积比为70:30的比例混合；线性梯度洗脱条件为：0～7分钟：100％流动相A、0％流动相B；7～7.1分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为70％流动相A、30％流动相B；7.1～20分钟：70％流动相A、30％流动相B；20～20.1分钟：由70％流动相A、30％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；20.1分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：210nm；进样器温度：5℃；步骤四、对所述对照品溶液进行高效液相色谱检测，记录峰面积；步骤五、对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测并输出色谱图，记录峰面积，如图1所示，再采用外标法计算供试品中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量。供试品与对照品的色谱分离参数见表1，表1色谱参数显示，NAC和NAT与相邻峰有很好的分离效果。外标法计算供试品中NAC和NAT的含量。含量计算公式：供试品溶液中NAC(NAT)的峰面积/对照品溶液中NAC(NAT)的峰面积*对照品溶液中NAC(NAT)的浓度*供试品稀释倍数。实施例2一种复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法包括以下步骤：步骤一、NAC和NAT贮备液制备：精密称定NAC对照品25mg，至25ml量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法，其特征是该检测方法包括以下步骤：/n步骤一、使用0.01~0.1mol/L盐酸作为溶剂配制浓度均为0.010mg/ml~0.080mg/ml的乙酰半胱氨酸对照品和乙酰酪氨酸对照品溶液；/n步骤二、复方氨基酸注射液加溶剂0.01~0.1mol/L盐酸进行稀释后作为供试品溶液；/n步骤三、确定色谱条件：/n色谱柱：采用耐水反相色谱柱；/n流动相：流动相A为pH 值为3.0-3.5的硫酸水溶液；流动相B：流动相A与乙腈按体积比为70:30的比例混合；/n线性梯度洗脱条件为：0~7分钟：100%流动相A、0%流动相B；7~7.1分钟：由100%流动相A、0%流动相B 匀速变为70%流动相A、30%流动相B ；7.1~20分钟：70%流动相A、30%流动相B；20~20.1分钟：由70%流动相A、30%流动相B 匀速变为100%流动相A、0%流动相B；20.1分钟以后：100%流动相A、0%流动相B；/n或者，线性梯度洗脱条件为：0~7分钟：100%流动相A、0%流动相B；7~7.1分钟：由100%流动相A、0%流动相B 匀速变为60%流动相A、40%流动相B ；7.1~17分钟：60%流动相A、40%流动相B；17~17.1分钟：由60%流动相A、40%流动相B 匀速变为100%流动相A、0%流动相B ；17.1分钟以后：100%流动相A、0%流动相B；/n或者，线性梯度洗脱条件为：0~6.5分钟：100%流动相A、0%流动相B；6.5~8.5分钟：由100%流动相A、0%流动相B 匀速变为70%流动相A、30%流动相B ；8.5~20分钟：70%流动相A、30%流动相B；20~21分钟：由70%流动相A、30%流动相B 匀速变为0%流动相A、100%流动相B ；21~23分钟：0%流动相A、100%流动相B；23~24分钟：由0%流动相A、100%流动相B 匀速变为100%流动相A、0%流动相B ；24分钟以后：100%流动相A、0%流动相B；/n流速：0.9-1.1mL/min；/n柱温：23-30℃；/n检测波长：200-210nm；/n进样器温度：5℃；/n步骤四、对所述对照品溶液进行高效液相色谱检测，记录峰面积；/n步骤五、对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，记录峰面积，再采用外标法计算供试品中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法，其特征是该检测方法包括以下步骤：
步骤一、使用0.01~0.1mol/L盐酸作为溶剂配制浓度均为0.010mg/ml~0.080mg/ml的乙酰半胱氨酸对照品和乙酰酪氨酸对照品溶液；
步骤二、复方氨基酸注射液加溶剂0.01~0.1mol/L盐酸进行稀释后作为供试品溶液；
步骤三、确定色谱条件：
色谱柱：采用耐水反相色谱柱；
流动相：流动相A为pH值为3.0-3.5的硫酸水溶液；流动相B：流动相A与乙腈按体积比为70:30的比例混合；
线性梯度洗脱条件为：0~7分钟：100%流动相A、0%流动相B；7~7.1分钟：由100%流动相A、0%流动相B匀速变为70%流动相A、30%流动相B；7.1~20分钟：70%流动相A、30%流动相B；20~20.1分钟：由70%流动相A、30%流动相B匀速变为100%流动相A、0%流动相B；20.1分钟以后：100%流动相A、0%流动相B；
或者，线性梯度洗脱条件为：0~7分钟：100%流动相A、0%流动相B；7~7.1分钟：由100%流动相A、0%流动相B匀速变为60%流动相A、40%流动相B；7.1~17分钟：60%流动相A、40%流动相B；17~17.1分钟：由60%流动相A、40%流动相B匀速变为100%流动相A、0%流动相B；17.1分钟以后：100%流动相A、0%流动相B；
或者，线性梯度洗脱条件为：0~6.5分钟：100%流动相A、0%流动相B；6.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：关凤，徐大星，何翠翠，
申请(专利权)人：费森尤斯卡比华瑞制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32