一种细胞内超氧化物的检测方法技术

本发明专利技术公开一种细胞内超氧化物的检测方法，使用二甲亚砜将荧光探针溶解作为母液，使用细胞培养基配置成含有荧光探针的细胞培养液；细胞置于含胎牛血清的细胞培养基中培养；抽取卷烟样品并抽吸，收集烟气总粒相物，根据烟气总粒相物的质量加入相应体积的二甲亚砜，得到烟气总粒相物储备液；细胞培养；使用荧光显微镜观察细胞内荧光探针的荧光信号，获取细胞内超氧化物的浓度水平。本发明专利技术通过研究烟气暴露后细胞内的活性氧浓度水平，用于评估烟气暴露对细胞的氧化应激反应的影响，对烟气成分的安全性进行生物学评价，反向为安全卷烟的研发和生产提供科学参考。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞内超氧化物的检测方法
本专利技术属于细胞内活性氧的生化分析
，涉及一种细胞内超氧化物的检测方法。
技术介绍
活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)是一类具有高化学活性的小分子基团，包括了羟基自由基、氮氧自由基、烷氧自由基和过氧化物等，细胞内过高的活性氧水平能够对细胞膜、功能蛋白以及核酸造成损伤，并可能进一步导致疾病的发生。卷烟烟气是一种重要的人居环境污染物，被证明含有大量活性氧，主要包括气相部分的烷氧自由基、氮氧自由基以及粒相部分的芳香烃自由基、醌基自由基等，这些活性氧分子进入生物体内能够影响细胞内的氧化应激反应，并最终对DNA产生不可逆的氧化损伤。目前对活性氧的分析检测方法主要有化学发光法、紫外-可见吸收分光光度法、荧光光度法、电子自旋探针以及电化学分析等方法，其中荧光分析法由于具有高选择性、高灵敏度、以及能对活性氧物种进行实时跟踪等优点，已在生命科学、食品科学、环境科学等领域得到了广泛应用。性能优良的荧光探针是构筑相应荧光分析方法的基础。近年来，随着合成技术的不断提高，一系列具有发射波长长、光稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞内超氧化物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1)使用二甲亚砜将荧光探针溶解作为母液，使用细胞培养基配置成含有荧光探针的细胞培养液；/n步骤2)细胞置于含胎牛血清的细胞培养基中培养，当细胞汇合率为70％～80％时，用胰酶消解，培养基重悬制成单细胞悬液，调节细胞浓度，接种到孔板，过夜培养；/n步骤3)制备烟气冷凝物：抽取卷烟样品并抽吸，收集烟气总粒相物，根据烟气总粒相物的质量加入相应体积的二甲亚砜，得到烟气总粒相物储备液；/n步骤4)：将步骤2)培养得到的细胞，经步骤3)制备的烟气冷凝物暴露处理，更换步骤1)制备得到的细胞培养液继续培养；/n步骤5)使用荧光显微镜观察细胞内...

【技术特征摘要】
1.一种细胞内超氧化物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1)使用二甲亚砜将荧光探针溶解作为母液，使用细胞培养基配置成含有荧光探针的细胞培养液；
步骤2)细胞置于含胎牛血清的细胞培养基中培养，当细胞汇合率为70％～80％时，用胰酶消解，培养基重悬制成单细胞悬液，调节细胞浓度，接种到孔板，过夜培养；
步骤3)制备烟气冷凝物：抽取卷烟样品并抽吸，收集烟气总粒相物，根据烟气总粒相物的质量加入相应体积的二甲亚砜，得到烟气总粒相物储备液；
步骤4)：将步骤2)培养得到的细胞，经步骤3)制备的烟气冷凝物暴露处理，更换步骤1)制备得到的细胞培养液继续培养；
步骤5)使用荧光显微镜观察细胞内荧光探针的荧光信号，获取细胞内超氧化物的浓度水平。


2.根据权利要求1所述的细胞内超氧化物的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述细胞培养基为a-MEM培养基，其成分是不含核糖核酸和脱氧核糖核酸，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml，1000mg/LD-葡萄糖，292mg/LL-谷氨酰胺，110mg/L丙酮酸钠，2200mg/L碳酸氢钠，pH值7.0-7.4。


3.根据权利要求1所述的细胞内超氧化物的检测方法，其特征在于，所述荧光探针为BES-S...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶晓秋，刘珊珊，熊巍，师默闻，范子彦，张海燕，景浩，王颖，韶济民，靳冬梅，
申请(专利权)人：中国烟草总公司四川省公司，国家烟草质量监督检验中心，中国烟草总公司西藏自治区公司，
类型：发明
国别省市：四川;51