一种肺癌的筛查试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种肺癌筛查试剂盒，它是检测肺组织ZNF808基因甲基化的试剂盒。本发明专利技术还提供了检测ZNF808基因甲基化的试剂在制备肺癌筛查试剂中的用途。本发明专利技术的试剂盒，可以用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种肺癌的筛查试剂盒
本专利技术涉及一种肺癌的筛查试剂盒。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。非小细胞型肺癌是肺癌中的一类，其约占所有肺癌的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。因此，对肺癌进行早期、快速诊断非常重要。锌指蛋白是一类含有锌指结构的蛋白，所述锌指结构是通过结合锌离子稳定的短的蛋白折叠结构。锌指蛋白能与某些特定RNA/DNA结合，是生物体内一大类重要的基因调控因子。ZNF808是一种锌指蛋白，目前鲜有对该蛋白的报道，仅见一篇关于ZNF808基因突变纯合子作为Satoyoshi综合症筛查标记物的报道(AnewlyhomozygousvariantinZNF808：ApossiblecandidategeneforSatoyoshiSyndrome？；JNeurolSci.2017Aug15；379：226-228.)。但人们尚未认识到ZNF808与肺癌的关系。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：提供一种新的肺癌筛查试剂盒。首先，本专利技术提供了一种肺癌筛查试剂盒，它是检测肺组织ZNF808基因甲基化的试剂盒。进一步地，它是检测肺组织第19号染色体第53039010-53039298号碱基的甲基化的试剂盒。进一步地，它是定量甲基化特异性PCR试剂盒。所述试剂盒，包括荧光定量PCR试剂。所述试剂盒，还包括DNA提取试剂和DNA亚硫酸盐转化试剂。进一步地，所述荧光定量PCR试剂中的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。进一步地，所述荧光定量PCR试剂中的探针序列如SEQIDNO.3所示。本专利技术还提供了ZNF808基因的甲基化检测试剂在制备肺癌筛查试剂中的用途。进一步地，所述甲基化检测试剂是定量甲基化特异性PCR试剂。进一步地，所述甲基化检测试剂是甲基化测序试剂。专利技术人通过研究发现，肺癌组织中的ZNF808(尤其是第19号染色体第53039010-53039298号碱基)的甲基化水平显著高于良性肺疾病，将检测ZNF808甲基化的试剂应用于肺癌筛查试剂盒的制备，可为肺癌筛查提供有效的工具，具有十分良好的产业化前景。本专利技术的试剂盒能够实现ZNF808甲基化的快速检测，具有成本低、耗时少、检测有效等优点。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1是肺癌组织及良性肺疾病组织ZNF808甲基化测序结果；横轴单位为bp。图2是肺癌患者及良性肺疾病患者ZNF808平均甲基化水平对比。图3是ZNF808甲基化用于肺癌诊断的敏感度及特异度分析。具体实施方式实施例本专利技术检测组织ZNF808甲基化水平的试剂盒的组成及其使用方法一、甲基化检测试剂盒本试剂盒由以下部分构成：1)AmpliTaqGoldTMDNAPolymerasewithBufferIIandMgCl2(ThermoFisher)：2)100mMdNTPSet(ThermoFisher)；3)Dnase/Rnase-FreeDistilledWater(ThermoFisher)：4)正/反向引物；5)探针。相关序列如下：ZNF808，1)正向引物(SEQIDNO.1)：GGGGAAGTTAGTTTTTAAATTTGTCGTTC2)反向引物(SEQIDNO.2)：CGATCCTATAACCGTCACCCAA3)探针(SEQIDNO.3)：FAM-AGGGTTTTGAGGATAATTCGGAGA-TAMRAβ-actin，1)正向引物(SEQIDNO.4)：TGGTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGT2)反向引物(SEQIDNO.5)：AACCAATAAAACCTACTCCTCCCTTAA3)探针(SEQIDNO.6)：FAM-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA-TAMRA二、使用方法所需试剂：1.提取DNA的试剂：QIAampDNAFFPETissueKit(Qiagen)；组织透明液(西奈山)；RNaseA(17,500U)(2.5ml；100mg/μl；7000units/ml，solution)(Qiagen)；2.重亚硫酸盐转化的试剂：EZDNAMethylation-Goldkit(Zymo)；Dnase/Rnase-FreeDistilledWater(ThermoFisher)步骤：(一)提取DNA(使用QIAampDNAFFPETissueKit(Qiagen))1.取5片带组织的石蜡组织切片放入1.5ml的EP管中。2.向EP管中加入1ml组织透明液，涡旋振荡10s，20,000×g离心2min，吸弃废液。并重复一次上述操作。3.向EP管加入1ml无水乙醇，振荡均匀，20,000×g离心2min，弃上清。以上操作重复一次。吸尽剩余废液。4.37℃金属浴10min以上，蒸干乙醇。5.向EP管加入180μlATL，重悬后，加入20μl蛋白酶K，涡旋振荡。放于56℃水浴孵育1h或以上，直至样本完全溶解。6.在EP管上套上防爆夹，置于90℃金属浴孵育1h，简单离心后将样本放置至室温，加入2μlRNaseA(100mg/μl)，充分混匀后离心，室温放置2min。7.事先充分混合200μlAL与200μl无水乙醇，将混合液加入EP管，混匀离心。8.EP管20,000×g离心2min，以沉淀多余石蜡及组织沉淀。9.将DNA吸附柱放于2ml收集管中，向EP管中混合液加入DNA吸附柱，6,000×g离心1min，将收集管中滤液再加入同一DNA吸附柱，6.000×g离心1min，弃废液。10.DNA吸附柱重新置于2ml收集管，加入AW1500μl，室温6,000×g离心1min，弃废液及收集管。11.DNA吸附柱置于新的2ml收集管，加入AW2500μl，室温20,000×g离心3min，弃废液及收集管。12.将DNA吸附柱置于新1.5mlEP管中，56℃金属浴晾干5min(不超过10min)，并将ATE置于金属浴预热。13.弃1.5mlEP管，将DNA吸附柱置于新的1.5mlLoBind离心管，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肺癌筛查试剂盒，其特征在于：它是检测肺组织ZNF808基因甲基化的试剂盒。/n

【技术特征摘要】
1.一种肺癌筛查试剂盒，其特征在于：它是检测肺组织ZNF808基因甲基化的试剂盒。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：它是检测肺组织第19号染色体第53039010-53039298号碱基的甲基化的试剂盒。


3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：它是定量甲基化特异性PCR试剂盒。


4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：它包括荧光定量PCR试剂。


5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：它还包括DNA提取试剂和DNA亚硫酸盐转化试剂。
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【专利技术属性】
技术研发人员：李为民，李镭，王维雯，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51