过敏原检测制造技术

本发明专利技术涉及过敏原检测，具体而言，本发明专利技术提供用于过敏原的现场和快速检测的过敏原检测分子和装置，所述过敏原包括食品过敏原。本发明专利技术的一个方面是检测样品中一种或多种过敏原的方法，包括步骤(a)获得怀疑含有过敏原的样品，(b)用一种或多种缓冲剂消解(a)的样品，(c)将消解的样品与检测分子接触，(d)用激发器件处理接触的样品，和(e)使检测分子和过敏原的相互作用可视化。

【技术实现步骤摘要】
过敏原检测本申请是申请号为201480071408.6，申请日为2014年10月28日，专利技术名称为“过敏原检测”的中国专利申请的分案申请。相关申请的引用本申请要求以下申请的优先权：2014年7月18日提交的美国临时申请序列号62/026,361；2014年6月10日提交的美国临时申请序列号62/009,958；2014年5月9日提交的美国临时申请序列号61/991,068；2014年2月11日提交的美国临时申请序列号61/938,528；和2013年10月28日提交的美国临时申请序列号61/896,399；以上申请中的每一个的内容全文以引用方式并入本文。对序列表的引用本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表作为文件提供，所述文件标题为20661000PCT7SEQLST.txt，创建于2014年10月28日，大小为49,487字节。电子格式的序列表中的信息全文以引用方式并入本文。
本专利技术涉及用于过敏原检测的方法、装置和分子。
技术介绍
过敏是影响世界范围内成百上千万人的严重医学病状，其中约1千5百万人在美国，包括许多儿童。在过敏反应期间，免疫系统错误地将过敏原作为威胁的目标，并且攻击它。过敏反应可以影响皮肤、消化系统、胃肠道、呼吸系统、循环系统和心血管系统；在一些过敏反应中，影响多个器官系统。过敏反应从轻微至严重或者危及生命。严重的症状可以包括呼吸困难、低血压、胸痛、意识丧失和过敏症。患有过敏的人目前通过避免可能含有特异性过敏原的食品来控制他们的过敏。这些限制对患者的生活品质具有重大影响，并且还没有用于评估食品的真实过敏原含量的方法。在美国，每三分钟就有某人因食品过敏症状被送至急救室。用于测定过敏原存在的快速方法将有巨大的益处。允许患者测试他们的食品并且精确且即时地测定过敏原含量的便携式装置将有益于提供是否要进食该食品的知情决定。McKay的美国专利第5,824,554号示教一种用于检测食品过敏原的餐垫，所述餐垫由吸收材料和施加至所述垫上的隔离区的化学试剂的小斑点形成。如果食品产品含有过敏原物质，化学试剂将改变其外观以表明食品产品中存在过敏原物质。检测限和检测特异性由斑点中使用的化学试剂限制。缺点是：当分析固体食品产品时，因为固体食品产品与斑点试剂之间的长反应时间，很可能是假的阴性。Jung等人的美国专利申请公开第2008/0182339号和美国专利8,617,903示教一种检测过敏原的方法，所述方法通过以下来进行：用被配置以用于分析一种或多种过敏原指示剂的微流控芯片处理样品，用一个或多个检测单元检测过敏原指示剂，和用一个或多个显示单元显示结果。检测系统包括微流控芯片、试剂递送单元、离心单元、分析单元、检测单元、显示单元和记录单元。装置并不充分紧凑，不便携带。Scott等人的美国专利申请公开第2010/0210033号示教一种用于检测食品过敏原的便携式装置，所述便携式装置包括壳体、样品入口、用于表明样品中存在潜在过敏原的器件和包含针对潜在过敏原的抗体的过敏原检测芯片，其中所述抗体用可检测的标签标记。Royds的美国专利第7,527,765号示教一种用于鉴定食品样品中有害污染物的存在的食品测试装置，所述食品测试装置包括一次性的样品容器、包括叶片部件的机械液化器、测试供应隔室，所述测试供应隔室具有对有害污染物有亲和性的试剂，并且所述测试供应隔室能够检测液化食品样品中的有害污染物并且一识别到有害污染物就产生视觉提示。适体以及装置和在检测食品蛋白质中使用它们的方法公开于若干专利和专利申请(所述专利和专利申请中的每一个全文均以引用方式并入本文)中，包括：Kim等人的美国专利第8,633,140号，其示教一种官能化聚丁二炔分子传感器的微阵列；Brunner等人的美国专利第8,618,046号，其示教一种用于使用基于适体的抗CETP抗体诱导抗原治疗动脉粥样硬化的方法；和Rasooly等人的美国专利第8,614,466号，其示教一种使用称为“电渗流”(通过无规电阻网络的电流)的物理原理电学检测半导体中的生物分子结合的方法和系统。在一个实施方案中，用于结合靶分子的捕获分子可以是适体。Lowery,Jr.等人的美国专利第8,563,298号示教用于分析物的收集和检测的NMR系统和方法。Yokota等人的美国专利第8,507,458号示教一种用于递送核酸以通过使用内源性乳糜微粒抑制靶基因表达的系统，其中所述核酸可以是适体。Herzog等人的美国专利第8,236,933号示教具有降低的肽YY(PYY)表达水平的转基因动物和使用所述转基因动物用于筛选适体库并且鉴定PYY的激动剂和拮抗剂的方法。Lieber等人的美国专利第8,232,584号示教一种用于检测分析物的基于荧光的纳米尺度线生物传感器装置和方法，其中适体可以相对于所述纳米尺度线间接固定。Hornbeck等人的美国专利第7,977,462号示教用于检测并且定量恶性上皮肿瘤(carcinoma)和/或白血病中鉴定的新酪氨酸磷酸化位点的横向流(lateralflow)装置。Mata等人的美国专利第7,973,079号示教用于检测可以调节血清视黄醇、视黄醇结合蛋白(RBP)和/或运甲状腺素蛋白(TTR)的活性或可用性的大分子及其它分析物的生物传感器。Gordon等人的美国专利第7,855,057号示教用于检测样品中的少量蛋白质异形体(例如，由于替代剪接的蛋白质异形体，或者不同疾病蛋白质异形体或降解产物)的方法、试剂和设备，包括使用捕获剂的组合，其中所述捕获剂可以为适体。Vukicevic等人的美国专利第7,850,964号示教用于诊断并且治疗骨和软组织的缺陷和病症的骨形态发生蛋白(BMP)(例如BMP-1溶胶原c-蛋白酶)的核酸生物传感器。Buchner等人的PCT公开WO2009/040113、WO2010/108657和WO2013/104540中描述了过敏毒素C5a-(互补因子5a)-结合适体。Buchner等人还在PCT公开WO2009/019007中描述了结合至CXC趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-I)的适体。分子信标(MB)是含有荧光团和淬灭剂部分二者的发夹形状寡核苷酸，且其作用就像开关。当处于闭合状态时，荧光团和淬灭剂聚到一起并且通过共振能量转移猝灭(“关闭”)荧光。当构象变化打开发夹结构并且荧光团和淬灭剂分离时，淬灭剂不能再猝灭并且荧光被恢复(“打开”)。MB在需要探针具有高灵敏性和优异的分子识别特异性的检测装置和诊断测定中特别有用；MB是极其靶特异性的，忽略相差小至单个核苷酸的核酸目标序列。MB的其它优点为：(1)敏感性可以允许实时监控；(2)低背景信号允许大于200倍的荧光增强；(3)MB允许“无需分离的检测”，其中将探针-靶杂交体从过量的未杂交探针隔离是不可能或不希望的。由MB环-茎结构提供的特异性已经被证明可适用于各种生物环境中。本文公开的组成物、方法和装置可适用于基于溶液(体外)的RNA–DNA相互作用的研究、蛋白质-DNA相互作用研究、生命系统内的测量和生物传感器设计。例如，本文描述的组成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测样品中的过敏原的方法，包括/n(a)获得怀疑含有过敏原的样品，/n(b)在筒夹的样品收集腔室中消解样品并从样品提取过敏原，/n(c)在连接至样品收集腔室的检测腔室中将消解的样品与核酸检测分子接触，/n(d)用激发核酸检测分子的激发器件处理接触的样品，和/n(e)使核酸检测分子和过敏原的相互作用可视化并显示该相互作用，/n其中核酸检测分子特异性结合花生过敏原，该花生过敏原包含选自由SEQ ID NO：16、17、42-65组成的组的核酸序列。/n

【技术特征摘要】
20131028 US 61/896,399;20140211 US 61/938,528;20141.一种检测样品中的过敏原的方法，包括
(a)获得怀疑含有过敏原的样品，
(b)在筒夹的样品收集腔室中消解样品并从样品提取过敏原，
(c)在连接至样品收集腔室的检测腔室中将消解的样品与核酸检测分子接触，
(d)用激发核酸检测分子的激发器件处理接触的样品，和
(e)使核酸检测分子和过敏原的相互作用可视化并显示该相互作用，
其中核酸检测分子特异性结合花生过敏原，该花生过敏原包含选自由SEQIDNO：16、17、42-65组成的组的核酸序列。


2.如权利要求1所述的方法，其中核酸检测分子包括荧光团和淬灭剂，荧光团和淬灭剂足够接近以猝灭荧光团的荧光。


3.如权利要求2所述的方法，其中荧光团和淬灭剂连接至核酸检测分子序列的相对末端，并且其中序列的5’-端的5至20个核碱基残基与能够形成发夹结构的序列的3'-端的5至20个核碱基残基至少80％互补，从而使淬灭剂足够接近荧光团以猝灭荧光团的荧光。


4.如权利要求2所述的方法，其中核酸检测分子进一步包括长度5至20个核碱基、退火到核酸检测分子序列的5'-端并且具有与核酸检测分子序列5’-端的至少80％的互补性的接头序列，其中核酸检测分子序列包括荧光团并且接头序列包括淬灭剂，或者其中核酸检测分子序列包括淬灭剂并且接头序列包括荧光团。


5.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其中核酸检测分子与过敏原的结合将淬灭剂从荧光团分离，从而允许荧光团的荧光检测。


6.如权利要求5所述的方法，其中核酸检测分子与过敏原的结合引起检测分子次级结构的变化。


7.如权利要求1所述的方法，其中用K缓冲剂或T缓冲剂消解样品，所述K缓冲剂由0.1MPBS(pH8.0)、0.1％SDS、10mMMgCl2、0.1％明胶、1％NP-40、0.5％脱氧胆酸盐、100mMNaCl和50mMKCl组成，所述T缓冲剂由Tris(pH8.0)、0.1％SDS、10mMMgCl2、0.1％明胶、1％NP-40、0.5％脱氧胆酸盐、100mMNaCl和50mMKCl组成。


8.如权利要求7所述的方法，其中缓冲剂为T缓冲剂。


9.一种检测样品中的过敏原的装置，所述装置包括：
主体，所述主体被配置以支撑：
(a)用于收集和处理样品的筒夹，其中筒夹包括样品收集腔室和蛋白提取膜，所述样品收集腔室经配置用于接受样品和用一种或多种缓冲剂从样品提取过敏原；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·吉尔博格芬，R·B·布朗，
申请(专利权)人：多茨技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US