重组LC3C蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及重组LC3C蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，该应用方法包括步骤如下：（1）获取当日宰杀绵羊的卵巢；（2）抽吸卵巢表面2‑5mm大小的卵泡进行培养；（3）将卵母细胞加入体外受精液的液滴内，备用；（4）体外受精液滴中与卵母细胞共同孵育；（5）统计卵裂率，继续培养144‑168小时后统计囊胚率。通过在绵羊体外成熟培养液中添加一定量的重组LC3C蛋白，能显著提高绵羊体外胚胎的囊胚率。属于重组LC3C蛋白的新用途发明专利技术。

【技术实现步骤摘要】
重组LC3C蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及重组LC3C蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，主要是将重组LC3C蛋白运用到绵羊卵母细胞中进行处理，进一步证明重组LC3C蛋白在促进绵羊体外胚胎囊胚发育率上有新的用途。
技术介绍
在酵母中，自噬发生，细胞识别，细胞吞噬和囊泡闭合等过程都是Atg8依赖性的。而在高级真核生物中，Atg8已进化为LC3/GABARAP蛋白家族。其中微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associatedprotein1lighechain3，LC3）包括4个家组蛋白，分别是LC3A（2个剪接变体，LC3A-a和LC3A-b），LC3B和LC3C。而LC3B是研究最多的家族蛋白，与自噬体的发育和成熟有关，可用于监测自噬活性。在消除胞内病原体时，LC3C（MAP1LC3C）必需与自噬受体NDP52/CALCOCO2优先发生牢固结合，进一步导致细菌吞噬自噬体，从而参与自噬进程的异体自噬过程。但目前还没有将LC3C用于绵羊体外胚胎的研究报道。>专利技术内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组LC3C蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，该应用方法包括步骤如下：/n（1）获取当日宰杀绵羊的卵巢，置入温度在30-35℃，含1000 IU/mL青霉素和1000 IU/mL链霉素的生理盐水中，3-5小时内带回实验室，用生理盐水清洗3-4次；/n（2）用吸有2 mL抽卵液的注射器抽吸卵巢表面2-5 mm大小的卵泡，将注射器内回收的卵泡液置于器皿中，在显微镜下捡出卵母细胞，用体外成熟液洗涤3-5次，加入到添加了重组LC3C蛋白的体外成熟液中，在条件为5% CO

【技术特征摘要】
1.重组LC3C蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，该应用方法包括步骤如下：
（1）获取当日宰杀绵羊的卵巢，置入温度在30-35℃，含1000IU/mL青霉素和1000IU/mL链霉素的生理盐水中，3-5小时内带回实验室，用生理盐水清洗3-4次；
（2）用吸有2mL抽卵液的注射器抽吸卵巢表面2-5mm大小的卵泡，将注射器内回收的卵泡液置于器皿中，在显微镜下捡出卵母细胞，用体外成熟液洗涤3-5次，加入到添加了重组LC3C蛋白的体外成熟液中，在条件为5%CO2，95%空气，温度为38.6℃的CO2培养箱内培养22-24小时；
（3）将步骤（2）中得到的卵母细胞，用绵羊体外受精液洗涤2-4次，按25-30枚/滴的密度加入装有体外受精液的液滴内，备用；
（4）将解冻后的冻精，加入装有体外受精液的试管底部，CO2培养箱中上游20-25分钟，取上层精子混悬液，以1500转/分钟的转速离心4-5分钟，然后弃去上清液，用剩余的精子沉淀进行密度计算，按2-4×106个/mL的密度加入步骤（3）的体外受精液滴中与卵母细胞共同孵育；
（5）将步骤（4）中受精20-22小时的早期胚胎取出，在体外培...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴阳升，林嘉鹏，汪立芹，陈莹，李晓林，刘莉，杨楠，张利，蒋香菊，张雪梅，黄俊成，
申请(专利权)人：新疆畜牧科学院生物技术研究所新疆畜牧科学院中国澳大利亚绵羊育种研究中心，
类型：发明
国别省市：新疆;65