重组PAGE4蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及重组PAGE4蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，该应用方法包括步骤如下：（1）获取当日宰杀绵羊的卵巢；（2）抽吸卵巢表面2‑5mm大小的卵泡进行培养；（3）将卵母细胞加入体外受精液的液滴内，备用；（4）体外受精液滴中与卵母细胞共同孵育；（5）统计卵裂率，继续培养144‑168小时后统计囊胚率。通过在绵羊体外成熟培养液中添加重组PAGE4蛋白，能显著提高绵羊体外胚胎的囊胚率。

Application of recombinant PAGE4 protein in improving the blastocyst rate of sheep in vitro

【技术实现步骤摘要】
重组PAGE4蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及重组PAGE4蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，具体属于重组PAGE4蛋白的新用途专利技术。
技术介绍
PAGE4（Prostate-associatedgene4）基因属于PAGE家族（PAGEfamilymember4），通常在大多数体细胞组织中沉默，而在雄性和雌性动物的睾丸、输卵管、子宫和胎盘等生殖细胞中表达。该基因也是癌症/睾丸抗原（Cancer/TestisAntigen，CTA）基因家族的成员，近年来发现其也在一些肿瘤中特异表达，尤其是在前列腺癌（PCa）中，还包括良性前列腺增生（BPH）的基质和前列腺癌前体的增生性炎性萎缩（PIA）上皮。还有研究发现，前列腺癌组织中PAGE4的转录水平与癌症的生物复发呈负相关，提示PAGE4可能是前列腺癌恶性程度的辅助指标。但目前还没有将PAGE4用于绵羊体外胚胎的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：在绵羊体外胚胎囊胚成熟培养过程中，利用重组PAGE4蛋白对绵羊卵母细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组PAGE4 蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，该应用方法包括步骤如下：/n（1）获取当日宰杀绵羊的卵巢，置入温度在30-35℃，含1000 IU/ml青霉素和1000 IU/mL链霉素的生理盐水中，3-5小时内带回实验室，用生理盐水清洗3-4次；/n（2）用吸有2 mL抽卵液的注射器抽吸卵巢表面2-5 mm大小的卵泡，将注射器内回收的卵泡液置于器皿中，在显微镜下捡出卵母细胞，用体外成熟液洗涤3-5次，加入到添加了重组PAGE4蛋白的体外成熟液中，在条件为5% CO

【技术特征摘要】
1.重组PAGE4蛋白在提高绵羊体外胚胎囊胚率的应用方法，该应用方法包括步骤如下：
（1）获取当日宰杀绵羊的卵巢，置入温度在30-35℃，含1000IU/ml青霉素和1000IU/mL链霉素的生理盐水中，3-5小时内带回实验室，用生理盐水清洗3-4次；
（2）用吸有2mL抽卵液的注射器抽吸卵巢表面2-5mm大小的卵泡，将注射器内回收的卵泡液置于器皿中，在显微镜下捡出卵母细胞，用体外成熟液洗涤3-5次，加入到添加了重组PAGE4蛋白的体外成熟液中，在条件为5%CO2，95%空气，温度为38.6℃的CO2培养箱内培养22-24小时；
（3）将步骤（2）中得到的卵母细胞，用绵羊体外受精液洗涤2-4次，按25-30枚/滴的密度加入装有体外受精液的液滴内，备用；
（4）将解冻后的冻精，加入装有体外受精液的试管底部，CO2培养箱中上游20-25分钟，取上层精子混悬液，以1500转/分钟的转速离心4-5分钟，然后弃去上清液，用剩余的精子沉淀进行密度计算，按2-4×106个/mL的密度加入步骤（3）的体外受精液滴中与卵母细胞共同孵育；
（5）将步骤（4）中受精20-22小时的早期胚胎取出，在体外...

【专利技术属性】
技术研发人员：林嘉鹏，吴阳升，汪立芹，陈莹，李晓林，刘莉，杨楠，张利，蒋香菊，张雪梅，黄俊成，
申请(专利权)人：新疆畜牧科学院生物技术研究所新疆畜牧科学院中国澳大利亚绵羊育种研究中心，
类型：发明
国别省市：新疆;65