抗CLD18A2纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物领域，特别是涉及一种抗CLD18A2纳米抗体。本发明专利技术提供一种抗CLD18A2纳米抗体，所述抗CLD18A2纳米抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQ ID NO.4~11其中之一所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.19~26其中之一所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.33~39其中之一所示的CDR3。本发明专利技术所提供的抗CLD18A2纳米抗体能够与CLD18A2上存在的表位特异性结合的纳米抗体，其对应的融合蛋白对CLD18A2具有良好的特异性和亲和力，且具有明显的肿瘤抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
抗CLD18A2纳米抗体及其应用
本专利技术涉及生物领域，特别是涉及抗CLD18A2纳米抗体及其应用。
技术介绍
密蛋白18(Claudin18，CLD18)是分子量约为28kD，位于上皮和内皮的紧密连接中的跨膜蛋白，紧密连接在相邻细胞之间。正常上皮组织中，由于细胞间隙紧密导致细胞表面的密蛋白难以被接触，而肿瘤细胞的间隙却较为疏松，因此肿瘤细胞上的密蛋白成为胞外抗体及免疫疗法的潜在靶点。CLD18具有四个疏水区，其作为跨膜区形成两个胞外域，其中疏水区1和疏水区2环绕形成胞外域1，疏水区3和疏水区4环绕形成胞外域2。由于基因不同剪切，CLD18形成两种剪切体：CLD18A1和CLD18A2。CLD18A1在正常肺和胃的上皮中选择性表达，而CLD18A2仅在胃细胞中表达；更重要的是，CLD18A2局限在已分化的胃上皮短寿细胞中，但在胃干细胞中不存在(NiimiT,etal.Biol.2001；21(21):7380–7390.)。这些特性显示CLD18A2是一个用于治疗胃癌和其他CLD18A2阳性肿瘤的有临床价值的治疗靶点。单克隆抗体在癌症的检测及生物靶向治疗方面成功的应用，引起了肿瘤治疗的变革。然而，传统的单克隆抗体(约150kD)分子量过大，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分；传统的抗体具有很高的免疫原性，而改造的抗体很难达到原来的亲和力。此外，完全人源化的传统抗体开发周期长，生产成本高，稳定性不够等诸多因素限制其在临床中的应用及普及。随后出现的纳米抗体有来源于成年骆驼体内重链抗体的最小的功能性抗原结合片段，具有高度稳定性和与抗原结合的高亲合力。纳米抗体和常规抗体相比具有许多独特的性质：1)纳米抗体编码的序列与人VH家族3和4同源性高，使得它免疫原性弱；2)纳米抗体分子量小，仅15kDa左右，结构简单，很容易在微生物中大量表达，易于纯化；3)纳米抗体可以识别大量的抗原表位，包括一些藏在分子裂缝中的表位都能识别；4)由于纳米抗体分子量小，使得它们易于穿透组织，到达常规抗体难以到达的部位；5)在变性或者高温环境下纳米抗体具有高可溶性和稳点性。纳米抗体的独特性质和低成本使其应用范围大为拓展，因此，纳米抗体在疾病的治疗和诊断中具有很大的价值，在肿瘤的抗体靶向诊断和治疗中也具有很大的发展前景。然而目前还没有针对CLD18A2抗原表位为靶标的特异性纳米抗体，因此，开发新的有效针对CLD18A2的特异性纳米抗体具有重要价值。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗CLD18A2纳米抗体，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种抗CLD18A2纳米抗体，所述抗CLD18A2纳米抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQIDNO.4～11其中之一所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.19～26其中之一所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.33～39其中之一所示的CDR3。在本专利技术一些实施方式中，所述抗CLD18A2纳米抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：(1)氨基酸序列如SEQIDNO.4所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.19所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.33所示的CDR3；或者(2)氨基酸序列如SEQIDNO.5所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.20所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.34所示的CDR3；或者(3)氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.21所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.35所示的CDR3；或者(4)氨基酸序列如SEQIDNO.7所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.22所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.36所示的CDR3；或者(5)氨基酸序列如SEQIDNO.8所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.23所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.37所示的CDR3；或者(6)氨基酸序列如SEQIDNO.9所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.24所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.38所示的CDR3；或者(7)氨基酸序列如SEQIDNO.10所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.25所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.36所示的CDR3；或者(8)氨基酸序列如SEQIDNO.11所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.26所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.39所示的CDR3。在本专利技术一些实施方式中，所述抗CLD18A2纳米抗体包括框架区FR，所述框架区FR包括氨基酸序列如下所示的FR1～FR4：(1)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.12所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.27所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.40所示的FR4；或者(2)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.13所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.28所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者(3)氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.14所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.29所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者(4)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.15所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者(5)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.16所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.31所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者(6)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.13所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.31所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者(7)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.17所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者(8)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.18所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.32所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4。在本专利技术一些实施方式中，，所述抗CLD18A2纳米抗体的氨基酸序列包括：a)如SEQIDNO.42～49其中之一所示的氨基酸序列；或b)与SEQIDNO.42～49其中之一具有80％以上序列相同性的氨基酸序列、且具有a)所限定的氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗CLD18A2纳米抗体，所述抗CLD18A2纳米抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQ ID NO.4～11其中之一所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.19～26其中之一所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.33～39其中之一所示的CDR3。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗CLD18A2纳米抗体，所述抗CLD18A2纳米抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：氨基酸序列如SEQIDNO.4～11其中之一所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.19～26其中之一所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.33～39其中之一所示的CDR3。


2.一种抗CLD18A2纳米抗体，所述抗CLD18A2纳米抗体的互补决定区CDR包括氨基酸序列如下所示的CDR1～CDR3：
(1)氨基酸序列如SEQIDNO.4所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.19所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.33所示的CDR3；或者
(2)氨基酸序列如SEQIDNO.5所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.20所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.34所示的CDR3；或者
(3)氨基酸序列如SEQIDNO.6所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.21所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.35所示的CDR3；或者
(4)氨基酸序列如SEQIDNO.7所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.22所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.36所示的CDR3；或者
(5)氨基酸序列如SEQIDNO.8所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.23所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.37所示的CDR3；或者
(6)氨基酸序列如SEQIDNO.9所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.24所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.38所示的CDR3；或者
(7)氨基酸序列如SEQIDNO.10所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.25所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.36所示的CDR3；或者
(8)氨基酸序列如SEQIDNO.11所示的CDR1，氨基酸序列如SEQIDNO.26所示的CDR2，氨基酸序列如SEQIDNO.39所示的CDR3。


3.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述抗CLD18A2纳米抗体包括框架区FR，所述框架区FR包括氨基酸序列如下所示的FR1～FR4：
(1)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.12所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.27所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.40所示的FR4；或者
(2)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.13所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.28所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者
(3)氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.14所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.29所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者
(4)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.15所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者
(5)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.16所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.31所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者
(6)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.13所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.31所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者
(7)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.17所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.30所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4；或者
(8)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的FR1，氨基酸序列如SEQIDNO.18所示的FR2，氨基酸序列如SEQIDNO.32所示的FR3，氨基酸序列如SEQIDNO.41所示的FR4。


4.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述抗CLD18A2纳米抗体的氨基酸序列包括：
a)如SEQIDNO.42～49其中之一所示的氨基酸序列；或
b)...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚高锋，陆亚丽，周振兴，方艺琳，朱丽娜，黎常魁，章宏塔，温晓芳，董佳里，黄岩山，
申请(专利权)人：浙江道尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33