一种新型的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新型的抗体及其应用，所述抗体为能够抑制或减弱IL33介导的信号传递的抗体或结合片段。所述抗体包括轻链L链和重链H链，L链和H链的序列参见说明书表1、表2和序列表。所述抗体为含有上述的序列的单克隆抗体，该单克隆抗体包括人鼠嵌合体单克隆抗体和/或鼠源化单克隆抗体。一种抑制剂或药物，所述抑制剂或药物包括以上所述的抗体。该抑制剂或药物能够治疗、预防或减轻与IL33相关疾病的药物。本申请的抗体具有高亲和力、强生物中和活性以及稳定性好的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种新型的抗体及其应用
本专利技术属于生物技术医药领域，具体涉及一种新型的抗体及其应用。
技术介绍
IL33是2005年发现的一个属于IL1家族的新成员。人源IL33基因定位在染色体9p24.1上，编码270个氨基酸。全长的IL33分子量大小约为30KDa，经剪切后成为大小约为18KDa的成熟蛋白。在人多种组织的平滑肌细胞，以及气管和支气管上皮细胞中，IL33是组成型表达的。而在肺组织纤维细胞及真皮的角质细胞中，IL33可被TNF-α的刺激下诱导表达。IL33具有双重生物学功能，在正常生理情况下，IL33以全长的形式定位在细胞核中发挥转录因子的作用，调控其他基因的表达。一旦细胞受到刺激或损伤，IL33就会从细胞核中转移到胞质中，进而被剪切为成熟的蛋白，发挥细胞因子的作用。成熟的IL33与其受体ST2分子结合，激活NF-kB通路，刺激IL5、IL13等促炎因子的产生。成熟的IL33像一个“警报素”一样，在机体受体损伤时释放出来，招募并激活多种免疫细胞如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、Th2细胞等释放细胞因子引起炎症反应。IL33/ST2信号通路与人类多种疾病相关，如哮喘、类风湿性关节炎、败血症、心脏疾病、动脉粥样硬化、恶性肿瘤等。以IL33以靶标研发抗体药物，对于治疗相关疾病具有重大意义，因此，研发出具有高亲和力、强生物中和活性、稳定性好的IL33抗体序列具有重要意义。因此我们开展了本项研究工作。
技术实现思路
有鉴于此，专利技术的目的是提供一种抗体及其应用，以实现获得高亲和力、强生物中和活性、稳定性好的IL33抗体。专利技术的目的是通过以下技术方案来实现：本专利技术的一个目的为提供一种抗体，所述抗体为能够抑制或减弱IL33介导的信号传递的抗体或结合片段。所述抗体包括轻链L链和重链H链，所述L链的第一高变区LHVR1选自表1中SEQ1～SEQ12中的LHVR1列中的任意一个序列，所述L链的第二高变区LHVR2选自序列表1中SEQ1～SEQ12中的LHVR2列中的任意一个序列，所述L链的第三高变区LHVR3选自表1中SEQ1～SEQ12中的LHVR3列中的任意一个序列。所述H链包括高变区HHVR1、HHVR2和HHVR3，所述H链的第一高变区HHVR1选自表1中SEQ1～SEQ12中的HHVR1列中的任意一个序列，所述H链的第二高变区HHVR2选自表1中SEQ1～SEQ12中的HHVR2列中的任意一个序列，所述H链的第三高变区HHVR3选自表1中SEQ1～SEQ12中的HHVR3列中的任意一个序列。所述抗体的轻链包括轻链第一骨架区LFR1区、轻链第二骨架区LFR2区和轻链第三骨架区LFR3区，LFR1区选自表2中SEQ(1)～SEQ(12)中的LFR1列中的任意一个序列，所述LFR2选自表2中SEQ1～SEQ12中的LFR2列中的任意一个序列，所述LFR3选自表2中SEQ1～SEQ12中的LFR3列中的任意一个序列。所述抗体的重链包括重链第一骨架区HFR1区、重链第二骨架区HFR2区和重链第三骨架区HFR3区，HFR1区选自表2中SEQ(1)～SEQ(12)中的HFR1列中的任意一个序列，所述HFR2选自表2中SEQ1～SEQ12中的HFR2列中的任意一个序列，所述HFR3选自表2中SEQ1～SEQ12中的HFR3列中的任意一个序列。所述抗体为含有上述的序列的人鼠嵌合体单克隆抗体和/或鼠源化单克隆抗体。本专利技术的另一个目的为提供一种能够编码所述抗体的基因分子，所述基因分子为能够编码所述的抗体的碱基序列。本专利技术的又一个目的为提供一种表达载体，所述载体为包含所述基因片段或基因序列的表达载体。本专利技术的还有一个目的为提供一种宿主细胞，所述宿主细胞为包含以上任意一项所述的抗体、以上所述的碱基序列或以上所述的表达载体的宿主细胞。本专利技术的再一个目的为提供一种(IL33抗原表位)抑制剂，所述抑制剂包括以上所述的抗体。本专利技术的最后一个目的为提供一种药物，所述药物包括以上所述的抗体，该药物为能够治疗、预防或减轻与IL33相关疾病的药物。专利技术提供了一种抗体及其应用，其至少具有以下有益效果：本专利技术的抗体的亲和力非常好、生物中和活性强，且稳定性好。该抗体的浓度可低至pmol级别，其亲和力可与赫赛汀相媲美，非常惊喜，而且结合力稳定。这对于抗体发挥药物作用具有极其重要的作用。而且本申请的中和活性也非常好，其能够中和IL33协同LPS刺激巨噬细胞(PM)诱导产生IL6和TNF-α的生物活性，抑制效果明显。还能够中和IL6在肥大细胞和骨髓细胞中的表达，并可中和OVA诱发的哮喘，其能够降低支气管肺泡灌洗液中细胞总数及蛋白含量，效果显著，等等。此外，本申请中抗体的Tm值较高，抗体热稳定性好。因此，本申请中的抗体具有极大的制备成抗体药的潜在药用价值，并可以治疗、预防或减轻与IL-33相关疾病，如哮喘、类风湿性关节炎、败血症、心脏疾病、动脉粥样硬化、恶性肿瘤的药物等等。附图说明图1为抗体中和IL33协同LPS诱导巨噬细胞产生IL6的示意图；图2为抗体中和IL33协同LPS诱导巨噬细胞产生TNF-α的示意图；图3为所诱导的肥大细胞的纯度示意图；图4为在检测IL6的量时所绘制的ELISA标准曲线图；图5为用所诱导的肥大细胞测试IL33抗体的阻断活性的示意图；图6为用所诱导的肥大细胞测试IL33抗体的阻断活性的另一个示意图；图7为IL33抗体可中和IL6在骨髓细胞中的表达；图8为反映了IL33抗体治疗OVA诱导的哮喘模型的有效性；图9为抗体中和OVA诱发的哮喘的示意图；图10为抗原抗体结合情况示意图；图11为McAb-IL33的不同稀释浓度的结合状况示意图；图12为CA-IL33的不同稀释浓度的结合状况示意图；图13为所拟合的正态分布标准曲线；图14为本申请中抗体的Tm值的检测示意图；图15为轻链或重链的可变区中骨架区和高变区的相对位置设置示意图。具体实施方式下面对专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。以下提供的专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的专利技术的范围，而是仅仅表示专利技术的选定实施例。基于专利技术中的实施例，本领域普通方法人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于专利技术保护的范围。实施例1一种抗体，所述抗体为能够抑制或减弱IL33介导的信号传递的抗体或结合片段。该抗体包括轻链L链和重链H链。所述抗体包括具有免疫原性的高变区(HVR区)，L链的高变区包括L链第一高变区LHVR1、L链第二高变区LHVR2和L链第三高变区LHVR3；所述LHVR1选自序列SEQ1～SEQ12中LHVR1列中的任意一个序列，所述LHVR2选自序列SEQ1～SEQ12中LHVR2列中的任意一个序列，所述LHVR3选自序列SEQ1～SEQ1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于：所述抗体为能够抑制或减弱IL33介导的信号传递的抗体或结合片段。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于：所述抗体为能够抑制或减弱IL33介导的信号传递的抗体或结合片段。


2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于：所述抗体包括轻链L链和重链H链，所述L链包括高变区LHVR1、LHVR2、LHVR3；所述LHVR1选自序列SEQ1～SEQ12中LHVR1列中的任意一个序列，所述LHVR2选自序列SEQ1～SEQ12中LHVR2列中的任意一个序列，所述LHVR3选自序列SEQ1～SEQ12中LHVR3列中的任意一个序列；
所述H链包括高变区HHVR1、HHVR2和HHVR3，所述HHVR1选自序列SEQ1～SEQ12中HHVR1列中的任意一个序列，所述HHVR2选自序列SEQ1～SEQ12中HHVR2列中的任意一个序列，所述HHVR3选自序列SEQ1～SEQ12中HHVR3列中的任意一个序列。








3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于：所述抗体L链为由SEQ1所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ2所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ3所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ4所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ5所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ6所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ7所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ8所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ9所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ10所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，由SEQ11所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链，或由SEQ12所在行的LHVR1、LHVR2和LHVR3组成的L链。


4.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于：所述抗体H链为由SEQ1所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ2所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ3所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ4所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ5所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ6所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ7所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ8所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ9所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ10所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，由SEQ11所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链，或由SEQ12所在行的HHVR1、HHVR2和HHVR3组成的H链。


5.根据权利要求3或4所述的抗体，其特征在于：所述抗体的HVR区包括由SEQ1所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ2所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ3所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ4所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ5所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ6所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ7所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ8所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ9所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ10所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区、由SEQ11所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区或由SEQ12所在行的L链HVR区和H链HVR区构成的HVR区。


6.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其特征在于：所述抗体的轻链包括轻链第一骨架区LFR1区、轻链第二骨架区LFR2区和轻链第三骨架区LFR3区，LFR1区选自SEQ(1)～SEQ(12)中LFR1列中的任意一个序列，所述LFR2选自SEQ1～SEQ12中LFR2列中的任意一个序列，所述LFR3选自SEQ1～SEQ12中LFR3列中的任意一个序列；






所述抗体的重链包括重链第一骨架区HFR1区、重链第二骨架区HFR2区和重链第三骨架区HFR...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱峰，王军，
申请(专利权)人：南京赛新生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32