新型冠状病毒IgM/IgG检测试剂、试剂卡、试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒(COVID‑19)IgM/IgG检测试剂、试剂卡、试剂盒及其制备方法，新型冠状病毒(COVID‑19)IgM/IgG检测试剂包括有单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体，以及标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球。当人体在接触抗原(新型冠状病毒COVID‑19)时，由B细胞表面受体直接分泌IgM抗体，产IgM的B细胞进入淋巴结，在发生中心接受T细胞和抗原提呈细胞的刺激，进一步成熟，分化为浆细胞，大量产生IgG。在急性感染大约3‑7天后才出现IgM升高，7‑21天后IgG升高，故可用来反映机体是否处于急性感染状态，作为早期诊断的主要指标。

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒IgM/IgG检测试剂、试剂卡、试剂盒及其制备方法
本专利技术属于病毒检测
，尤其是涉及针对新型冠状病毒(COVID-19)的一种新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂、试剂卡、试剂盒及其制备方法。
技术介绍
冠状病毒(Coronavirus,CoV)属于巢状病毒目，冠状病毒科，三个属中，α和β属仅对哺乳动物致病。CoV主要通过直接接触分泌物或经气溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播。冠状病毒的结构蛋白，一般包括S蛋白(spike-protein)、HE蛋白、M蛋白、E蛋白、N蛋白。其中S蛋白(还有HE蛋白)在病毒与宿主细胞表面受体结合及介导病毒包膜和细胞膜融合并进入细胞的过程中，起关键性作用，也是冠状病毒主要的抗原蛋白。临床盒实验室常用的检测方法有胶体金法、免疫荧光法等。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是，该新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂包括有单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体，以及标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球。当人体在接触抗原(新型冠状病毒COVID-19)时，由B细胞表面受体直接分泌IgM抗体，产IgM的B细胞进入淋巴结，在发生中心接受T细胞和抗原提呈细胞的刺激，进一步成熟，分化为浆细胞，大量产生IgG。在急性感染大约3-7天后才出现IgM升高，7-21天后IgG升高，故可用来反映机体是否处于急性感染状态，作为早期诊断的主要指标。优选的，所述单克隆抗人IgM抗体为鼠抗人IgM单抗-杭州隆基生物-MS00704；所述单克隆抗人IgG抗体为鼠抗人IgG单抗-南京金斯瑞生物-V90401；所述重组新型冠状病毒抗原为重组2019-nCoVN蛋白(Recombinant2019-nCoVNucleocapsidProtein)-南京金斯瑞生物-T80103和重组2019-nCoVS蛋白(Recombinant2019-nCoVSpike-RBDProtein)-南京金斯瑞生物-T80301。优选的，新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂用于化学发光免疫分析。本专利技术要解决的另一个技术问题是提供一种新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG试剂卡，该试剂卡由试剂条和卡壳组成，所述试剂条具有前述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其中，在硝酸纤维膜上包被有单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY；在结合垫内吸附有标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球和标记鸡IgY的荧光微球；所述试剂条还包括有样品垫和吸水纸，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水纸依次设置。本试剂卡采用免疫荧光法检测新冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG的含量。以单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体，分别包被于硝酸纤维膜上测试区，重组新型冠状病毒抗原标记成荧光微球，固定于结合垫。将检测缓冲液和样本混合，样本中的IgM/IgG抗体与结合垫中重组新型冠状病毒抗原标记的荧光微球结合，复合物随后被固定在测试区上的单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体捕获，形成荧光微球复合结构；结合垫中鸡IgY标记的荧光颗粒复合物与固定在硝酸纤维素膜质控区上的羊抗鸡IgY结合，形成质控区。通过配套仪器对该复合物进行测量和分析，可分析人血中新冠状病毒IgM/IgG的情况。适用于体外测定人血清、血浆和全血中新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG含量。试剂盒在4℃～30℃保存，有效期为12个月；试剂卡为独立包装，卡条开封后应在1小时内使用。本专利技术要解决的另一个技术问题是提供一种基于微流控芯片的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂盒，包括有微流控芯片，还包括有前述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其中，标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球和标记鸡IgY的荧光微球在所述微流控芯片反应腔内进行干燥处理；单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体包被在微流控芯片反应腔内。本专利技术要解决的另一个技术问题是提供一种基于微流控芯片的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂盒，包括有微流控芯片，还包括有前述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其中，重组新型冠状病毒抗原进行时间分辨荧光标记，并在所述微流控芯片反应腔内进行干燥处理；单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体通过磁珠固定在微流控芯片反应腔内。利用磁珠固定重组新型冠状病毒抗原，形成免疫磁珠；采用时间分辨荧光来标记单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体，形成荧光标记物，利用时间分辨荧光免疫分析方法进行检测。优选的，所述微流控芯片为封闭式微流控芯片，该封闭式微流控芯片，包括芯片本体，所述芯片本体从下往上依次包括下层芯片、中层芯片和上层芯片；所述芯片本体包括进样腔、若干个腔室和微流道，所述中层芯片与下层芯片相配合界定出封闭的微流道和若干个所述腔室；所述进样腔通过所述微流道与若干个所述腔室相连通；所述进样腔上设有封闭盖。通过在进样腔上设置封闭盖，且不设置上层透气孔，同时配合外接进样口封闭与排气口封闭，使芯片本体封闭，从而适用于检测新型冠状病毒，在检测过程中不会溢出气溶胶，不会造成环境与人员的病毒感染风险，且检测结果准确率高，成本低，操作更简便。优选的，所述封闭盖为单向阀封闭盖。优选的，所述芯片本体还包括排气通道和负压气囊，所述排气通道和负压气囊均在设置所述芯片本体的侧面，所述排气通道的末端通过卡接头与所述负压气囊相连接。优选的，所述排气口卡接头上设有卡接头穿刺部，所述负压气囊的进气口处设有进气口薄膜，所述卡接头穿刺部用于使用时刺破负压气囊的进气口薄膜。优选的，所述腔室包括反应腔和废液腔；所述反应腔包括设置在所述中层芯片的背面的上反应腔室和设置在所述下层芯片的下反应腔室，所述上反应腔室在所述中层芯片的背面的位置与所述下反应腔室在所述下层芯片的位置相对应设置；所述废液腔设置在所述下层芯片上，所述中层芯片上在与所述废液腔相对应的位置上贯穿设有中层废液腔通孔；所述上层芯片的背面在与所述废液腔相对应的位置上设有废液腔盖板。优选的，所述微流道包括反应腔输入流道和反应腔输出流道，所述反应腔输入流道和反应腔输出流道均设置在所述中层芯片的背面，所述反应腔输入流道与所述上反应腔室的一端相连通，所述反应腔输出流道与所述上反应腔室的另一端相连通；所述反应腔输入流道包括反应输入流道a和反应输入流道b，所述反应输入流道a与所述进样腔相连通；所述反应输入流道a与所述进样腔之间设有第一防回流结构；所述芯片本体上设有外接液路接口，所述外接液路接口通过外接液路输入流道与所述反应输入流道b连接；所述外接液路输入流道与反应输入流道b之间设有第二防回流结构。优选的，所述外接液路接口上设有外接液路封闭盖。优选的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其特征在于，包括有单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体，以及标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球。/n

【技术特征摘要】
20200221 CN 20201010926121.一种新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其特征在于，包括有单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体，以及标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其特征在于，所述单克隆抗人IgM抗体为鼠抗人IgM单抗-杭州隆基生物-MS00704；所述单克隆抗人IgG抗体为鼠抗人IgG单抗-南京金斯瑞生物-V90401；所述重组新型冠状病毒抗原为重组2019-nCoVN蛋白(Recombinant2019-nCoVNucleocapsidProtein)-南京金斯瑞生物-T80103和重组2019-nCoVS蛋白(Recombinant2019-nCoVSpike-RBDProtein)-南京金斯瑞生物-T80301。


3.根据权利要求1或2所述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其特征在于，该检测试剂用于化学发光免疫分析。


4.一种新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG试剂卡，该试剂卡由试剂条和卡壳组成，其特征在于，所述试剂条具有权利要求1或2中所述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其中，在硝酸纤维膜上包被有单克隆抗人IgM抗体、单克隆抗人IgG抗体和羊抗鸡IgY；在结合垫内吸附有标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球和标记鸡IgY的荧光微球；所述试剂条还包括有样品垫和吸水纸，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水纸依次设置。


5.一种基于微流控芯片的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂盒，包括有微流控芯片，其特征在于，还包括有权利要求1或2中所述的新型冠状病毒(COVID-19)IgM/IgG检测试剂，其中，标记重组新型冠状病毒抗原的荧光微球在所述微流控芯片反应腔内进行干燥处...

【专利技术属性】
技术研发人员：许行尚，崔仑标，吴斌，王龙，
申请(专利权)人：南京岚煜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32