基于多重荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因突变的引物、探针和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种基于多重荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因突变的引物、探针、试剂盒和检测方法，能全面覆盖与软骨发育不全相关的FGFR3基因的四个常见致病位点，共6种突变类型：c.742C>T(rs12193482)，c.1118A>G(rs121913485)，c.1138G>A/G>C(rs28931614)，c.1620C>A/C>G(rs28933068)。本发明专利技术结果准确可靠，操作简单实用，低成本，设备要求低，能满足当前临床迫切需要一种简单、快速、精准的产前诊断检测方法的需求。

【技术实现步骤摘要】
基于多重荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因突变的引物、探针和试剂盒
本专利技术涉及基因诊断
，具体涉及一组基于多重TaqMan探针的实时荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因热点突变的检测引物、探针、试剂盒和检测方法。
技术介绍
软骨发育不全(achondroplasia，ACH)是一种最常见的人类侏儒症，以不成比例的身材矮小，四肢短粗，手指短小成“三叉戟”样为主要特征，成常染色体显性遗传，其发病率为1/10000～1/70000，超过80％患者为散发型。软骨发育不全与FGFR3基因突变密切相关，由于缺乏有效地治疗办法，患儿预后较差。因此，FGFR3基因热点突变的检测是目前疑似ACH胎儿产前诊断的最直接快速的方法之一。目前，国内外检测FGFR3基因热点突变的方法有PCR结合Sanger测序、限制性片段长度多态性分析、变性高效液相色谱分析、高分率熔解曲线分析、基因芯片等。上述每种方法均有其优缺点。最为常用的基因诊断策略是对FGFR3基因外显子区域进行PCR扩增及Sanger测序，但该方法存在耗时长、操本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组基于多重TaqMan探针的实时荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因热点突变的检测引物，其特征在于，所述的检测引物如下所示：/n针对FGFR3基因c.742C>T位点：/nForward引物：5'-GCCCCTGAGCGTCATCTG-3'；/nReverse引物：5'-CACCGCCGTCTGGTTGG-3'；/n针对FGFR3基因c.1118A>G位点：/nForward引物：5'-GAGGAGCTGGTGGAGGCT-3'；/nReverse引物：5'-GCGGCAGAGCGTCACAG-3'；/n针对FGFR3基因c.1138G>A/G>C位点...

【技术特征摘要】
1.一组基于多重TaqMan探针的实时荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因热点突变的检测引物，其特征在于，所述的检测引物如下所示：
针对FGFR3基因c.742C>T位点：
Forward引物：5'-GCCCCTGAGCGTCATCTG-3'；
Reverse引物：5'-CACCGCCGTCTGGTTGG-3'；
针对FGFR3基因c.1118A>G位点：
Forward引物：5'-GAGGAGCTGGTGGAGGCT-3'；
Reverse引物：5'-GCGGCAGAGCGTCACAG-3'；
针对FGFR3基因c.1138G>A/G>C位点：
Forward引物：5'-GAGGAGCTGGTGGAGGCT-3'；
Reverse引物：5'-GCGGCAGAGCGTCACAG-3'；
针对FGFR3基因c.1620C>A/C>G位点：
Forward引物：5'-GGAGATGATGAAGATGATCGGGAA-3'；
Reverse引物：5'-ACCTACCGCCCTGCGT-3'。


2.一组基于多重TaqMan探针的实时荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因热点突变的检测探针，其特征在于，所述的检测探针如下所示：
针对FGFR3基因c.742C>T位点：
FGFR3基因野生型位点c.742C探针：5'-CACAGAGCGCTCCC-3'；
FGFR3基因突变型位点c.742T探针：5'-CACAGAGTGCTCCC-3'；
针对FGFR3基因c.1118A>G位点：
FGFR3基因野生型位点c.1118A探针：5'-CAGTGTGTATGCAGGC-3'；
FGFR3基因突变型位点c.1118G探针：5'-CAGTGTGTGTGCAGGC-3'；
针对FGFR3基因c.1138G>A/G>C位点：
FGFR3基因野生型位点c.1138G探针：5'-CCACCCCGTAGCTGA-3'；
FGFR3基因突变型位点c.1138A探针：5'-CCACCCTGTAGCTGA-3'；
FGFR3基因突变型位点c.1138C探针：5'-CCACCCGGTAGCTGA-3'；
针对FGFR3基因c.1620C>A/C>G位点：
FGFR3基因野生型位点c.1620C探针：5'-CATCATCAACCTGCTGG-3'；
FGFR3基因突变型位点c.1620A探针：5'-CATCATCAAACTGCTGG-3'；
FGFR3基因突变型位点c.1620G探针：5'-CATCATCAAGCTGCTGG-3'；
探针的5'端带有报告荧光基团，3'端带有淬灭荧光基团。


3.根据权利要求2所述的检测探针，其特征在于，所述的报告荧光基团为ROX、Cy5、FAM或HEX，所述的淬灭荧光基团为MGB。


4.一种基于多重TaqMan探针的实时荧光定量PCR技术检测软骨发育不全FGFR3基因热点突变的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的检测引物和权利要求2所述的检测探针。


5.一种基于多重TaqMan探针的实时荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦，余丽华，尹爱华，刘玲，丁红珂，曾玉坤，齐一鸣，
申请(专利权)人：广东省妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：广东;44