检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用。本发明专利技术发现在卵巢组织中ApoC3表达在小鼠发育过程中逐渐升高，在第21日龄达到高峰，随后缓慢下降。因此，ApoC3可作为预测卵母细胞发育的生物学标志物，用于预测卵母细胞发育情况。用于预测卵母细胞发育情况。用于预测卵母细胞发育情况。

【技术实现步骤摘要】
检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用。

技术介绍

[0002]血清载脂蛋白C(apolipoprotein C，ApoC)是载脂蛋白家族中的一员。ApoC中，以ApoC3浓度最高，其对稳定脂蛋白结构、结合和转运脂质、调节脂蛋白代谢都有重要作用。ApoC3最初在肝脏和小肠中合成，其基因位于第11号染色体长臂11q23.3，长约3.1kb，有4个外显子和3个内含子，是含有79个氨基酸的肽链，大小为8.8kDa的小分子糖蛋白。ApoC3在血液中含量最高，主要调节富含甘油三酯脂蛋白(triglyceride
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rich lipoproteins，TRLs)的分解与代谢。
[0003]①
ApoC3与脂代谢：ApoC3在降低血脂方面取得了许多临床与基础研究，已被确定为新的降脂靶点。ApoC3被普遍认为是心血管疾病的直接危险因素。目前，已有相关研究将外周循环中ApoC3水平与动脉粥样硬化以及不良心血管结局联系起来。ApoC3对于调节脂肪酸代谢十分重要，卵巢局部脂质代谢为卵母细胞减数分裂的恢复提供了一种强有力的能量来源。卵母细胞中的脂质脂解产生的脂肪酸通过线粒体中的β
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氧化进一步代谢以产生ATP，供卵母细胞成熟并保证其质量。PCOS患者脂代谢异常，卵母细胞中脂质沉积过多会增加活性氧的含量并且破坏线粒体和内质网的功能，最终使卵母细胞的发育受阻。r/>[0004]②
ApoC3与糖代谢：ApoC3与葡萄糖代谢也有密切关系。血浆中ApoC3浓度升高，可加重胰岛素抵抗以及糖尿病的发展。在一项针对2型糖尿病受试者的小型研究中发现，抑制ApoC3可改善全身胰岛素抵抗(IR)。ApoC3可能通过促进胰岛细胞凋亡和葡萄糖稳态紊乱参与IR的病理生理过程。已有文献在肾病、系统性红斑狼疮、糖尿病及肝病等病理状态下报道ApoC3对血糖的损害。PCOS患者的糖代谢紊乱会引起卵巢局部内环境中的葡萄糖代谢物水平的变化。卵子的发育过程需要葡萄糖提供能量，而PCOS患者由于卵巢存在局部胰岛素抵抗状态、葡萄糖转运途径缺陷，导致葡萄糖的利用率降低，不利干卵母细胞的生长发育。
[0005]③
ApoC3与炎症反应：ApoC3促进促炎核因子kappa B(NF
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κB)信号转导，进而激活单核细胞，促进局部巨噬细胞募集和炎症发生。ApoC3还可诱导活性氧介导的血管平滑肌增殖，加期动脉粥样硬化的进程。Kelly等学者在2001年首次提出PCOS患者处于慢性低度炎症状态，并且与IR和腹部肥胖有关。肥胖可能加重PCOS患者的炎症状态，并增加远期心血管疾病的发病风险。PCOS脂代谢紊乱患者血清中有更高水平的ApoC3，ApoC3的升高可能通过激活内皮细胞蛋白激酶(PKC
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β)和骨骼肌细胞外信号调节激酶(ERK1/2)，诱导炎症反应，促进炎症因子：肿瘤坏死因子(TNF
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α)、核因子(NF
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κB)进一步加重PCOS胰岛素抵抗、脂质异常的发生。
[0006]④
PCOS患者存在卵巢局部IR，与高表达的ApoC3密切相关，导致排卵功能障碍。多项研究表明在患有PCOS的女性中，胰岛素活性在经典靶器官(脂肪组织和骨骼肌等)中缺失
引起胰岛素抵抗。PCOS同时具有卵巢局部胰岛素抵抗，影响卵巢局部葡萄糖代谢、胆固醇摄取、甾体激素生成以及细胞分裂增殖。有研究发现PCOS患者卵巢颗粒细胞存在受体后胰岛素信号传导分子的改变，导致下游激酶活性的改变，减弱胰岛素信号转导，促进卵巢局部胰岛素抵抗发生。胰岛素在细胞内的信号传导途径包括调节葡萄糖代谢的促代谢途径和引起细胞分裂增殖作用的促分裂途径等。卵巢局部IR时表现为细胞内胰岛素的促代谢作用途径受损，而促分裂作用途径发生放大现象，使卵巢体积增加、卵泡发育停滞、排卵障碍、及卵巢局部高雄激素状态。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用。
[0008]本专利技术前期对PCOS患者卵巢组织进行免疫组化研究：发现PCOS患者卵巢组织中ApoC3蛋白高表达。进一步通过对PCOS小鼠和正常对照小鼠卵巢组织行免疫组化和免疫荧光定位检查，发现：ApoC3定位于小鼠卵母细胞胞浆内，我们推测ApoC3表达与卵母细胞发育相关。我们随后采用出生后7至42日龄的小鼠进行验证，小鼠出生第7至42日，是卵巢的发育阶段。我们研究发现：ApoC3在小鼠不同发育时期表达水平不同，ApoC3表达在小鼠卵泡发育过程中逐渐升高，在卵巢组织中第21日龄达到高峰，随后缓慢下降。第21日即小鼠青春期启动期，此时期卵母细胞接受促性腺激素刺激(黄体生成素LH)，从初期卵母细胞第一次减数分裂前期发展为次级卵母细胞的关键时间窗可作为预测卵母细胞发育的生物学标志物。
[0009]因此，本专利技术的第一个目的是提供检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用。
[0010]优选，是检测卵巢组织中的ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供ApoC3蛋白作为预测卵母细胞发育的生物学标志物的应用。
[0012]本专利技术的第三目的是提供一种预测卵母细胞发育试剂，其包括检测ApoC3蛋白含量的试剂。
[0013]本专利技术发现ApoC3表达在小鼠发育过程中逐渐升高，在第21日龄达到高峰，随后缓慢下降。因此，ApoC3可作为预测卵母细胞发育的生物学标志物，用于预测卵母细胞发育情况。
附图说明：
[0014]图1是PCOS患者和对照组卵巢组织免疫组化染色。棕黄色染色为ApoC3阳性面积。(A)对照组和PCOS组免疫组化染色；(B)两组免疫组化ApoC3阳性面积分析。
[0015]图2是PCOS小鼠和对照小鼠在造模不同阶段卵巢组织的ApoC3蛋白表达水平。(A)两组小鼠在三个造模阶段：造模第一周(1W)，造模第二周(2W)，造模第三周(3W)的ApoC3蛋白表达水平。(B)不同是造模阶段ApoC3相对蛋白表达量。
[0016]图3是PCOS小鼠和对照小鼠在造模不同阶段卵巢组织的ApoC3表达及定位。(A)卵巢组织中ApoC3的免疫组化染色。棕黄色染色为ApoC3阳性区域，红色箭头所示为卵母细胞。
比例尺:200μm；50μm。(B)卵巢组织中ApoC3免疫荧光染色。ApoC3呈红色染色；细胞核呈蓝色染色。白色箭头所示为卵母细胞。比例尺:100μm；75μm。(C)免疫组化染色分析的ApoC3阳性区域。(D)免疫荧光染色分析ApoC3染色阳性区域。
[0017]图4是ApoC3在卵巢组织中的动态表达情况。(A)第7至42日龄小鼠卵巢组织免疫组化染色，棕色染色的为ApoC3阳性区域，红色箭头指示为卵母细胞；比例尺＝200μm；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细胞发育试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，是检测卵巢组织中的ApoC3蛋白含量的试剂在制备预测卵母细...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荔，莫蕙，周嘉禾，刘姜伶，李小芳，陈园，范明皓，钟明琳，王友烽，邱琳，李远成，
申请(专利权)人：广东省妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：