一种原位酶解-直接质谱分析系统及分析方法技术方案

本发明专利技术属于蛋白质分子检测技术领域，尤其涉及一种原位酶解‑直接质谱分析系统及分析方法。其中，原位酶解‑直接质谱分析系统包括微酶解池和质谱仪及接口等，所述酶解池包括相互连通的柱状部和毛细管状部；所述柱状部内填充有蛋白酶和蛋白质样品分子，所述蛋白酶用于酶解蛋白质样品分子；所述柱状部内表面涂设有吸附材料，所述吸附材料用于捕获酶解后的多肽片段；所述毛细管状部的末端通过喷雾结构与质谱进样口对接，所述喷雾结构用于离子化化酶解后的多肽片段，以供质谱分析装置直接进行质谱分析。本发明专利技术可用于对牛奶等食品及生物组织介质中蛋白质分子的快速鉴定。

【技术实现步骤摘要】
一种原位酶解-直接质谱分析系统及分析方法
本专利技术属于蛋白质分子检测
，尤其涉及一种原位酶解-直接质谱分析系统及分析方法。
技术介绍
本部分的陈述仅仅是提供了与本专利技术相关的
技术介绍
信息，不必然构成在先技术。目前，蛋白质的分析技术主要是“自上而下”(top-down)和“自下而上”(bottom-up)两种策略。其中应用最广泛的是“自下而上”的技术路线，通过蛋白质的酶解，蛋白质分子被消解为多肽，然后利用质谱对多肽进行质谱分析。为了保证分析的灵敏度和质谱系统的不被盐或者表面活性剂等污染，蛋白质的纯化以及酶解液体系的净化步骤必不可少。典型的蛋白质消解策略中包含蛋白质变性、还原烷基化和酶解。蛋白质变性过程通过将蛋白质溶液在离液剂(尿素和胍)升温实现。对于半胱氨酸残基之间含有二硫键的蛋白质，需要采用二硫苏糖醇首先进行半胱氨酸残基上巯基部分的还原，然后对于自由的半胱氨酸残基上的巯基利用碘乙酸或者碘乙酰胺进行烷基化。这些过程能够使得酶能够更好的切断蛋白质，形成肽段。胰蛋白酶是蛋白质水解最常用的酶。胰蛋白酶可以特征性的切断碱性氨基酸(赖氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种原位酶解-直接质谱分析系统，其特征在于，包括：/n呈布什漏斗状的酶解池，所述酶解池包括相互连通的柱状部和毛细管状部；/n所述柱状部内填充有蛋白酶和蛋白质样品分子，所述蛋白酶用于酶解蛋白质样品分子；所述柱状部内表面涂设有吸附材料，所述吸附材料用于捕获酶解后的多肽片段；/n所述毛细管状部的末端通过喷雾结构与质谱进样口对接，所述喷雾结构用于雾化酶解后的多肽片段，以供质谱分析装置直接进行质谱分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种原位酶解-直接质谱分析系统，其特征在于，包括：
呈布什漏斗状的酶解池，所述酶解池包括相互连通的柱状部和毛细管状部；
所述柱状部内填充有蛋白酶和蛋白质样品分子，所述蛋白酶用于酶解蛋白质样品分子；所述柱状部内表面涂设有吸附材料，所述吸附材料用于捕获酶解后的多肽片段；
所述毛细管状部的末端通过喷雾结构与质谱进样口对接，所述喷雾结构用于雾化酶解后的多肽片段，以供质谱分析装置直接进行质谱分析。


2.如权利要求1所述的原位酶解-直接质谱分析系统，其特征在于，所述布什漏斗状由M膜制作而成。


3.如权利要求1所述的原位酶解-直接质谱分析系统，其特征在于，所述喷雾结构的喷雾电压为4-4.5kV，喷雾流速为30μLhr-1，干燥气的流速为0.3Lmin-1，温度为200℃。


4.如权利要求1所述的原位酶解-直接质谱分析系统，其特征在于，所述柱状部底部开设有若干个孔点位，每个孔点位内嵌有等量纳米颗粒，每个纳米颗粒上均设置有相同孔径大小的冲压孔。


5.一种基于如权利要求1-4中任一项所述的原位酶解-直接质谱分析系统的质谱分析方法，其特征在于，包括：
向柱状部内加入包含蛋白质样品分子的液体及蛋白酶，对蛋白酶在酶解池内进行前处理，增强蛋白质酶活性；
利用前处理后的蛋白酶来酶解蛋白质样品分子，蛋白质样品分子酶解后，由涂设在柱状部内表面的吸附材料捕获酶解后的多肽片段；
采用冲洗酶解池的方式对酶解后的多肽片段进行净化；
净化后的多肽片段流入至喷雾...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈相峰，洪翊凌，吴日，陈德华，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东;37