一种检测和定量单拷贝染色体外DNA或RNA的方法技术

本发明专利技术提供了一种准确、有效、稳定可行的检测细胞中染色体外基因序列和病毒基因的单拷贝数量和部位的方法，所述方法包括如下步骤：(1)在靶细胞的染色体中期相或细胞涂片上，利用三个一级探针与目标基因序列杂交结合；(2)利用二级探针进行杂交结合；所述二级探针为可与三个上述一级探针中的紧邻的两个一级探针序列特异性结合的核酸序列；(3)加入扩增探针，与二级探针相结合；(4)将与扩增探针相结合的标记探针进行杂交结合；(5)于荧光显微镜下进行镜检。

【技术实现步骤摘要】
一种检测和定量单拷贝染色体外DNA或RNA的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测和定量单拷贝染色体外DNA或RNA的方法。
技术介绍
肿瘤是由原癌基因激活或者抑癌基因功能丢失引发的。最近的研究发现，大量的与癌症相关的基因并不在染色体上，而是会从染色体上脱落下来，变成一种大小为几百Kb到Mb不等的小型环状的DNA，而被称为染色体外DNA(extrachromosomalDNA，ecDNA)。染色体外DNA广泛存在于肿瘤细胞中，它们的拷贝数往往比较高，相应基因的RNA拷贝数也可能较高，而且随着细胞复制或药物治疗会发生动态变化，染色体外DNA有望成为肿瘤异质性的重要标志物，也可能成为肿瘤基因治疗和耐药性的重要标志物。染色体外DNA不仅存在于血液中，也被发现在其他体液包括胸腔积液中。染色体外DNA不仅和肿瘤相关，还可能是真核细胞内的一种应对危机的基因扩增机制，所以染色体外DNA也有可能存在于其他一些应对危机出现的细胞中，其重要性和应用途径也许非常广泛。传统的染色体核型加染色体外DNA的分析法，在没有抓住中期分裂相的细胞中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种原位检测和定量单拷贝染色体外DNA或RNA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)在靶细胞的染色体中期相或细胞涂片上，利用三个一级探针与目标基因序列杂交结合；每个所述一级探针为与目标基因中部分核酸序列配对结合的核酸序列；所述目标基因序列包括DNA或RNA序列片段；/n(2)利用二级探针与步骤(1)所得物的一级探针的配对序列进行杂交结合；所述二级探针为可与三个上述一级探针中的紧邻的两个一级探针的配对序列特异性结合的核酸序列；/n(3)向步骤(2)所得物加入扩增探针与二级探针相结合；所述扩增探针为生物素标记了的核酸探针；/n(4)将与扩增探针特异性结合的标记探针加入，并使之相结...

【技术特征摘要】
1.一种原位检测和定量单拷贝染色体外DNA或RNA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)在靶细胞的染色体中期相或细胞涂片上，利用三个一级探针与目标基因序列杂交结合；每个所述一级探针为与目标基因中部分核酸序列配对结合的核酸序列；所述目标基因序列包括DNA或RNA序列片段；
(2)利用二级探针与步骤(1)所得物的一级探针的配对序列进行杂交结合；所述二级探针为可与三个上述一级探针中的紧邻的两个一级探针的配对序列特异性结合的核酸序列；
(3)向步骤(2)所得物加入扩增探针与二级探针相结合；所述扩增探针为生物素标记了的核酸探针；
(4)将与扩增探针特异性结合的标记探针加入，并使之相结合；
(5)于荧光显微镜下进行镜检。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶细胞的染色体中期相或细胞涂片，指的是经过洗涤或固定、蛋白质酶处理后，可用于原位杂交的样本。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述固定是利用甲醇或乙酸进行生物样本的固定；和/或，所述蛋白质酶处理是利用包括胃蛋白酶在内的蛋白酶进行所述杂交结合前的处理。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述杂交结合为原位杂交，所用的杂交溶液由如下组分组成：
6倍稀释倍数的枸橼酸钠缓冲液、25％W/W甲酰胺、0.2％W/W十二烷基硫酸锂和阻断液；
所述枸橼酸钠缓冲液的组分为：0.15mol/LNaCl和0.0015mol/L柠檬酸钠；
和/或，
步骤(2)中，所述杂交结合为原位杂交，所用的杂交溶液由如下组分组成：
2nmol/L二级探针的预扩增片段、20...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓亚光，
申请(专利权)人：宜昌美光硅谷生命科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42