一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用，所述重组慢病毒载体包括插入有外源G3BP1基因的慢病毒载体；所述慢病毒载体包括pLenti‑CMV‑GFP‑EF1a‑Puro。本发明专利技术基于人源G3BP1基因和载体pLenti‑CMV‑GFP‑EF1a‑Puro，扩增了人源G3BP1基因DNA序列，成功构建pLenti‑GFP‑G3BP1重组慢病毒载体，并利用慢病毒包装系统成功构建稳定表达GFP‑G3BP1蛋白的HeLa细胞系，在探究应激刺激调控SG形成机制方面具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种G3BP1重组慢病毒载体及其应用，尤其涉及一种G3BP1重组慢病毒载体、由此构建的稳定表达GFP-G3BP1的细胞系及其在实时监测应激颗粒形成中的应用。
技术介绍
细胞受到病毒感染、砷酸盐刺激、热休克或氧化应激时，细胞内会形成致密的颗粒状结构，称为应激颗粒(stressgranules，SG)。研究表明：外源刺激可以抑制细胞启动蛋白质翻译，导致mRNAs从核糖体中释放，非翻译mRNAs和RNA结合蛋白聚集形成SG。应激状态下，抑制细胞内SG的形成会促进细胞死亡，表明SG的形成有助于细胞应对外界刺激。SG中含有大量的翻译起始成分，包括40S核糖体亚基、poly(A)结合蛋白和翻译起始因子等，但不包含大核糖体亚基，因为翻译终止发生在大核糖体亚基进入翻译复合体之前。形成SG的主要标志蛋白包括：RNA结合蛋白(RBPs)、胞内蛋白TIA-1、TIA-1相关蛋白1(TIAR)和Ras-GTPase活化蛋白SH3结构域结合蛋白(Ras-Gap-SH3domain-bindingpro本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体包括插入有外源G3BP1基因的慢病毒载体；/n所述慢病毒载体包括pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体包括插入有外源G3BP1基因的慢病毒载体；
所述慢病毒载体包括pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro。


2.根据权利要求1所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述G3BP1基因包括如SEQIDNO:1所示的核酸序列；
优选地，所述pLenti-CMV-GFP-EF1a-Puro包括如SEQIDNO:2所示的核酸序列；
优选地，重组慢病毒载体包括如SEQIDNO:3所示的核酸序列。


3.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒采用权利要求1或2所述的重组慢病毒载体与辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到；
优选地，所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。


4.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞包括含有权利要求1或2所述的重组慢病毒载体和/或权利要求3所述的重组慢病毒的宿主细胞；
优选地，所述宿主细胞包括Hela细胞。


5.一种权利要求4所述的重组细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)构建权利要求1或2所述的重组慢病毒载体；
(2)将步骤(1)所述的重组慢病毒载体与辅助质粒共转染哺乳细胞，构建重组慢病毒；
(3)将步骤(2)所述的重组慢病毒转化入宿主细胞基因组，得到所述重组细胞。


6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述重组慢病毒载体的构建方法为将PCR扩增得到的G3BP1基因插入pLenti-CMV-GF...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙英杰，丁铲，谭磊，孟春春，仇旭升，廖瑛，宋翠萍，邵琪，于圣青，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：上海;31