一种提高胰岛素前体表达的毕赤酵母的发酵培养基及发酵方法技术

本申请属于生物制药技术领域，公开了一种提高胰岛素前体表达的毕赤酵母的发酵培养基及发酵生产胰岛素前体的方法。本发明专利技术所述毕赤酵母的发酵培养基采用磷酸盐缓冲体系，添加硫酸铵、硫酸亚铁等无机盐，添加尿素、磷酸二氢铵等氮源，组成成分明确，来源稳定，且诱导阶段无需增加氮源的流加。本发明专利技术所述发酵生产胰岛素前体的方法，在初始培养、甘油流加培养后采用甘油/甲醇混合溶液进行诱导培养，在诱导阶段混合流加一定比例的甘油，可加快菌体生长，随培养时间的增加，甘油混合比例逐渐降低，甲醇逐渐增多，大量的菌体在较短时间内进入高速表达期，目的产物获得较高水平的表达，大幅度缩短培养时间，避免过多副产物的产生影响产品质量。

【技术实现步骤摘要】
一种提高胰岛素前体表达的毕赤酵母的发酵培养基及发酵方法
本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种提高胰岛素前体表达的毕赤酵母的发酵培养基及发酵生产胰岛素前体的方法。
技术介绍
糖尿病是全世界最主要的慢性非传染性疾病之一，近些年随着患病率的上升，糖尿病所带来的疾病负担越来越严重，糖尿病及其并发症严重影响了人类的生活质量。胰岛素是控制血糖最为有效的治疗药物，其制备方法分为化学合成法和基因重组法。胰岛素应用于临床90年共经历了三代里程碑式的进步，基因重组技术的发展使胰岛素制剂从第一代胰岛素-动物胰岛素到第二代胰岛素-人胰岛素，再到第三代胰岛素-胰岛素类似物。这一变化过程显示人们追求生理性降糖，并不断研发更好模拟正常人体生理降糖模式的胰岛素用于糖尿病。微生物发酵生产胰岛素相关产品常用宿主包括：大肠杆菌原核表达体系和酵母真核表达体系。大肠杆菌表达体系用来生产第二代胰岛素-人胰岛素取得了良好的效果，但是目前临床应用最广泛的是第三代胰岛素--胰岛素类似物，包括门冬胰岛素、地特胰岛素、德谷胰岛素、甘精胰岛素等，应用较多的是毕赤酵母表达体系。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毕赤酵母的发酵培养基，其特征在于，配方为尿素5.0～10.0g/L，磷酸二氢钾10.0～20.0g/L，磷酸氢二钾4.0～8.0g/L，碳酸钙0.5～1.0g/L，七水硫酸镁10.0～20.0g/L，硫酸铵4.0～8.0g/L，磷酸二氢铵10.0～15.0g/L，硫酸亚铁0.5～1.0g/L，甘油40.0g/L，PTM1溶液4ml/L，溶剂为水，pH为5.0～6.0。/n

【技术特征摘要】
1.一种毕赤酵母的发酵培养基，其特征在于，配方为尿素5.0～10.0g/L，磷酸二氢钾10.0～20.0g/L，磷酸氢二钾4.0～8.0g/L，碳酸钙0.5～1.0g/L，七水硫酸镁10.0～20.0g/L，硫酸铵4.0～8.0g/L，磷酸二氢铵10.0～15.0g/L，硫酸亚铁0.5～1.0g/L，甘油40.0g/L，PTM1溶液4ml/L，溶剂为水，pH为5.0～6.0。


2.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，配方为尿素6.0～8.0g/L，磷酸二氢钾12.0～15.0g/L，磷酸氢二钾4.5～7.0g/L，碳酸钙0.6～0.9g/L，七水硫酸镁12.0～15.0g/L，硫酸铵5.0～7.0g/L，磷酸二氢铵12.0～14.0g/L，硫酸亚铁0.6～0.8g/L，甘油40.0g/L，PTM1溶液4ml/L，溶剂为水，pH为5.5。


3.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，培养基配方为：尿素8.0g/L，磷酸二氢钾12.0g/L，磷酸氢二钾4.5g/L，碳酸钙0.9g/L，七水硫酸镁15.0g/L，硫酸铵6.0g/L，磷酸二氢铵13.0g/L，硫酸亚铁0.8g/L，甘油40.0g/L，PTM1溶液4.0ml/L，溶剂为水，pH为5.5。


4.根据权利要求1-3任一项所述的发酵培养基，其特征在于，所述PTM1溶液配方为：五水合硫酸铜6.0g/L，碘化钠0.08g/L，一水合硫酸锰3.0g/L，二水合钼酸钠0.2g/L，硼酸0.02g/L，六水合氯化钴0.5g/L，氯化锌20.0g/L，七水合硫酸亚铁65.0g/L，生物素0.2g/L，浓硫酸5.0ml/L，溶剂为水。


5.一种发酵生产胰岛素前体的方法，其特征在于，包含以下步骤：<...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹海燕，王洪宇，张世野，王宝泉，王田园，王虹，池营，吴海洋，郭富饶，牟禹，
申请(专利权)人：吉林惠升生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22