一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法，其包括如下步骤：步骤1）培养鼠尾藻，步骤2）制备藻粉，步骤3）制备岩藻甾醇粗品，步骤4）纯化岩藻甾醇，步骤5）分离藻多糖。本发明专利技术方法提高了岩藻甾醇的合成效率，在分离提取岩藻甾醇的同时，获得了藻多糖，实现了两种有效物质的联产。

【技术实现步骤摘要】
一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法。
技术介绍
岩藻甾醇（Fucosterol）广泛存在于褐藻、海带类生物中，白色粉末，溶于非极性有机溶剂，难溶于乙醇，丙酮，不溶于水。岩藻甾醇具有十分重要的生理功能，如保持生物内环境稳定、控制糖原和矿物质的代谢、调节应激反应、防治癌症、明显降低血中胆固醇等。因此，岩藻甾醇的作用已引起各国科学家的注意。同时，岩藻甾醇可作为生产重要的医药甾药化合物中间体，如雌激素、雄激素、氢化可的松等，可调节人的生长、生殖、发育，并具有消炎、止痛等功效。甾醇类物质的合成方法主要包括生物法和化学法。化学法以有机小分子为原料出发通过化学方法全合成工艺的探索，虽然理论上可行，但是由于合成路线太长、收率低、反应性差且副产物处理困难，加之环境污染问题，严重缺乏工业生产应用价值。生物法主要是从微生物、藻类中分离提取纯化获得，具备较好的环境友好性，而且不会产生毒副作用。岩藻甾醇生物转化合成是利用生物细胞酶系进行化学反应产生新的产物。岩藻甾醇生物转化主要基于几个方面特性：生物体表现为快速生产、易于培养增殖；含有转化合成岩藻甾醇的酶系，对底物进行主动摄取。岩藻甾醇大多来源于海洋藻类，但是由于海洋藻类中岩藻甾醇含量较少，提取工艺复杂，导致岩藻甾醇价格昂贵。而现有技术对岩藻甾醇生物合成调控机制的研究较少，无法对岩藻甾醇的规模化生产带来借鉴和指导意义。从藻类中提取的海藻多糖及其衍生物具有丰富的生物活性,比如马尾藻海藻多糖具有抗氧化、抗凝血、抗病毒、抗肿瘤和抗炎等多种生物和生理活性，广泛应用于医药领域。文献1“羊栖菜中岩藻甾醇、马尾藻甾醇以及水溶性多糖的综合提取工艺，农业工程学报2006年”以羊栖菜为原料从中依次提取岩藻甾醇和羊栖菜水溶性多糖，实现羊栖菜中甾醇和多糖的综合利用。文献2“对海带的综合利用进行了研究，开发了海带联产褐藻糖胶、岩藻甾醇和岩藻黄质的生产工艺，中国硕士学位论文全文数据库2008年”，对海带的综合利用进行了研究，开发了海带联产褐藻糖胶、岩藻甾醇和岩藻黄质的生产工艺。可见，联合分离提取甾醇类物质和藻多糖在藻生物技术中具备可行性。鼠尾藻属褐藻门、圆子纲、墨角藻目、马尾藻科、马尾藻属，是我国沿海常见的野生种。鼠尾藻在我国分布范围比较广，其踪迹遍布辽宁、山东、江苏、浙江、福建、广东等省。鼠尾藻是海参、鲍鱼的优质饵料，营养丰富，还能够作为医药原料或中间体的来源。近年来，随着海参、鲍鱼养殖业的发展，自然生长的鼠尾藻被大量采收利用，资源几近枯竭。鼠尾藻含有甾醇和多糖类物质，但是含量较低，如何通过优化鼠尾藻的培养条件来提高有用物质的含量是我们需要解决的技术问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术提供了一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法，该方法提高了岩藻甾醇的合成效率，在分离提取岩藻甾醇的同时，获得了藻多糖，提高了工业附加值。本专利技术是通过如下技术方案来实现的：一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法，其包括如下步骤：步骤1）培养鼠尾藻，步骤2）制备藻粉，步骤3）制备岩藻甾醇粗品，步骤4）纯化岩藻甾醇，步骤5）分离藻多糖。进一步地，所述步骤1）培养鼠尾藻，包括：选择健康的鼠尾藻幼苗，接种到含有鼠尾藻培养液的反应池中，接种密度为60-80株/㎡，反应池中培养液的深度为30-50cm，每4d更换1次鼠尾藻培养液，培养时间为24-40d；培养条件为：光照强度3000lux，温度为22℃，光暗比为12:12，通气量为10-20ml/min·L。进一步地，所述步骤2）制备藻粉，包括：采收鼠尾藻藻体，通风处自然干燥5d，然后置于粉碎机粉碎，过50目筛，得到鼠尾藻藻粉。进一步地，所述步骤3）制备岩藻甾醇粗品，包括：将鼠尾藻藻粉添加到醇提罐中，藻粉和85%乙醇的比例为1g：5ml，升温至50℃，保温条件下，超声波辅助醇提20-40min，停止超声波处理，继续保温醇提9h；然后真空抽滤，收集滤渣和滤液，将滤液置于65℃条件下减压浓缩回收乙醇，直到浓缩至原体积的五分之一，硅胶柱层析，采用体积比为5:1的乙酸乙酯-石油醚混合液进行洗脱，收集岩藻甾醇洗脱液，进行减压浓缩蒸干，即得岩藻甾醇粗品。进一步地，所述步骤4）纯化岩藻甾醇，包括：按照5ml乙醚：1g岩藻甾醇粗品的比例添加乙醚，搅拌均匀，静置30min，再添加占岩藻甾醇粗品1%质量比的活性炭，55℃搅拌脱色30min，真空抽滤，将滤液减压蒸干，收集固形物，添加95%的乙醇至溶解，调节溶液至饱和状态，置于0℃结晶，收集晶体，干燥即得岩藻甾醇产品。进一步地，所述步骤5）分离藻多糖，包括：往步骤3）所得滤渣中添加5倍重量的水，加热至80℃，保温条件下，水提12h，然后以1000rpm离心3min，过滤去除沉淀，将滤液真空浓缩至原体积的四分之一，再添加95%的乙醇，静置60min，然后2000rpm离心5min，收集沉淀，真空干燥至恒重，即得藻多糖。优选地，所述鼠尾藻培养液为：f/2培养基+九水偏硅酸钠20-300mg/L+磷酸三铵10-200mg/L。优选地，所述超声波的功率为300W，频率为25kHZ。本专利技术还要求保护按照上述的方法得到的岩藻甾醇及其在医药中间体中的应用。本专利技术还要求保护按照上述的方法得到的藻多糖。与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果主要包括但是并不限于以下几个方面：本专利技术将先进的藻类生物制造理念引进岩藻甾醇药物生产工业，从而提高资源利用率，降低能耗，实现绿色制造可持续发展。营养控制是最为简便最为有效的调控代谢途径的方式；在鼠尾藻培育合成岩藻甾醇的过程中，对培育环境的营养物质进行有目的性的调控，设置适宜的营养盐浓度及配比，可以实现较高的岩藻甾醇生产速率。藻类通过二氧化碳固定以及光合作用来合成脂肪酸、生育酚、甾醇等化合物的合成。鼠尾藻合成岩藻甾醇过程中，二价镁离子是酶促激动剂，适量添加镁离子能够激活酶活力，从而促进甾醇类物质的合成，而本专利技术选用f/2培养基，海水作为溶剂含有大量的镁离子。高强度的光照能够促进藻类细胞快速合成脂肪酸，申请人尝试通过降低光强度的方式来减少脂肪酸合成途径的代谢流，以验证是否能够提高甾醇类物质的合成。为了平衡岩藻甾醇合成和藻类生长的关系，选择3000lux的光照强度最为合适。硅是藻类细胞壁的主要组分，在藻类合成脂肪酸的过程中，有研究发现，硅缺乏会激活乙酸辅酶A羧化酶的活力，从而促使脂肪酸的合成，还可以促进非脂类物质转化为脂类物质；而甾醇代谢和脂肪酸合成之间存在着协同作用机制，通过抑制甾醇类物质的合成可显著提高胞内的脂肪酸含量，反之亦然。本研究尝试通过添加过量的硅来调整甾醇类物质和脂肪酸的合成平衡，通过调控脂肪酸的合成来优化岩藻甾醇合成路径，使得更多的碳源流向甾醇类物质的合成，而对藻体的生产量并没有明显影响。低氮胁迫会影响鼠尾藻生长增殖，但是对脂肪酸的合成并没有不利影响，而氮源选择中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法，其包括如下步骤：/n步骤1）培养鼠尾藻，步骤2）制备藻粉，步骤3）制备岩藻甾醇粗品，步骤4）纯化岩藻甾醇，步骤5）分离藻多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种生产岩藻甾醇药物中间体和藻多糖的方法，其包括如下步骤：
步骤1）培养鼠尾藻，步骤2）制备藻粉，步骤3）制备岩藻甾醇粗品，步骤4）纯化岩藻甾醇，步骤5）分离藻多糖。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）培养鼠尾藻，包括：
选择健康的鼠尾藻幼苗，接种到含有鼠尾藻培养液的反应池中，接种密度为60-80株/㎡，反应池中培养液的深度为30-50cm，每4d更换1次鼠尾藻培养液，培养时间为24-40d；培养条件为：光照强度3000lux，温度为22℃，光暗比为12:12，通气量为10-20ml/min·L。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2）制备藻粉，包括：采收鼠尾藻藻体，通风处自然干燥5d，然后置于粉碎机粉碎，过50目筛，得到鼠尾藻藻粉。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤3）制备岩藻甾醇粗品，包括：将鼠尾藻藻粉添加到醇提罐中，藻粉和85%乙醇的比例为1g：5ml，升温至50℃，保温条件下，超声波辅助醇提20-40min，停止超声波处理，继续保温醇提9h；然后真空抽滤，收集滤渣和滤液，将滤液置于65℃条件下减压浓缩回收乙醇，直到浓缩至原体积的五分之一，硅胶柱层析，采用体积比为5:1的乙酸乙酯-石油醚混合液进行洗脱，收集岩藻甾醇洗脱液，进行减压浓缩蒸干，即得岩藻甾醇粗品...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘加林，霍萧勇，刘加海，方朝杰，张渊源，
申请(专利权)人：杭州巴洛特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33