一种珙桐苗、珙桐组织培养方法技术

本发明专利技术提供一种珙桐组织培养方法，包括以下内容：(1)外植体消毒：选取珙桐备用外植体，使用消毒液对备用外植体进行消毒处理，消毒完成后作为组培用的外植体；(2)诱导培养：将(1)中处理后的外植体置于诱导培养基中培养，得到初代培养苗；(3)继代培养：将(2)中处理后的初代培养苗置于继代培养基中培养，得到继代培养幼芽；(4)壮苗、生根培养：将(3)中培养得到的继代培养幼芽置于壮苗培养基中进行培养，培养完成后在再置于生根培养基中培养，培养完成后即可得到珙桐苗。本发明专利技术所述组培方法具有较低的污染率，启动效果好，启动培养的诱导分化率高，组培苗生长健壮。

【技术实现步骤摘要】
一种珙桐苗、珙桐组织培养方法
本专利技术属于组织培养
，尤其涉及珙桐组织培养方法及其组织培养得到的珙桐苗。技术背景珙桐为珙桐科珙桐属植物，是我国特有的单属植物，有珙桐和光叶珙桐一种一变种，是第三纪古热带植物区系的孑遗种，被列为国家珍稀濒危保护植物，具有“活化石”之称。珙桐为落叶大乔木，树冠呈广卵形或圆锥形，树形优美；头状花序棕褐色，外被两片大小不同的苞片，花序成熟时苞片颜色由绿色变白色，珙桐树具有极高的观赏价值。早在1986年珙桐就引起了国外植物学家的关注，20世纪初，国外多个国家就从我国引种珙桐，并广泛栽培。珙桐还具有极高的经济价值，其种子、果皮可榨油；内果皮还可提炼香精；其树木可作为家具的优质原料；树皮和果皮可提取拷胶。珙桐生存环境范围狭窄，仅在我国西南局部地区分布。加之珙桐内果皮坚硬、种子败育现象严重，虽然胚内无抑制物质存在，种子也很难突破果皮发育成苗。综合以上原因，珙桐很难在园林绿化中被广泛运用。如能将珙桐苗木引种成功，再结合植物组织培养技术，加快珙桐苗木的繁殖进度，则可实现濒危植物的大规模生产，其应用价值将得到充分利用，而且能够保护稀有物种的资源和种群的扩大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种组培方法，该方法具有繁殖速度快，成功率高，组织发生褐化的几率低的特点。具体的方案如下：一种珙桐组织培养方法，包括以下内容：(1)外植体消毒选取珙桐备用外植体，使用消毒液对备用外植体进行消毒处理，消毒完成后作为组培用的外植体；(2)诱导培养将(1)中处理后的外植体置于诱导培养基中培养，得到初代培养苗；(3)继代培养将(2)中处理后的初代培养苗置于继代培养基中培养，得到继代培养幼芽；(4)壮苗、生根培养将(3)中培养得到的继代培养幼芽置于壮苗培养基中进行培养，培养完成后在再置于生根培养基中培养，培养完成后即可得到珙桐苗。本专利技术一具体实施方式，(1)中，所述备用外植体选自叶片、冬芽、茎段、带芽茎段或嫩梢。本专利技术一具体实施方式，(1)中，所述消毒处理包括多级消毒，先以多菌灵的800-1500倍液浸泡备用外植体15-30min，取出用水冲洗15-25min；冲洗后的外植体用70-75％的酒精浸泡50-80s，再置于浓度为0.02-0.04％的次氯酸钠溶液中5-10min，取出用无菌水清洗，最后置于浓度为0.1-0.2％的新洁尔灭溶液中10-15min，取出用无菌水多次清洗，清除水分后备用。本专利技术一具体实施方式，(2)中，所述诱导培养基为含有维生素、萘乙酸、激动素和蔗糖的MS培养基，其中维生素、萘乙酸、激动素和蔗糖的浓度分别为0.5-1.0mg/L、0.05-0.1mg/L、0.03-0.08mg/L和10-20g/L。本专利技术一具体实施方式，(2)中，诱导培养的温度为18-25℃，湿度55-65％，光照强度1800-2100lx，每天光照总时长为10-12h，分两次光照，中间间隔1-2h；诱导培养时长为12-15d。本专利技术一具体实施方式，(3)中，所述继代培养基为含有维生素、萘乙酸、吲哚乙酸、复硝酚钠和蔗糖的AS培养基，其中维生素、萘乙酸、吲哚乙酸、复硝酚钠和蔗糖的浓度分别为0.5-1.0mg/L、0.1-0.2mg/L、0.05-0.15mg/L、0.002-0.005mg/L和15-25g/L。本专利技术一具体实施方式，(3)中，继代培养的温度为20-25℃，湿度60-70％，光照强度2000-2300lx，每天光照总时长为10-12h，分两次光照，中间间隔1-2h；继代培养时长为15-18d。本专利技术一具体实施方式，(4)中，所述壮苗培养基为含有油菜素内脂、烯效唑、萘乙酸、蔗糖和琼脂的MS培养基；所述油菜素内脂、烯效唑、萘乙酸、蔗糖和琼脂的浓度分别为0.05-0.5mg/L、0.05-0.2mg/L、0.05-0.15mg/L、10-20g/L和10-25g/L；所述生根培养基为含有油菜素内脂、吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂的MS培养基；所述油菜素内脂、吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和琼脂的浓度分别为0.05-0.3mg/L、0.01-0.05mg/L、0.01-0.05mg/L、0.1-0.2mg/L、10-20g/L和10-25g/L。本专利技术一具体实施方式，(4)中，壮苗或生根培养的温度为23-26℃，湿度55-65％，光照强度1500-1700lx，每天光照总时长为14-16h，分两次光照，中间间隔1-2h；壮苗培养时长为8-10d，生根培养时长为10-13d。本专利技术还提供了一种珙桐苗，其采用任一上述珙桐组织培养方法制备得到。本申请所述MS培养基、AS培养基均为市售培养基，如MS培养基可选自北京凯瑞基生物科技有限公司，AS培养基可选自上海远慕生物科技有限公司。本申请所维生素指的是单一的维生素或者多种维生素的复合。复硝酚钠是一种强力细胞赋活剂，与珙桐组织接触后能迅速渗透，促进细胞的原生质流动，提高细胞活力。促进组织培养过程中对各种激素和营养成分的吸收。维生素、萘乙酸、激动素和蔗糖萘乙酸、吲哚乙酸、复硝酚钠、油菜素内脂、烯效唑、吲哚丁酸与现有技术相比，本专利技术的有益效果：一、本专利技术相对于利用传统种子播种进行繁殖的方法，具有繁殖速度更快、繁殖效率更高的特点，并且繁殖的对象广泛，本申请所述方法可适用于对包括叶片、冬芽、茎段、带芽茎段或嫩梢在内的组织进行组培，丰富了繁殖对象。二、本专利技术通过多层次的消毒处理，避免了外植体所携带的病菌等干扰物质对组织培养的影响，进而减少了珙桐组织褐化的发生。本专利技术特别的在各个阶段加入不同的激素等物质，再和相应的培养基协同配合，进一步的减少了或避免了愈伤组织的褐化发生。三、本专利技术所述方法有利于工业化生产，大大的节约了人力、物力；在珙桐苗培养领域中具有极大的推广价值。四、本专利技术所述组培方法具有较低的污染率，启动效果好，启动培养的诱导分化率高，组培苗生长健壮。具体实施方式下面将对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本申请中，若无特殊申明所选用的原料、辅料均可通过市售购买得到。实施例1一种珙桐组织培养方法，包括以下内容：(1)外植体消毒选取珙桐叶片作为备用外植体，先以多菌灵的800倍液浸泡备用外植体15min，取出用水冲洗15min；冲洗后的外植体用70本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种珙桐组织培养方法，其特征在于，包括以下内容：/n(1)外植体消毒/n选取珙桐备用外植体，使用消毒液对备用外植体进行消毒处理，消毒完成后作为组培用的外植体；/n(2)诱导培养/n将(1)中处理后的外植体置于诱导培养基中培养，得到初代培养苗；/n(3)继代培养/n将(2)中处理后的初代培养苗置于继代培养基中培养，得到继代培养幼芽；/n(4)壮苗、生根培养/n将(3)中培养得到的继代培养幼芽置于壮苗培养基中进行培养，培养完成后在再置于生根培养基中培养，培养完成后即可得到珙桐苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种珙桐组织培养方法，其特征在于，包括以下内容：
(1)外植体消毒
选取珙桐备用外植体，使用消毒液对备用外植体进行消毒处理，消毒完成后作为组培用的外植体；
(2)诱导培养
将(1)中处理后的外植体置于诱导培养基中培养，得到初代培养苗；
(3)继代培养
将(2)中处理后的初代培养苗置于继代培养基中培养，得到继代培养幼芽；
(4)壮苗、生根培养
将(3)中培养得到的继代培养幼芽置于壮苗培养基中进行培养，培养完成后在再置于生根培养基中培养，培养完成后即可得到珙桐苗。


2.根据权利要求1所述珙桐组织培养方法，其特征在于：(1)中，所述备用外植体选自叶片、冬芽、茎段、带芽茎段或嫩梢。


3.根据权利要求1所述珙桐组织培养方法，其特征在于：(1)中，所述消毒处理包括多级消毒，先以多菌灵的800-1500倍液浸泡备用外植体15-30min，取出用水冲洗15-25min；冲洗后的外植体用70-75％的酒精浸泡50-80s，再置于浓度为0.02-0.04％的次氯酸钠溶液中5-10min，取出用无菌水清洗，最后置于浓度为0.1-0.2％的新洁尔灭溶液中10-15min，取出用无菌水多次清洗，清除水分后备用。


4.根据权利要求1所述珙桐组织培养方法，其特征在于：(2)中，所述诱导培养基为含有维生素、萘乙酸、激动素和蔗糖的MS培养基，其中维生素、萘乙酸、激动素和蔗糖的浓度分别为0.5-1.0mg/L、0.05-0.1mg/L、0.03-0.08mg/L和10-20g/L。


5.根据权利要求1所述珙桐组织培养方法，其特征在于：(2)中，诱导培养的温度为18-25℃，湿度55-65％，光照强度1800-2100lx，每天光照总时长为10-12h，分两次光照，中间间隔1-2h；诱导培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：李双，杜建括，
申请(专利权)人：陕西理工大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61