一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基及其应用，涉及植物组培技术领域。本发明专利技术所述培养基中以阿魏酸作为抗褐化剂，当浓度为48.5mg·L

【技术实现步骤摘要】
一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基及其应用
本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基及其应用。
技术介绍
长梗杜鹃系杜鹃属、杜鹃亚属(subg.Rhododendron)、越桔杜鹃组(sect.Vireya)、类越桔杜鹃亚组(subsect.Pseudovireya)常绿植物。其花朵质地厚实、花色鲜黄，比同属的滇越杜鹃(R.rushforthii)、羊踯躅(R.molle)、鲜黄杜鹃(R.xanthostephanum)、纯黄杜鹃(R.chrysodoron)、硫磺杜鹃(R.sulfureum)等花色更为纯正。国际上，杜鹃花的花色育种趋势为纯色花，特别是黄色和蓝色更为珍贵。更令人称奇的是，与野生杜鹃花期多集中于3～6月不同，长梗杜鹃的自然花期为11月下旬至翌年的2月上旬，在市场上有着巨大的产业发展前景。此外，长梗杜鹃的分布区极其狭窄，目前已知的仅位于云南省麻栗坡县的4个野生居群，各居群植株数为80～350株，海拔介于1183～1316m。根据IUCNRedListCategoriesandCriteria(version3.1)评估标准，长梗杜鹃已经处于极危状态[CRB1ab(i,iii,v)]。受人为干扰严重，加之种群内实生苗较少，自然更新较弱，为典型的极小种群野生植物(PlantSpecieswithExtremelySmallPopulations,简称PSESP)，野生资源状况令人担忧，亟待保护。长梗杜鹃为中国特有种，花色纯黄明亮、花期独特，具有极高的观赏价值和市场开发潜力。然而，野外由于分布区单一，数量稀少，加之人为破坏严重，已经处于极度濒危状态。因此开展针对长梗杜鹃的组培快繁研究，不仅对今后开发利用，而且对有效保护该植物资源都刻不容缓，具有重要意义，但是现有的长梗杜鹃组培体系，均存在愈伤组织褐化严重，分化能力低下的问题，从而导致难以获得高质量的长梗杜鹃组培苗。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基及其应用，利用所述培养基可显著降低长梗杜鹃在诱导愈伤组织时的褐化现象，并提高愈伤组织的分化率。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基，所述培养基以改良MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-BA2.0mg·L-1、2,4-D3.0mg·L-1、蔗糖30g·L-1、琼脂5.5g·L-1、活性炭1g·L-1、精胺4.5mg·L-1、占所述培养基体积10％的椰子汁和阿魏酸48.5mg·L-1。本专利技术还提供了所述培养基在获得长梗杜鹃分化芽中的应用。本专利技术还提供了一种基于所述培养基的获得长梗杜鹃分化芽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以未成熟的花苞为外植体，将所述外植体接种于所述培养基上进行诱导培养，得愈伤组织；(2)将所述愈伤组织接种到分化培养基上进行分化培养，得分化芽；所述分化培养基以改良MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-BA2.0mg·L-1、蔗糖30g·L-1、琼脂5.5g·L-1、活性炭1.0g·L-1、精胺4.5mg·L-1、所述分化培养基体积10％的椰子汁和阿魏酸48.5mg·L-1。优选的，步骤(1)所述诱导培养为暗培养，所述暗培养的温度为25±2℃。优选的，步骤(2)所述分化培养的温度为25±2℃。本专利技术还提供了所述培养基在长梗杜鹃组培快繁中的应用。本专利技术还提供了所述培养基在长梗杜鹃种质保存中的应用。本专利技术提供了一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基，所述培养基中以阿魏酸作为抗褐化剂，经实施例证实，当浓度为48.5mg·L-1时阿魏酸对愈伤组织的生长量抑制不明显，却能显著的降低愈伤组织的褐化指数。本专利技术还提供了所述培养基的应用，将所述培养基用于获得长梗杜鹃的分化芽或组培苗，或进行长梗杜鹃的种质保存时，选择未成熟的花苞作为外植体，将所述外植体接种到所述培养基中后，得到大量愈伤组织，将愈伤组织接种到含有相同浓度阿魏酸的分化培养基中，可使愈伤组织的分化率达到17.9％，从而在一定程度上解决了长梗杜鹃新品种组培苗难以获得而无法上市的瓶颈问题；外植体的选择还极大扩充了外植体的来源；且可省略外植体消毒的步骤，不仅节约了成本，还能提高愈伤组织质地。具体实施方式本专利技术提供了一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基，所述培养基以改良MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-BA2.0mg·L-1、2,4-D3.0mg·L-1、蔗糖30g·L-1、琼脂5.5g·L-1、活性炭1g·L-1、精胺4.5mg·L-1、占所述培养基体积10％的椰子汁和阿魏酸48.5mg·L-1。本专利技术所述改良MS的母液配方优选如表1所示，本专利技术对所述改良MS的配制方法并没有特殊限定，优选先配制母液，而后在使用前按比例混合稀释即可。表1改良MS母液配方本专利技术所述培养基中，以阿魏酸作为抗褐化剂，阿魏酸为多酚类，具有很强的抗氧化功效，同时也是一种化感物质，而多酚-蛋白质具有可逆的结合反应有关，导致阿魏酸对酶具有抑制作用，进一步抑制植物的生长。在本专利技术实施例中，高浓度的阿魏酸会降低愈伤组织诱导率，明显抑制愈伤组织的生长。在愈伤组织继代60d以后，低浓度的阿魏酸可以显著降低愈伤组织的褐化指数，并随着愈伤组织继代的时间延长效果越明显，这与阿魏酸具有强的还原性、抗氧化能力以及对PPO有抑制作用有关；当浓度为48.5mg·L-1时阿魏酸对愈伤组织的生长量抑制不明显，却能显著的降低愈伤组织的褐化指数，使愈伤组织的分化率达到17.9％。本专利技术所述培养基中，尤其是在愈伤组织诱导中，6-BA起主导作用，其浓度对愈伤组织的褐化率、褐化指数、出愈量有较大的影响，2,4-D的浓度对愈伤组织的诱导作用不显著，其浓度对愈伤组织的出愈率、褐化率、出愈量影响不显著。本专利技术对培养基中各组分的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售试剂即可。本专利技术对所述培养基的配制方法并没有特殊限定，优选将上述组分混合后调节pH值为5.8后，灭菌即可。本专利技术还提供了所述培养基在获得长梗杜鹃分化芽中的应用。利用本专利技术所述培养基，可对长梗杜鹃进行组织培养，从而获得大量愈伤组织，并利用所述愈伤组织分化出芽，从而进行完整的组培快繁体系，得到高质量的长梗杜鹃组培苗。本专利技术还提供了一种基于所述培养基的获得长梗杜鹃分化芽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以未成熟的花苞为外植体，将所述外植体接种于所述培养基上进行诱导培养，得愈伤组织；(2)将所述愈伤组织接种到分化培养基上进行分化培养，得分化芽；所述分化培养基以改良MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-BA2.0mg·L-1、蔗糖30g·L-1、琼脂5.5g·L-1、活性炭(AC)1.0g·L-1、精胺4.5mg·L-1、所述分化培养基体积10％的椰子汁和阿魏酸48.5mg·L-1。本专利技术以未成熟的花本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述培养基以改良MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-BA 2.0mg·L

【技术特征摘要】
1.一种长梗杜鹃用抗褐化愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述培养基以改良MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-BA2.0mg·L-1、2,4-D3.0mg·L-1、蔗糖30g·L-1、琼脂5.5g·L-1、活性炭1.0g·L-1、精胺4.5mg·L-1、占所述培养基体积10％的椰子汁和阿魏酸48.5mg·L-1。


2.权利要求1所述培养基在获得长梗杜鹃分化芽中的应用。


3.一种基于权利要求1所述培养基获得长梗杜鹃分化芽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以未成熟的花苞为外植体，将所述外植体接种于所述培养基上进行诱导培养，得愈伤组织；
(2)将所述愈伤组织接种到分化培养基上进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：万友名，马宏，李正红，刘秀贤，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院资源昆虫研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53