【技术实现步骤摘要】
一种检测前列腺癌的试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及技术前列腺癌检测
，特别是指一种检测前列腺癌的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
前列腺癌(prostatecancer,PCa)作为老年男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率在许多西方国家的男性恶性肿瘤中居第二位。随着我国社会的人口老龄化及诊断筛查手段的提升，我国前列腺癌发病率亦呈逐年上升趋势，前列腺癌研究的重要性日益凸显。与欧美国家相比，我国前列腺癌病死率较高，早期诊断率较低。因此，早期前列腺癌的筛查诊断在我国的男性中具有重要的意义。前列腺癌早期没有临床症状，即使有不适，也不足以引起病人的重视，因此给早期诊断带来了困难。一旦临床上出现了明显症状，往往已属病变的晚期，预后不良。目前常用的临床诊断方法有直肠指检、前列腺癌生物标志物检测和前列腺组织活检，其中生物标志物检测因其简便、经济而广受欢迎，但这些标志物单独作为诊断依据敏感性和特异性不够强。如中国专利号CN103966352B，公开了利用PCA3、CST1和CST4基因联合检测前列腺癌，此方法选择不具有...
【技术保护点】
1.一种检测前列腺癌的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，/n引物设计和合成：遵循PCR引物设计原则，参照Genebank提供的PCA3基因、PSA基因、PSMA基因和TMPRSS2:ERG基因的DNA保守区序列，分别设计一对外链引物，根据外链引物扩增所得产物设计一对内链引物，根据内链引物扩增所得产物设计一对转录引物；/n目标基因cDNA的巢式扩增：外链引物扩增cDNA，得到产物1，将产物1稀释后用内链引物进行扩增，对扩增产物稀释后，得产物2；向产物2中加入TMA反应体系进行混合反应后，离心10～20s后，进行孵育；/n检测：将孵育产物稀释后在260和280nm下，...
【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺癌的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，
引物设计和合成：遵循PCR引物设计原则，参照Genebank提供的PCA3基因、PSA基因、PSMA基因和TMPRSS2:ERG基因的DNA保守区序列，分别设计一对外链引物，根据外链引物扩增所得产物设计一对内链引物，根据内链引物扩增所得产物设计一对转录引物；
目标基因cDNA的巢式扩增：外链引物扩增cDNA，得到产物1，将产物1稀释后用内链引物进行扩增，对扩增产物稀释后，得产物2；向产物2中加入TMA反应体系进行混合反应后，离心10～20s后，进行孵育；
检测：将孵育产物稀释后在260和280nm下，测试吸光度，定量PCA3、PSA、PSMA和TMPRSS2:ERG的mRNA。
2.根据权利要求1所述的检测前列腺癌的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法还包括样本的提取，所述样本的提取，离心收集的尿液，取下层尿液沉渣进行PBS洗涤后，再离心，弃上清，得前列腺癌细胞。
3.根据权利要求2所述的检测前列腺癌的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法还包括样本RNA模板制备步骤，所述样本RNA模板制备，将前列腺癌细胞制成细胞悬液，一次离心5～20min后，将离心物室温放置3～10min，加入氯仿震荡混匀后，室温放置90～150s，二次离心10～25min，取上层水相，加入异丙醇混匀后，室温沉淀8～25min，三次离心5～20min后，加入乙醇混匀后，四次离心2～10min，向离心物中加入DEPC至离心物完全溶解，冻存。
4.根据权利要求3所述的检测前列腺癌的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述一次离心、二次离心和三次离心的条件均为9000～20000g，1～7℃，所述四次离心的条件为6500～10000g，1～7℃。
5.根据权利要求1所述的检测前列腺癌的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述PSMA基因的外链引物：
Forward5’-TCACCGGGACTCATGGGTGT-3’；
Reverse5’-GCCTGAAGCAATTCCAAGTCG-3’；
内链引物：
Forward5’-AAGGAAGGGTGGAGACCTAG-3’；
Reverse5’-ACTGAACTCTGGGGAAGGAC-3’；
转录引物：
Forward5’-TAATACGACTCACTATAGGTAGAAGGAAGGGTGGAGACCTAG-3’；
Reverse5’-TAATACGACTCACTATAGGTAGACTGAACTCTGGGGAAGGAC-3’。
6.根据权利要求1所述的检测前列腺癌的试剂盒的...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宏婷，许忠建，陈升，马跃新，费永强，张晓宇，刘森宁，贺良，王思怡，胡唐彬，
申请(专利权)人：皖南医学院，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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