一种POLN基因突变位点检测试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，涉及一种POLN基因突变位点检测试剂盒及其用途。所述的检测试剂盒包含扩增引物与延伸引物，所述的扩增引物的正向引物的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的扩增引物的反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示，所述的延伸引物的序列如SEQ ID NO.5所示，所述的POLN基因的序列如SEQ ID NO.1所示，突变后的POLN基因的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术的POLN基因突变位点检测试剂盒能够效率高、成本低的预测人员辐射敏感性。

【技术实现步骤摘要】
一种POLN基因突变位点检测试剂盒及其用途
本专利技术属于生物检测
，涉及一种POLN基因突变位点检测试剂盒及其用途。
技术介绍
目前，放射疗法仍然是现代癌症治疗的主要手段，大约50％的癌症患者需要放射治疗。但是，接受相同剂量放射治疗，患者表现出的放射毒性不同：少数人没有明显的毒性作用，大多数人在临床上有轻度或中度的毒性反应，而少数人导致严重的正常组织并发症，甚至可能危及生命。因此，有必要寻找一种与放射敏感性相关的分子标志物用于预测患者是否为放射敏感性(或放射抗性)个体。放射敏感性的预测是为了能够针对个别患者量身定制放射治疗方案以改善预后，从而一方面可以降低辐射剂量以降低对敏感个体的毒性，另一方面可以提高辐射剂量以使更多的抗辐射患者得到有效治疗。这将最大程度地控制肿瘤，同时最大程度地减少对患者的正常组织的损害。此外，在我国大约有20万的放射工作人员，放射工作人员在日常工作时要长期接受职业照射，对放射工作人员进行放射敏感性的预测有助于预防和减少职业伤害。POLNrs2022302位点位于4号染色体2174006处，等位基因为A>G，该位点所在基因是编码DNA聚合酶A型家族成员。编码的蛋白质在DNA修复和同源重组中起作用。单核苷酸多态性标记(SNP)是“第三代DNA遗传标记”，在人类基因组中存在300万个，被认为是应用前景最好的遗传标记物。SNP可以真实反映遗传差异，并与正常组织中辐射诱发的毒性有关。此外，基质辅助激光解吸电离质谱技术与传统的以测序和杂交原理为主的基因检测方法相比，在检测效率、检测通量、检测敏感性、检测精确性、检测可重复性、检测费用等方面都具有无可比拟的优势。该技术可实现384个样本同时检测，每个检测点检测只需3-5s时间，可检测pmol级，准确度达98％以上。因此，利用基质辅助激光解吸电离质谱法进行辐射敏感性判断能够快速、准确、高通量、低成本的预测人员辐射敏感性。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是提供一种POLN基因突变位点检测试剂盒，以能够效率高、成本低的预测人员辐射敏感性。为实现此目的，在基础的实施方案中，本专利技术提供一种POLN基因突变位点检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含扩增引物与延伸引物，所述的扩增引物的正向引物的序列如SEQIDNO.3所示，所述的扩增引物的反向引物的序列如SEQIDNO.4所示，所述的延伸引物的序列如SEQIDNO.5所示，所述的POLN基因的序列如SEQIDNO.1所示，所述的突变位点为POLN基因的rs2022302位点(A到G的突变)，突变后的POLN基因的序列如SEQIDNO.2所示。在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种POLN基因突变位点检测试剂盒，其中所述的扩增引物的正向引物的浓度为2-3μM。在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种POLN基因突变位点检测试剂盒，其中所述的扩增引物的反向引物的浓度为2-3μM。在一种优选的实施方案中，本专利技术提供一种POLN基因突变位点检测试剂盒，其中所述的延伸引物的浓度为3.5-4.5μM。本专利技术的第二个目的是提供上述检测试剂盒用于制备预测人员辐射敏感性的试剂盒的用途，以能够效率高、成本低的预测人员辐射敏感性。为实现此目的，在基础的实施方案中，本专利技术提供上述检测试剂盒用于制备预测人员辐射敏感性的试剂盒的用途。本专利技术的有益效果在于，本专利技术的POLN基因突变位点检测试剂盒能够效率高、成本低的预测人员辐射敏感性。具体实施方式通过如下的实施例对本专利技术的实施作进一步说明，但本专利技术的实施方式并不局限于如下的实施例。实施例1：1)样本的采集照射及染色体畸变分析采集20-30岁健康成年男性外周血，给予0、2Gy60Coγ射线照射。对2Gyγ射线照射样本进行染色体畸变分析，将人群分为易感组、一般组、不易感组。照射后血样培养52h后收获染色体，制片。每个样本分析200个中期分裂相。2)外周血基因组DNA提取提取易感组与不易感组0Gy照射样本的基因组DNA。采用北京天跟生化科技有限公司血液基因组DNA提取试剂盒，按照产品说明书进行全血基因组DNA提取，具体步骤见说明书。取样核酸定量检测A260/280在1.70～1.90之间，质量满足实验要求，可进行后续实验。3)全外显子捕获测序测序数据首先进行数据过滤，去掉低质量数据，获得CleanReads。测序需达到清洁Reads率>90％，清洁碱基>20G，清洁碱基率>90％，Q20>98％，实验样本符合要求。4)生物信息分析CleanReads与参考基因组比对，筛选差异SNP位点。参考基因组版本：GRCh37(hg19)，ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/technical/reference/human_g1k_v37.fasta.gz。利用生物信息分析，筛选出差异位点POLNrs2022302位点，见表1。表1筛选出的辐射敏感性位点SNP位点基因SNP位点位置等位基因rs2022302POLNchr4：2174006A/G实施例2：1)利用北京天跟生化科技有限公司血液基因组DNA提取试剂盒(非离心柱型；目录号：DP319)，按照产品说明书进行人全血基因组(血液来源于20-30岁健康男性志愿者)DNA提取。2)采用SEQIDNO.3和SEQIDNO.4的扩增引物对，特异性反应体系(5μl反应体系包括0.95μlH2O、0.625μlPCRBuffer(10×)、0.325μlMgCl2(25mM)、1μldNTP(2.5mM)、1μl引物、0.1μlHotstarTaq(5U/μL))进行PCR反应，反应程序为：94℃，15min；[94℃，20sec，56℃，30sec]45个循环；72℃，4min。反应产物4℃保存。3)利用SAP反应液(2μlSAP反应液包括1.53μlH2O、0.17μlSAPBuffer(10×)、0.3μlSAP酶(1U/μL))对步骤2)的反应产物进行处理，处理程序为：37℃，40min；85℃，5min。处理产物4℃保存。4)采用SEQIDNO.5的延伸引物对步骤3)的处理产物进行延伸反应，2μl反应体系包括0.755μlH2O、0.2μliPlexBuffer(10×)、0.2μliPlexTerminationmix、0.041μliPlexenzyme、0.804μl引物。反应程序为：94℃，30s；[94℃，5s，(52℃，5s，80℃，5s)5个循环]40个循环；72℃，3min。延伸产物4℃保存。5)对步骤4)的延伸产物进行纯化。取6mg树脂均匀覆盖384孔板，放置20mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种POLN基因突变位点检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包含扩增引物与延伸引物，/n所述的扩增引物的正向引物的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的扩增引物的反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示，/n所述的延伸引物的序列如SEQ ID NO.5所示，/n所述的POLN基因的序列如SEQ ID NO.1所示，突变后的POLN基因的序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种POLN基因突变位点检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包含扩增引物与延伸引物，
所述的扩增引物的正向引物的序列如SEQIDNO.3所示，所述的扩增引物的反向引物的序列如SEQIDNO.4所示，
所述的延伸引物的序列如SEQIDNO.5所示，
所述的POLN基因的序列如SEQIDNO.1所示，突变后的POLN基因的序列如SEQIDNO.2所示。


2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：原雅艺，董娟聪，左雅慧，党旭红，董豫阳，任越，张睿凤，刘红艳，张忠新，王婧洁，
申请(专利权)人：中国辐射防护研究院，
类型：发明
国别省市：山西;14