呕吐毒素降解酶DDH及其在单端孢霉烯族毒素脱毒中的应用制造技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，具体涉及呕吐毒素降解酶DDH及其编码基因和应用；本发明专利技术所涉及的呕吐毒素降解酶DDH，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明专利技术还公开了编码上述呕吐毒素降解酶DDH的基因，其DNA序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3；本发明专利技术还公开了上述呕吐毒素降解酶DDH的制备方法及其在单端孢霉烯族毒素脱毒上的应用，及其作为单端孢霉烯族毒素生物降解剂的制备方法和应用，本发明专利技术的呕吐毒素降解酶DDH在单端孢霉烯族毒素脱毒领域具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
呕吐毒素降解酶DDH及其在单端孢霉烯族毒素脱毒中的应用
本专利技术属于农业生物
，具体涉及呕吐毒素降解酶DDH及其编码基因和应用，尤其是在单端孢霉烯族毒素脱毒中的应用。
技术介绍
单端孢霉烯族毒素(Trichothecenemycotoxins)为一大类由镰刀菌产生的霉菌毒素，主要包括呕吐毒素(又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇，Deoxynivalenol，DON)、T-2毒素、雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol,NIV)、镰刀菌烯酮-X(FusarenonX,FUS)等。这类毒素容易污染小麦、大麦、玉米等农作物，常常在这些谷物粮食及动物饲料中检出，且有超标现象。这类毒素会引起动物呕吐、拒食、消化道黏膜损伤、生产性能和免疫机能下降，对畜牧养殖者造成严重经济损失。目前在饲料工业用于霉菌毒素脱毒的方法主要为两大类，一类是物理吸附脱毒，比如添加一些蒙脱石类的无机吸附剂和酯化甘露聚糖类的有机吸附剂；另一种是生物降解方法，通过微生物或其产生的酶对霉菌毒素进行生物转化，使毒素代谢生成无毒或低毒产物。生物降解方法安全、高效和环保，是目前霉菌毒素脱毒的研究热点。已报到的能够降解呕吐毒素的微生物有优杆菌(Eubacteriumsp.)、德沃斯氏菌(Devosiasp.)、诺卡氏细菌(Nocardioidessp.)和芽孢杆菌(Bacillussp.)等。关于呕吐毒素降解酶的研究报道很少，仅发现两个，其一为来源于德沃斯氏菌的脱氢酶(DepA)和醛酮还原酶(DepB)，另外一个是来源于鞘氨醇单胞菌的醛酮还原酶。其降解途径是将DON分子中C3-OH脱氢氧化生成3-keto-DON，然后生成的3-keto-DON被还原生成差向异构体3-epi-DON，与DON比这两种产物毒性均降低。目前还没其他来源的酶能够降解DON的研究报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种来源于耐盐海杆菌(PelagibacteriumHalotolerans)的呕吐毒素降解酶DDH及其在单端孢霉烯族毒素脱毒中的应用。本专利技术的目的在于提供一种具有脱毒功能的呕吐毒素降解酶DDH，该酶具有降解单端孢霉烯族毒素功能。本专利技术的另一目的在于提供上述呕吐毒素降解酶DDH的编码基因。本专利技术的另一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。本专利技术的另一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株或细胞。本专利技术的另一目的在于提供上述呕吐毒素降解酶DDH的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述呕吐毒素降解酶DDH的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种含有上述呕吐毒素降解酶DDH的生物降解剂。本专利技术的另一目的在于提供上述含有呕吐毒素降解酶DDH的生物降解剂的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供一种降解单端孢霉烯族毒素的方法。本专利技术的另一目的在于提供含有上述呕吐毒素降解酶DDH的生物降解剂在单端孢霉烯族毒素脱毒方面的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术所述的具有脱毒功能的呕吐毒素降解酶DDH的氨基酸序列可以为：SEQIDNO.1所示序列；或者SEQIDNO.1所示序列中的一个或两个氨基酸残基被取代和/或缺失和/或插入；或者与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％以上的序列一致性，优选95％序列一致性，并具有呕吐毒素降解酶DDH的功能的序列。本专利技术还提供了编码所述呕吐毒素降解酶DDH的核苷酸序列为：SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示序列；或者SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示序列中的一个或两个核苷酸残基被取代和/或缺失和/或插入；或者与SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示的核苷酸序列具有至少90％以上的序列一致性，优选95％序列一致性的核苷酸序列。SEQIDNO.1：MRQLSSKLLKMVLAGTTAFGLLAVPAFAQTAISDLAPVTDEMLANPDDGDWLAYGRAVDNYRFSPLDQINTDNVDQLQMVWARGLETGPMQTSPIVYDGVMFIANPGDTIQALDAVTGDLIWQYRRRLPDTNTLHSLGDRKRGISIYGDHLYFMSWDNFLVALDMKTGQLAWEVDRGQGTDLVSNTSGPIVANGVIVAGSTCQYSAFGCFISGHDAETGEELWRNTFIPQPGEEGDETWGNDYESRWMTGVWGQITYDPELDLVFYGSSAVGPASEVQRGTPGGTLYGTNTRFAVDPQTGEIAWRHQTLPRDNWDQECTFEMIVADTDVNPSDSMDGLRAIGASASGEGRRVLTGVPCKTGTMWQFDAETGEFLWARDTAYTNMIESIDETGLVTVNEDVILDEIGVPVEHCPAYLGGRDWPPSAFNPNTGIYYIPLNNTCQISTPRDNEPTALDVYNTDSSYTLPPEETNVGRIDAIDISTGETVWSWEQPAAQYSPVMTTAGNLLFTGGGDRYLKAFNAETGDMLWRSRLASDASGHAITYEVDGRQYVAIPAGPAGFSSALMIAEGNVDQGGSNSAVYVFALPEESEQIDNO.2：GTGAGGCAATTGTCTTCCAAACTGTTGAAAATGGTCCTTGCGGGGACCACCGCTTTCGGGCTGCTCGCCGTACCGGCGTTCGCCCAGACCGCGATCAGCGATCTGGCGCCGGTGACCGACGAAATGCTTGCGAATCCCGATGACGGCGACTGGCTCGCCTATGGTCGCGCTGTCGACAACTATCGGTTCAGCCCGCTCGACCAGATCAATACCGACAATGTCGATCAGCTTCAGATGGTCTGGGCCCGCGGCCTGGAAACCGGCCCGATGCAGACCTCGCCGATCGTTTACGATGGCGTCATGTTCATCGCCAACCCCGGCGACACCATCCAGGCTCTGGACGCTGTAACCGGCGATCTGATCTGGCAGTACCGCCGCCGCCTGCCCGATACCAACACCCTGCATTCGCTCGGTGACCGCAAGCGTGGCATCTCGATCTATGGCGACCACCTCTACTTCATGAGCTGGGACAACTTCCTTGTCGCCCTCGACATGAAGACCGGCCAGTTGGCCTGGGAAGTCGACCGTGGCCAGGGCACCGACCTTGTGTCCAACACCTCCGGCCCGATCGTGGCAAATGGCGTGATCGTCGCCGGCTCGACCTGCCAGTATTCTGCCTTCGGGTGCTTCATCTCCGGCCATGACGCCGAAACCGGTGAAGAACTCTGGCGCAACACCTTCATCCCACAGCCGGGTGAAGAGGGT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有脱毒功能的呕吐毒素降解酶DDH，其特征在于，具有：/n(Ⅰ)、如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；或/n(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或/n(III)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)所述序列具有至少90％序列一致性，优选95％序列一致性，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.具有脱毒功能的呕吐毒素降解酶DDH，其特征在于，具有：
(Ⅰ)、如SEQIDNo.1所示的氨基酸序列；或
(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或
(III)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)所述序列具有至少90％序列一致性，优选95％序列一致性，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。


2.编码如权利要求1所述呕吐毒素降解酶DDH的核苷酸，其特征在于，具有：
(Ⅰ)、如SEQIDNo.2或3所示的核苷酸序列；或
(Ⅱ)、如SEQIDNo.2或3所示的核苷酸序列的互补核苷酸序列；或
(Ⅲ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
(Ⅳ)、与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或两个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
(V)、与(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)所述核苷酸序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列，优选95％序列一致性的核苷酸序列。


3.一种包含如权利要求2所述的核苷酸的重组表达载体。


4.一种包含如权利要求2所述的核苷酸的重组菌株或细胞。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽红，马秋刚，秦晓娟，郭永鹏，计成，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11