一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒。本发明专利技术将编码COE蛋白的基因克隆至真核表达载体pPIC9K中后，转化入毕赤酵母GS115感受态细胞进行诱导表达，成功表达得到了重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白。该COE蛋白的纯化生产工艺较原核表达包涵体抗原简便易行，且COE蛋白的表达量高、纯度高，更接近病毒蛋白天然结构；利用该COE蛋白作为包被抗原，成功构建了一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒，该方法及其试剂盒的检测结果准确度高、特异性强、敏感性高、重复性好，且该试剂盒所需要的样品量少，操作简便快捷，成本低；因此，该方法及其试剂盒在检测猪流行性腹泻病毒抗体中具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒
本专利技术属于动物疫病检测
更具体地，涉及一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒。
技术介绍
猪流行性腹泻病(Porcineepidemicdiarrhea，PED)是由冠状病毒猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)引起的一种急性传染病，发病猪以呕吐、水样腹泻、脱水以及哺乳仔猪高致死率为主要特征。该病最初于20世纪70年代报道于英国和比利时(Oldham，1972)，随后包括中国、日本、韩国等在内的多个亚洲国家也先后报道本病的发生，频繁爆发，并导致严重的经济损失。猪流行性腹泻病毒(PEDV)是单链正股RNA病毒，在遗传分类上属于冠状病毒科、冠状病毒属。其基因组共编码4种主要结构蛋白，即核衣壳蛋白(N)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和纤突蛋白(S)；其中，位于病毒颗粒表面的S蛋白具有比其他任何PEDV蛋白更强的抗原性。S蛋白在介导病毒粒子进入细胞和诱导机体产生中和抗体的过程中起到关键作用，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白在检测重组猪流行性腹泻病毒抗体和/或制备检测重组猪流行性腹泻病毒抗体的试剂盒中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白在检测重组猪流行性腹泻病毒抗体和/或制备检测重组猪流行性腹泻病毒抗体的试剂盒中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述COE蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.No.1所示，编码所述COE蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ.ID.No.2所示。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述COE蛋白的制备方法为：将编码所述COE蛋白的基因克隆至真核表达载体pPIC9K中，将获得的重组表达质粒pPIC9K-COE转化入毕赤酵母GS115感受态细胞进行诱导表达，即得所述COE蛋白。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测的方法为ELISA法。


5.一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于，以重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白为包被抗原，利用ELISA法进行检测。


6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.以重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白为包被抗原用包被液包被酶标板，并封闭微孔表面未吸附位点；
S2.将待测猪血清稀释后加入酶标板的孔中，同时设置空白对...

【专利技术属性】
技术研发人员：王弘，李莉萍，杨金易，肖治理，苏晓娜，李家冬，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44