基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法技术

本发明专利技术公开了一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法。该方法是利用超高效液相色谱技术检测样品中氯化两面针碱含量，含量要求不低于0.001%。该方法首次利用超高效液相色谱技术建立了不同产地单面针及两面针的共同指纹图谱，并对差异性生物碱进行定性定量分析，明确了质量控制检测标志物及其含量标准；与现有高效液相色谱技术建立的指纹图谱相比，具有分析速度快，分析时间可明显缩短，且灵敏度高，分离效果佳，且重复性好，可操作性强，为单面针质量控制提供了提供科学依据和切实可行的质量控制标准。

【技术实现步骤摘要】
基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法
本专利技术属于中药质量控制
更具体地，涉及一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法。
技术介绍
单面针为芸香科植物蚬壳花椒ZanthoxylumdissitumHemsley或刺壳花椒Z.echinocarpumHemsley的干燥根和茎，两面针为芸香科植物两面针Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.的干燥根。二者生长于我国广东、广西、湖南、云南等山地林中。具活血散瘀、祛风活络、续筋接骨之功效，用于治疗跌打损伤，骨折等。目前单面针作为妇科千金片的主要组方成分应用于临床，主要治疗子宫内膜炎、盆腔炎、慢性宫颈炎等妇科疾病。通过对单面针的研究发现，单面针具有抗菌抗乳腺癌等活性。两面针做为我国历史悠久的传统中药，已经被《中国药典》所收录。单面针与两面针的化学成分及活性比较相似，因单面针缺乏完善的质量控制标准，而造成单面针与两面针混淆使用严重的现象，因此，单面针与两面针的比较研究亦越来越受到重视。至今为止，单面针未被《中国药典》所收录，仅在《中国药典》中收录的妇科千金片处方中出现。《湖南中药材标准》(2009版)中收载了单面针药材标准，其药用部位为蚬壳花椒及刺壳花椒的根和茎，但仍缺乏专属性和可定量的指标，无含量测定项。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有单面针质量控制标准的薄弱，在原有单面针的质量标准研究基础上，增加了指纹图谱项，采用具有分析速度快、高灵敏度超高效液相色谱(UPLC)技术，结合PCA、OPLS-DA的化学计量学方法分析单面针与两面针UPLC指纹图谱，筛选出二者差异性的化学成分，同时对其含量进行测定，明确了质量控制检测标志物及其含量标准，建立了一套单面针饮片的质量控制标准，为单面针的药效物质基础和单面针的质量控制提供科学依据。本专利技术的目的是提供一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法，是利用UPLC技术检测饮片氯化两面针碱含量，氯化两面针碱的质量比含量要求不低于0.001％。优选地，还可同时利用UPLC技术检测饮片木兰花碱含量。更优选地，还可同时利用UPLC技术检测饮片白藓碱含量。即上述的基于UPLC的单面针质量控制方法中，检测标志物可以是如下三种方案：(1)检测氯化两面针碱的含量；(2)同时检测氯化两面针碱和木兰花碱的含量；(3)同时检测氯化两面针碱、木兰花碱和白藓碱的含量。木兰花碱的质量比含量要求不低于0.1％。白藓碱的质量比含量要求不低于0.0003％。其中，所述UPLC的色谱条件如下：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18，柱长100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm；ACQUITYUPLCShueldpr18；ACQUITYUPLCCSHC18；或ACQUITYUPLCCORTECSC18+；流动相A为甲醇，流动相B为含有0.1％甲酸水；梯度洗脱条件如下所示：流速为0.3mL/min；柱温为30℃；检测波长为273nm。另外，优选地，在上述UPLC检测方法中，供试样品的提取条件为：液料比50:1～6:1，超声提取25～55min。更优选地，在上述UPLC检测方法中，供试样品的提取条件为：液料比10:1，超声提取45min。优选地，在上述UPLC检测方法中，供试样品溶液的制备方法为：样品40～60℃真空干燥至恒重，粉碎，过40～60目筛，按照50：1～6:1液料比，用30～90％甲醇浸泡12～24h，200～300W、40～100kHz超声处理25～55min。更优选地，在上述UPLC检测方法中，供试样品溶液的制备方法为：样品45℃真空干燥至恒重，粉碎，过40目筛，按照10:1液料比，用70％甲醇浸泡12h，200W、40kHz超声处理45min。优选地，在上述UPLC检测方法中，对照品溶液的制备：将氯化两面针碱、木兰花碱或白藓碱对照品分别加入甲醇中，分别制成0.2～2.0mg/ml的溶液。更优选地，在上述UPLC检测方法中，对照品溶液的制备：将氯化两面针碱对照品加入甲醇中制成0.2mg/mL的溶液。优选地，在上述UPLC检测方法中，上样量为1～5μl(优选2μl)。另外，具体检测是将对照品溶液和供试品溶液各2μl分别注入高效液相色谱仪，测定，记录35分钟色谱图，供试品指纹图谱中，应分别呈现与对照品色谱保留时间相应的色谱峰；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算2～32分钟的色谱峰，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱相似度不得低于0.90。本专利技术上述单面针饮片质量标准的建立方法，包括如下步骤：S1.样品收集：S11.收集以下产地的单面针样品：陕西省汉中市南郊区、广东省广州市天河区、陕西省榆林市青云镇、湖南省吉首市双塘镇、陕西省安康市汉滨区、湖南省吉首市丹青镇、湖北省襄阳市保康县、湖南省湘西永顺县、湖北省襄阳市樊城区、湖南省张家界永定区、湖北省襄阳市南漳县、广东省广州市南沙区、四川省眉山市青神县、广西省南宁市江南区、四川省资阳市资中县、湖南省吉首市河溪镇、广西省来宾市象州县、湖南省湘西州永顺县、广西省玉林市玉州区、广西省桂林市资源县、广东省陆丰市碣石镇、湖南省湘西州花垣县、广东省广州市海珠区、湖南省湘西州芦溪县、广东省广州市番禺区；S12.收集以下产地的两面针样品：广西玉林、湖南湘潭、湖南株洲、湖南岳阳、广西贺州、广西南宁、湖南常德、广东佛山、广东汕头、广东广州、广东清远、广东珠海、湖南长沙、湖北荆州、安徽亳州；S2.制备供试品溶液和对照品溶液，方法分别如上文所述；S3.以精密度试验、重复性试验、稳定性试验、标准曲线试验、加样回收试验确定UPLC色谱条件，如上文所述；S4.将供试品溶液按照S3的色谱条件进行UPLC检测，建立指纹图谱；S5.经过对指纹图谱分析、主成分分析和正交最小偏二乘-判别分析，筛选鉴定差异标记物，确定单面针有别于两面针的指标性成分，即白藓碱、木兰花碱、氯化两面针碱；S6.确定S5所述指标性成分的含量标准，即氯化两面针碱的质量比含量不低于0.001％、木兰花碱的含量不低于0.1％、白藓碱的含量不低于0.0003％。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法，首次利用UPLC技术建立了不同产地单面针及两面针的共同指纹图谱，并对差异性的生物碱进行了定性定量分析。给出了如下三种单面针饮片质量控制标准：(1)样品中氯化两面针碱的含量不低于0.001％；(2)样品中氯化两面针碱的含量不低于0.001％，且木兰花碱的含量不低于0.1％；(3)样品中氯化两面针碱的含量不低于0.001％，且木兰花碱的含量不低于0.1％，白藓碱的含量不低于0.0003％。与现有HPLC建立的指纹图谱相比，具有分析速度快，时间可明显缩短本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法，其特征在于，利用UPLC技术检测样品中氯化两面针碱含量，氯化两面针碱的质量比含量要求不低于0.001％；/n所述超高效液相色谱的色谱条件如下：/n色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18，柱长100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm；ACQUITY UPLCShueldpr18；ACQUITY UPLC CSH C18；或ACQUITY UPLC CORTECS C18+；/n流动相A为甲醇，流动相B为含有0.1％甲酸水；/n梯度洗脱条件如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种基于超高效液相色谱的单面针质量控制方法，其特征在于，利用UPLC技术检测样品中氯化两面针碱含量，氯化两面针碱的质量比含量要求不低于0.001％；
所述超高效液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18，柱长100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm；ACQUITYUPLCShueldpr18；ACQUITYUPLCCSHC18；或ACQUITYUPLCCORTECSC18+；
流动相A为甲醇，流动相B为含有0.1％甲酸水；
梯度洗脱条件如下所示：



流速为0.3mL/min；柱温为30℃；检测波长为273nm。


2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，同时利用超高效液相色谱技术检测样品中木兰花碱含量，木兰花碱的质量比含量要求不低于0.1％。


3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，还同时利用超高效液相色谱技术检测样品中白藓碱含量，白藓碱的质量比含量要求不低于0.0003％。


4.根据权利要求1～3任一所述方法，其特征在于，超高效液相色谱检测方法中，供试样品的提取条件为：液料比50:1～6:1，超声提取25～55min。


5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，超高效液相色谱检测方法中，供试样品的提取条件为：液料比10:1，超声提取45min。


6.根据权利要求1～3任一所述方法，其特征在于，超高效液相色谱检测方法中，供试样品溶液的制备方法为：样品40～60℃真空干燥至恒重，粉碎，过40～60目筛，按照50:1～6:1液料比，用30～90％甲醇浸泡12～24h，200～300W、40～100kHz超声处理25～55min。


7.根据权利要求1～3任一所述方法，其特征在于，超高效液相色谱检测方法中，对照品溶液的制备：将氯化两面针碱、木兰花碱或白藓碱对照品分别加入甲醇中，分别制成0.2～2.0mg/ml的溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚云，凌勇根，何娟娟，廖端芳，林丽美，
申请(专利权)人：株洲千金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43