一种复合菌剂及其发酵产物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种复合菌剂，其包括：黑曲霉AS3.316以及卷曲乳杆菌CGMCC 12743；所述复合菌剂用于发酵牛至。上述复合菌剂用于发酵牛至的方法：(1)制作牛至培养基：将新鲜牛至洗净，紫外消毒后，研磨成糊状成为牛至糊；按照如下重量份数配置牛至培养基；(2)接种黑曲霉AS3.316：将保存的黑曲霉AS3.316活化后按照1％的接种量接种于牛至培养基中，保持30℃培养48小时，期间每2小时翻动1次；(3)接种卷曲乳杆菌CGMCC 12743。

【技术实现步骤摘要】
一种复合菌剂及其发酵产物的应用
本专利技术涉及一种复合菌剂及其发酵产物的应用，属于微生物领域。
技术介绍
抗生素滥用在养殖业中问题突出,一直备受人们关注。在养殖业不断追求高生产效率的同时,抗生素替代成为一项热门研究。牛至油是世界范围内认可的天然饲料添加剂,它能较好地促进动物生长、提高动物机体免疫力,无毒副作用,是一种天然、环保、安全的理想抗生素替代品。植物牛至又名止痢草、牛膝草、小叶薄荷等,是唇形科牛至属多年生草本植物。植物牛至的花和叶均可提取牛至油,目前在饲料的应用均通过提取牛至油来添加。牛至油呈淡黄色至红棕色透明油状液体,具有百里香油似的辛辣气味,溶于乙醇和大多数非挥发性油,不溶于甘油和水。已知牛至油增强动物机体免疫力的方式是通过提高巨噬细胞的吞噬能力,增加吞噬细胞数目,促进机体免疫器官的生长发育,提高脏器指数等发挥免疫调节作用。牛至油高剂量与低剂量添加对机体免疫力产生不同效应。高剂量牛至油不利于小鼠免疫,甚至起阻碍作用；而低剂量的牛至油可提高小鼠的体液免疫效应。但是牛至油提升动物免疫力的效果很有限。本专利技术旨在提供一种用于发酵复合菌剂用于发酵牛至，可以降低成本不需要进行复杂的萃取牛至油工艺，并且提升其增强动物免疫力的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于发酵复合菌剂用于发酵牛至，可以降低成本不需要进行复杂的萃取牛至油工艺，并且提升其增强动物免疫力的效果。牛至本身含有抗菌成分，很难寻找合适的用于发酵其的菌株。我们在大量的研究实践中，发现了特定的菌株以及发酵工艺，不仅可以快速发酵牛至，而且发酵后的产物具有很有的提升动物免疫力的效果。发酵产物可以直接用于添加于饲料，不需要进行复杂的再加工。本专利技术用到黑曲霉AS3.316以及卷曲乳杆菌CGMCC12743均由市购获得。卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)CGMCC12743购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心。黑曲霉AS3.316购买于中国工业微生物菌种保藏中心。本专利技术团队在研究和实践过程中，发现首先将中国工业微生物菌种保藏中心提供的黑曲霉菌株AS3.316活化后接种于牛至中发酵，此时对牛至的生物改性，不仅可以提升其效果，而且可以降低牛至对枯草芽孢杆菌的抑制，此时灭活后进一步接种卷曲乳杆菌，可以显著增加牛至提升动物免疫力的效果。本研发团队首次将黑曲霉和卷曲乳杆菌用于发酵牛至，并且产生了很好的效果：显著提高提升动物免疫力的效果。一种复合菌剂，其包括：黑曲霉AS3.316以及卷曲乳杆菌CGMCC12743；所述复合菌剂用于发酵牛至。菌种的种子液制备：黑曲霉：称取保藏的黑曲霉菌种，接种到黑曲霉固体培养基中24小时。挑取平板中长势较好的单菌落接种至黑曲霉液体培养基中活化，培养24h后即可作为5*107(CFU/ml)黑曲霉菌种子液，培养条件：25℃，200r/min。即可作为黑曲霉酵母种子液。黑曲霉固体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。黑曲霉液体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。卷曲乳杆菌：取一环乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，厌氧培养成5*107(CFU/ml)卷曲乳杆菌种子液。上述复合菌剂用于发酵牛至的方法：(1)制作牛至培养基：将新鲜牛至洗净，紫外消毒后，研磨成糊状成为牛至糊；按照如下重量份数配置牛至培养基：牛至糊10-12份，麸皮2份，玉米粉1份，硫酸铵0.1份，磷酸二氢钾0.2份；(2)接种黑曲霉AS3.316：将保存的黑曲霉AS3.316活化后按照1％的接种量接种于牛至培养基中，保持30℃培养48小时，期间每2小时翻动1次；(3)接种卷曲乳杆菌CGMCC12743：将黑曲霉AS3.316发酵后的牛至培养基加热到80℃，保持10min，以适度灭活黑曲霉AS3.316，接种将卷曲乳杆菌CGMCC12743活化后，按照接种量1％接种入灭活后的牛至培养基，38℃，ph4-5，继续发酵6-8小时。本专利技术的优点：首先将中国工业微生物菌种保藏中心提供的黑曲霉菌株AS3.316活化后接种于牛至中发酵，此时对牛至的生物改性，不仅可以提升其效果，而且可以降低牛至对枯草芽孢杆菌的抑制，此时适度灭活后进一步接种卷曲乳杆菌，可以显著增加牛至提升动物免疫力的效果，在动物饲养上有非常重要的意义和广阔的前景。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本专利技术的具体实施例如以下说明。实施例1菌种的种子液制备：黑曲霉：称取保藏的黑曲霉菌种，接种到黑曲霉固体培养基中24小时。挑取平板中长势较好的单菌落接种至黑曲霉液体培养基中活化，培养24h后即可作为5*107(CFU/ml)黑曲霉菌种子液，培养条件：25℃，200r/min。即可作为黑曲霉酵母种子液。黑曲霉固体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。黑曲霉液体培养基：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH。卷曲乳杆菌：取一环乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，厌氧培养成5*107(CFU/ml)卷曲乳杆菌种子液。一种复合菌剂，其包括：黑曲霉AS3.316以及卷曲乳杆菌CGMCC12743；所述复合菌剂用于发酵牛至。上述复合菌剂用于发酵牛至的方法：(1)制作牛至培养基：将新鲜牛至洗净，紫外消毒后，研磨成糊状成为牛至糊；按照如下重量份数配置牛至培养基：牛至糊10份，麸皮2份，玉米粉1份，硫酸铵0.1份，磷酸二氢钾0.2份；(2)接种黑曲霉AS3.316：将保存的黑曲霉AS3.316活化后按照1％的接种量接种于牛至培养基中，保持30℃培养48小时，期间每2小时翻动1次；(3)接种卷曲乳杆菌CGMCC12743：将黑曲霉AS3.316发酵后的牛至培养基加热到80℃，保持10min，以适度灭活黑曲霉AS3.316，接种将卷曲乳杆菌CGMCC12743活化后，按照接种量1％接种入灭活后的牛至培养基，38℃，ph5，继续发酵8小时。实施例2菌种活化和制备同实施例1。(1)制作牛至培养基：将新鲜牛至洗净，紫外消毒后，研磨成糊状成为牛至糊；按照如下重量份数配置牛至培养基：牛至糊12份，麸皮2份，玉米粉1份，硫酸铵0.1份，磷酸二氢钾0.2份；(2)直接接种卷曲乳杆菌CGMCC12743：将卷曲乳杆菌CGMCC12743活化后，按照接种量1％接种入灭活后的牛至培养基，38℃，ph4，发酵8小时。显微镜观察显示，卷曲乳杆菌基本上不能增殖。这证明黑曲霉的发酵可以解除牛至本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合菌剂，其包括：/n黑曲霉AS3.316以及卷曲乳杆菌CGMCC 12743；/n所述复合菌剂用于发酵牛至。/n

【技术特征摘要】
1.一种复合菌剂，其包括：
黑曲霉AS3.316以及卷曲乳杆菌CGMCC12743；
所述复合菌剂用于发酵牛至。


2.权利要求1所述复合菌剂用于发酵牛至的方法：
(1)制作牛至培养基：
将新鲜牛至洗净，紫外消毒后，研磨成糊状成为牛至糊；
按照如下组分配置牛至培养基：
牛至糊，麸皮，玉米粉，硫酸铵，磷酸二氢钾；
(2)接种黑曲霉AS3.316：
将保存的黑曲霉AS3.316活化后接种于牛至培养基中，培养48小时，期间每2小时翻动1次；
(3)接种卷曲乳杆菌CGMCC12743：
将黑曲霉AS3.316发酵后的牛至培养基加热到80℃，保持10min，以适度灭活黑曲霉...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟诚，雷雨，蒋正芳，姜蒙，高儒松，巩娟，于婷婷，
申请(专利权)人：上海国龙生物技术集团有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31