多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途及药物制造技术

本发明专利技术公开了MEPE衍生多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途及药物，所述MEPE衍生多肽为：SEQ ID NO:1所示的多肽或SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5‑19位氨基酸组成的多肽或SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5‑19位的氨基酸组成的多肽N末端和C末端分别添加一个Cys经环化得到的环肽。本发明专利技术提供的具有抗肿瘤和抑制肿瘤转移的多肽具有分子量小、易于合成、免疫原性低等优点，对肿瘤和肿瘤的转移具有良好的治疗效果。

Application and drug of polypeptides in the preparation of anti-tumor and / or anti-tumor metastasis drugs

【技术实现步骤摘要】
多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途及药物
本专利技术属于生物医药
，具体涉及MEPE衍生多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途及药物。
技术介绍
TDL23为衍生自细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)的含23个氨基酸的肽，有报道显示，TDL23可以促进骨、软骨、牙骨的生成，可用于治疗骨与软骨相关疾病(参见专利文献1、2；非专利文献1、2、3)，但尚未见TDL23用于抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移的报道。ERG15为衍生自TDL23的多肽，由TDL23的第5-19位氨基酸组成，而cERG15是在ERG15的N末端和C末端分别添加一个Cys环化而成，同样未见ERG15和cERG15用于抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移的报道。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2008091632A2专利文献2：CN1458935A非专利文献非专利文献1：Hayashibara等人，AsyntheticpeptidefragmentofhumanMEPEstimulatesnewboneformationinvitroandinvivo.JBoneMinerRes.2004Mar；19(3):455-62.非专利文献2：LiuH等人，Dentonin,afragmentofMEPE,enhanceddentalpulpstemcellproliferation.JDentRes.2004Jun；83(6):496-9.非专利文献3：SprowsonAP等人，ASARM-truncatedMEPEandTDL23enhanceosteogenesisbypromotingosteoprogenitoradhesion.JOrthopRes.2008Sep；26(9):1256-62。
技术实现思路
基于此，针对上述技术问题，本专利技术的专利技术人通过对现有技术存的大量多肽进行筛选，意外地发现了MEPE衍生多肽SEQIDNO：1～3所示的多肽(分别命名为TDL23、ERG15、cERG15)不仅能够抗肿瘤，而且可以抑制肿瘤的转移。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：MEPE衍生多肽在抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途，所述MEPE衍生多肽为：a)SEQIDNO:1所示的多肽，命名为TDL23；或b)SEQIDNO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位氨基酸组成的多肽，命名为ERG15；或c)SEQIDNO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位的氨基酸组成的多肽经末端修饰得到的多肽，命名为cERG15。进一步地，所述多肽ERG15具有如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。进一步地，所述多肽cERG15具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。进一步地，所述药物为液体剂型或冻干粉剂。进一步地，所述肿瘤为肝癌、肺癌、食管癌、乳腺癌、胰腺癌、皮肤癌、子宫癌、直肠癌中的一种。进一步地，所述肿瘤为肝癌。本专利技术还提供了一种抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移的药物，含有上述的MEPE衍生多肽。进一步地，所述MEPE衍生多肽是所述药物中唯一或主要的有效成分。为了实现更好的治疗效果，可将本专利技术MEPE衍生多肽与现有技术常用的抗肿瘤药物联用，常用的抗肿瘤药物包括但不限于顺铂、紫杉醇、吉西他滨等。进一步地，所述药物为液体剂型或冻干粉剂。进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。本领域的技术人员可根据药物的剂型等对药学上可接受的载体进行常规选择。进一步地，所述药物中MEPE衍生多肽的有效量为0.01wt％～99.99wt％，当该药物被制成液体剂型时，优选溶剂为生理盐水。本专利技术的专利技术人通过体外细胞实验证实，本专利技术SEQIDNO：1～3所示的多肽在Transwell迁移试验和抗肿瘤和肿瘤转移试验中，表现出明显的抑制肝癌细胞HCCLM3的迁移，降低肝癌细胞HCCLM3转移至肺组织的病灶数量及降低肿瘤体积的作用，因此，可用于治疗肿瘤和对抗肿瘤的转移。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了具有抗肿瘤和抑制肿瘤转移的多肽TDL23、ERG15、cERG15，其具有分子量小、易于合成、免疫原性低等优点，对肿瘤和肿瘤的转移具有良好的治疗效果。附图说明图1为本专利技术多肽的HPLC图谱，其中图1A为TDL23，图1B为ERG15，图1C为cERG15；图2为本专利技术多肽降低肝癌细胞HCCLM3细胞迁移数量的结果图；图3为本专利技术多肽降低肝癌细胞HCCLM3细胞迁移率的结果图；图4为本专利技术多肽降低肿瘤体积的结果图；图5为本专利技术多肽降低肺转移病灶数量的结果图。具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方法，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下实施例。实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例一、多肽的合成本专利技术多肽TDL23、ERG15和cERG15采用固相合成工艺合成，纯度＞95％，TDL23、ERG15和cERG15的HPLC图谱分别为图1A、图1B和图1C，合成500mg。实施例二、Transwell迁移试验人高转移性肝癌细胞HCCLM3购自ATCC。试验方法：将冻存的HCCLM3肝癌细胞复苏，加入含适量血清的新鲜MEM培养基，37℃、CO2培养箱培养并传代备用。收集对数生长期的HCCLM3肝癌细胞，进行药物处理：对照组用无血清RMPI-1640培养基培养；实验组分别用含不同浓度(1、10、100μM)TDL23、ERG15、cERG15的无血清RMPI-1640培养基进行处理，每组处理12小时。收集各处理组细胞，计数1×105个细胞，用100μl无血清培养基重悬，加入Transwell细胞培养板的小室上室，在下室加入600μl完全培养基。37℃、5％CO2孵育24小时后，取出小室，用棉签擦去上室的细胞，4％多聚甲醛固定20min，PBS洗涤1次，结晶紫染色10min，PBS洗涤1次，显微镜下观察细胞是否穿过小孔，如有穿过终止其他实验组，并拍照统计穿过的细胞数。试验结果：与对照组相比，TDL23、ERG15、cERG15均可抑制肝癌细胞HCCLM3的迁移，表现为迁移的细胞数量降低，并且呈现明显的剂量依赖性(见图2)。其中，TDL23、cERG15的中、高剂量组和ERG15的高剂量组的抑制作用具有非常显著的统计学意义(P＜0.01)，ERG15的中剂量组的抑制作用具有显著的统计学意义(P＜0.05)。划痕试验6孔板中加入浓度为10μg/ml的纤维连接蛋白(fibronectin，FN)50μl，置于4℃冰箱过夜，次日加含10％FBS的RPMI-1640培养液于紫外线下灭菌2小本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.MEPE衍生多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途，其特征在于，所述MEPE衍生多肽为：/na)SEQ ID NO:1所示的多肽；或/nb)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位氨基酸组成的多肽；或/nc)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位的氨基酸组成的多肽N末端和C末端分别添加一个Cys经环化得到的环肽。/n

【技术特征摘要】
1.MEPE衍生多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途，其特征在于，所述MEPE衍生多肽为：
a)SEQIDNO:1所示的多肽；或
b)SEQIDNO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位氨基酸组成的多肽；或
c)SEQIDNO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位的氨基酸组成的多肽N末端和C末端分别添加一个Cys经环化得到的环肽。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，b)所述多肽具有如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。


3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，c)所述多肽具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。


4.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋燕，许元生，王华，李天然，
申请(专利权)人：广州领晟医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44